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1、 聚酰胺的使用方法刘丽敏 2006.10.21产品介绍o质量指标:分子量:1400017000比表面:5 10m2/goPH值: 67o产品价格:3060目 180元/KG60100目 240 元/KG100目以上 300元/KG o溶解度:溶于浓盐酸,甲酸,微溶于醋酸,苯酚等 溶剂,不溶于水,甲醇,乙醇,丙酮,乙醚,氯仿 和苯等常用有机溶剂,对碱较稳定,对酸的稳定性 较差,尤其是无机酸,在温度高时更敏感。吸附原理o聚酰胺是由酰胺键聚合形成的高分子化合物 。其酰胺基可与羟基酚类,酸类,醌类,硝 基等化合物以氢键形成结合而被吸附 ,其 脂肪长链可作为分配层析的载体。聚酰胺在 含水系统中层析时,聚
2、酰胺作为非极性固定 相,其层析行为反向柱层析;在非水溶剂系 统时,聚酰胺作为分配层析的载体,其层析 行为为正向柱层析。应用范围o聚酰胺特别适应于多元酚类化合物的分离,如 黄酮、醌类、酚酸、含羰基化合物、羧基化合 物等。 例如:葛根素中提取葛根黄酮、茶叶提取茶多 酚、 人参中提取人参皂苷、银杏叶中提取银杏 黄酮、甘 草中提取甘草皂苷、甜叶菊中提取甜 菊苷、发酵液中提取维生素和抗生素等成份 o对鞣质吸附强,用于将植物粗提物中的鞣质除 去。前处理o新买的聚酰胺取聚酰胺以90-95%乙醇浸泡,不断搅拌,除 去气泡后装入柱中。用3-4倍体积的90-95% 乙醇洗脱,洗至洗脱液透明并在蒸干后无残渣 (或极
3、少残渣)。再依次用2-2.5倍体积 5%NaOH水溶液、1倍体积的蒸馏水、2-2.5 倍体积的10%醋酸水溶液洗脱,最后用蒸馏水 洗脱至pH中性,备用。前处理o用过的聚酰胺一般用5%NaOH水溶液洗脱,洗至NaOH水溶液 颜色极淡为止。有时因某些鞣质与聚酰胺又不可逆 吸附,用NaOH水溶液很难洗脱,可用5%NaOH 在柱中浸泡,每天将柱中的NaOH水溶液放出一次 ,并加入新的5%NaOH水溶液,这样浸泡一周后 ,鞣质可基本洗脱完。然后用蒸馏水洗脱至pH8-9 ,再用2倍量的10%醋酸水溶液洗脱,最后蒸馏水 洗脱至pH中性,重复使用。聚酰胺吸附法的操作o1、装柱:一般将颗粒状聚酰胺混悬于水中,使
4、其充分 膨胀,然后装柱,让聚酰胺自由沉降;当用非极性溶剂 系统时候,则用组分中低级性的溶剂装柱。o2、稀释适当浓度上样:一般每100ml聚酰胺上样1.5- 2.5g,样品先用洗脱溶剂溶解,浓度为20%-30%。 水溶性化合物直接上样;若提取物水溶性不好,则用挥 发性有机溶媒溶解、拌适量聚酰胺、挥干或减压蒸干、 干法装入柱顶。o3、水洗:先用水洗脱。聚酰胺吸附法的操作o4、醇洗:在水中递增乙醇浓度至浓乙醇溶液,或氯仿 、氯仿-甲醇,递增甲醇至纯甲醇洗脱。若仍有物质未 被洗脱,可用稀氨水或稀甲酰胺溶液洗脱,分段收集。o5、找到最佳吸附比:先小量试验找到最佳吸附比。o6、放大:根据小试及最佳吸附比进
5、行放大试验。o7、聚酰胺的回收:使用过的聚酰胺一般用5%氢氧化 钠溶液洗涤,然后水洗,再用10%醋酸液洗,然后用 蒸馏水洗至中性,即可。黄酮类化合物的分离对于分离黄酮类化合物来说,聚酰胺是较理想的吸附剂 。其吸附强度主要取决于黄酮类化合物分子中的羟基数 目与位置。一般有以下规律:1、苷元相同,连接糖越多,吸附力越大,流出越慢。 2、母核上增加羟基,洗脱速度相应减缓。 3、对位、间位酚羟基使吸附能力 邻位酚羟基。 4、不同类型的黄酮的流出顺序一般是:异黄酮 二氢 黄酮醇黄酮 黄酮醇。 5、分子中芳香核、共轭双键多者则吸附力强,晚出柱 。 6、若形成分子内氢键则吸附力减弱。聚酰胺柱层析的溶剂洗脱系
6、统 o含水系统洗脱能力:碱液甲醇水o溶剂洗脱能力与溶剂极性相关可使化合物得到较好的 分离。o选择系统时,可以将样品加入上述溶剂系统中,观察 样品在聚酰胺薄膜的层析行为,然后确定溶剂系统。 含水溶剂系统非水溶剂系统 甲醇-水(4:1) 乙醇-水(2:1)甲醇-乙 酸-水(90:5:5 )氯仿-甲醇(94:6) 苯-甲醇(3:1/7:3 )聚酰胺薄膜色谱常用的溶剂系统黄酮体苷元 黄酮体苷氯仿-甲醇(94:6/96:4) 氯仿-甲醇-丁酮(12:2:1) 苯-甲醇-丁酮(90:6:4/84:8:8 ) 氯仿-甲醇-甲酸(60:38:2) 氯仿-甲醇-吡啶(70:22:8) 氯仿-甲醇-甲酸(60:3
7、8:2)甲醇-醋酸-水(90:5:5) 甲酸-水(4:1);乙醇( 4:1)丙酮-水(1:1);异丙 醇-水(3:2)30-60%醋酸; 氯仿-甲醇-丁酮(64:25; 10)乙酸乙酯-95%乙醇( 6:4)氯仿-甲醇(7:3);正 丁醇-乙醇-水(1:4:5)聚酰胺薄膜色谱常用的溶剂系统酚类丙酮-水(1:1)苯-甲醇-醋酸(45:8:4) ;环己烷-醋酸(93:7) ;10%醋酸 醌类丙酮-水(1:1) ;正己烷-苯-醋酸(45:8:4 ) ;石油醚-苯-醋酸(10:10:5) 糖类丙酮-水(1:1)苯-甲醇-醋酸(45:8:4) ;环己烷-醋酸(93:7) ;10%醋酸 氨基 酸衍 生物苯
8、-乙醇(8:2/9:1);50%醋酸;甲酸-水(1.5: 100/1:1)乙酸乙酯-甲醇-醋酸(20:1:1); 0.05mol/L磷酸钠-乙醇(3:1)聚酰胺薄膜色谱常用的溶剂系统生物碱环己烷-乙酸乙酯-正丙醇-二甲基胺(30: 2.5:0.9:0.1) ;水-乙醇-二甲基胺(88:12:0.1)甾体、萜 类己烷-丙酮(4:1);氯仿-丙酮(4:1)甾体苷甲醇-水-甲酸(60:35:5); 乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸(50:20:25:5)聚酰胺与大孔树脂的区别o吸附原理不同:大孔树脂是物理吸附原理; 聚酰胺是化学吸附原理,氢键吸附,用于酚 类、黄酮类、醌类成分的分离。 o大孔树脂的分离效果没
9、有聚酰胺好。若是粗 粉可以用大孔树脂进行分段,聚酰胺可用于 黄酮类成分的细分或纯化。o聚酰胺树脂可以使用其干柱层析功能,在分 离黄酮的过程中作用也是很大的,而大孔树 脂则没有此功能。聚酰胺与大孔树脂的区别o聚酰胺树脂可以首先用聚酰胺薄膜展开系统,而大 孔树脂没有薄层o树脂进行新药研发,其新药若用大孔树脂制备,必 须有打孔的残留检查,而聚酰胺目前还没有正式的 文件要检查其残留o聚酰胺上样时,其样品中的鞣质会对主子产生死吸 附,大孔出现这种现象很少o大孔的可选择类型比聚酰胺多,而且还增加了许多 键合类型,如ASD型,其键合了酰胺键,增加了其 选择性。聚酰胺的不足及解决方案聚酰胺柱层析的不足:o比如机械强度不大,o粒度不均匀,分离时流速较慢o一些小分子杂质混入的问题 采用的解决方案有:o1.装柱前先过筛o2.装柱时用5%甲醇或10%盐酸预先除去小分子杂 质o3.与硅藻土混合制粒以增加机械强度。