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1、用尼氏染色法观察小鼠海马及 皮层中神经元的分布情况神经生物学实验室一、实验原理n尼氏染色法（Nissl staining）是德国病理学家 F.Nissl（1860-1919）于1892年创立的，碱性染料染 色后发现了神经元胞体中的尼氏体。n神经元是神经系统的结构和功能单位,尼氏体是神经 元的特征性结构之一,尼氏体（Nissl body）又称虎 斑,广泛存在于神经元胞体和树突内,具有嗜碱性的特 点。n以往显示神经元中尼氏体多采用苏木精-伊红染色方法, 此法虽然也能观察到胞质中嗜碱性颗粒,但结构不甚清晰 ,胞核、核仁、尼氏体颗粒模糊,分界不清,轴突、树突难 以辨认。n在尼氏染色中尼氏体清晰可辨,核
2、、核仁也非常清晰,而 且很容易区分轴突和树突,收到了既可辨认器官又可同时 观察细胞质特殊结构的效果。尼氏染色法的优势何在？n尼氏染色中尼氏体受染后呈块状(形如虎 斑) 或颗粒状,核周围尼氏体颗粒较大, 近边缘处较小而细长。在电镜下观察， 尼氏体主要由平行排列的粗面内质网和 核糖体组成。n尼氏体的主要功能是合成蛋白 质，作为神经活动时所需，如 细胞中的某些成分的更新以及 产生神经递质有关的蛋白质和 酶类。轴突端的蛋白质大都来 自胞体的尼氏体。神经元在兴 奋传导过程中，不断消耗某些 蛋白质物质，尼氏体可合成新 的蛋白质以补充这种消耗。 n在生理情况下, Nissl小体大而 数量多，说明神经细胞合成
3、蛋 白质的功能较强；相反在神经 细胞受到损伤时，Nissl小体的 数量会减少甚至消失。尼氏体的功能是什么？n用于尼氏染色的常用染料有：焦油紫（cresyl violet）、硫堇（thionine）和甲苯胺蓝 (toluidine blue)。二、实验步骤1、昆明小鼠以0.48%的戊巴比妥钠0.02ml/g腹腔注射麻 醉，待其麻醉后，迅速用手术剪刀及镊子剪开肚皮使 其心脏暴露，将针头从右心房插入，并用动脉夹夹住 ，剪破静脉窦。 2、灌流和固定：先用生理盐水灌注（约30min），待小 鼠肝脏变白后，再换成4%多聚甲醛灌流，直到小鼠肝 脏变硬，尾巴僵硬为止（约2h）。 3、待充分固定后，剪下小鼠头部
4、并开颅取脑，再浸入4% 多聚甲醛1d。4、将脑组织用502胶水固定，在振荡切片机上切片， 厚度为25m。 5、将切好的脑片浸于0.5%的明胶中，用毛刷将脑片 贴到预先用明胶处理的载玻片上，然后自然风干 。 6、切片染色：将脑片置于0.5%甲苯胺蓝（母液：甲 苯胺蓝1g，无水乙醇100ml。使用时按1:1比例与 新鲜的0.1%NaCl溶液混合成工作液）或焦油紫（ 焦油紫0.1g；蒸馏水99ml；1%冰醋酸1ml）中室温 下染色30min；7、切片用蒸馏水冲洗3次； 8、切片依次浸入75%、80%、95%的酒精中，每次约1min ； 9、切片入特殊分色液中分色，约15s； 10、切片浸入100%酒精I，II，各1min； 11、切片浸入二甲苯I，II中透明，各5min； 12、中性树胶封片。 13、显微镜下观察照相并对尼氏染色阳性神经元进行计 数。 三、注意事项Nissl染色液的染色能力很强，并且染 色后很难去除，请注意勿使染色液沾染皮肤 和衣物等。四、思考题除了尼氏染色法以外，你知道还有哪些 方法可以对神经元进行特殊的染色，并详述 其原理和步骤。
