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1、* * * * 制 药 厂操作标准-质量管理编 码SOP-QC-009-01 文件名称沉降菌测试标准操作规程页 数4-1实施日期制 订 人审 核 人批准人制订日期审核日期批准日期制订部门质管部分发部门检验室目目 的：规范沉降菌测试标准操作规程，确保测试结果的准确性。的：规范沉降菌测试标准操作规程，确保测试结果的准确性。适用范围：沉降菌的测试。适用范围：沉降菌的测试。责责 任：沉降菌测试人员执行本规程，检验室主任负责监督检查本规程的正确实施。任：沉降菌测试人员执行本规程，检验室主任负责监督检查本规程的正确实施。程程 序：序：1. 方法概述：本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生
2、物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。2. 所用的仪器和设备2.1 高压消毒锅使用时应严格按照仪器说明书操作。2.2 恒温培养箱必须定期对培养箱的温度计进行定检。2.3 培养皿一般采用 90mm15mm 的硼硅酸玻璃培养皿。2.4 培养基普通肉汤琼脂培养基药典认可的培养基。其配制方法见附录 A（标准的附录）3.测试步骤3.1 采样方法将已制备好的培养皿，按洁净室沉降菌采样点布置图的要求放置，打开培养皿盖，使培养基表面暴露 30 分钟，再将培养皿盖盖上后倒置。3.2 培养*
3、 * * * 制 药 厂操作标准-质量管理编 码SOP-QC-009-01文件名称沉降菌测试标准操作规程页 数4-23.2.1 全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。3.2.2 在 30-35培养箱中培养，时间不少于 48h。3.2.3 每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。可每批选定 3 只培养皿作对照培养。3.3 菌落计数3.3.1 用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用 5-10 倍放大镜检查，有否遗漏。3.3.2 若培养皿上有 2 个或 2 个以上的菌落重叠，可分辨时仍以 2 个或 2 个以上菌落计数。4.注意事项4.1 测试用具要作灭菌处理，以确保测试的
4、可靠性，准确性。4.2 采取一切措施防止人为对样本的污染。4.3 对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。4.4 由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。4.5 采样前仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质，破损或污染的应剔除。5.测试规则测试规则5.1 沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速控制在规定值内。5.1.2 沉降菌测试前，被测试洁净室（区）已经过消毒。5.1.3 测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要
5、求，并在报告中注明测试状态。5.2 测试人员* * * * 制 药 厂操作标准-质量管理编 码SOP-QC-009-01文件名称沉降菌测试标准操作规程页 数4-35.2.1 测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。5.2.2 静态测试时，室内测试人员不得多于二人。5.3 测试时间5.3.1 对单向流，如 100 级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统运行不少于10min 后开始。5.4 沉降菌计数5.4.1 采样点数目及其布置5.4.1.1 最少采样点数目沉降的最少采样点数可按表 1 确定。表 1 最少采样点数目洁 净 度 级 别面 积m21003000001010-2020-404
6、0-100100-2002-348164022223注：表中的面积，对于单向流洁净室，是指送风面面积。对于非单向流洁净室是指房间的面积。在满足最少测点数的同时，还宜满足最少培养皿数，见表 2。表 2 最少培养皿数洁净度级别所需 90mm 培养皿数（以沉降 30 分钟计）100300000142 * * * * 制 药 厂操作标准-质量管理编 码SOP-QC-009-01文件名称沉降菌测试标准操作规程页 数4-45.4.1.2 采样点的布置采样点的位置可以同悬浮粒子测试点。a) 工作区采样点的位置离地 0.8m-1.5m 左右（略高于工作面） 。b) 可在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。
7、5.5 记录测试报告中应记录房间温度、相对湿度、测试状态。测试报告见 REC-QC-012-005.6 结果计算5.6.1 用计数方法得出各个培养皿的菌落数。5.6.2 平均菌落数的计算，见式（1） 。M1+M2+Mn平均菌落数 M= (1)n式中：M 平均菌落数；M1 1 号培养皿菌落数；M2 2 号培养皿菌落数；Mn n 号培养菌落数；n 培养皿总数。5.7 结果评定用平均菌落数判断洁净室（区）空气中的微生物。5.7.1 洁净室（区）内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准。5.7.2 若某洁净室（区）内的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。附件：1.洁净室（区）沉降菌采样布置图。2.附录 A附 录 A（标准的附录）培养基的准备及灭菌培养基的准备及灭菌A1 培养基的准备培养基的准备培养基应购买省药检所以的上国家认可的培养基。A2 培养基平皿的制备培养基平皿的制备A2.1 将 90mm 的培养皿置于 121湿热灭菌 20min 或 160干热灭菌 2h。A2.2 将培养基加热熔化，冷至 45时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿，每皿约 15mL。A2.3 待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于 30-35恒温培养箱中培养 48h，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用。注：制备好的培养基平皿宜在 2-8的环境中存放。
