抗乙型肝炎病毒新药研究进展

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1、抗乙型肝炎病毒新药 研究进展重庆医科大学病毒性肝炎研究所 黄爱龙乙型肝炎v由乙型肝炎病毒（Hepatitis B Virus,HBV)感染引起的肝脏疾病。乙型肝炎病毒v结构特征v基因组特征v生物学特征HBV感染现状-分布及危害携带者癌症患者新增病例/年 死亡率/年全球3.5亿3000万100万200万其中，携带者中亚太地区占3/4，中国有1.3亿，占全球1/3，病死率居各类传染病首位。Percentage long-term HBV carriers (350 million long-term carriers):Percentage long-term HBV carriers (350

2、million long-term carriers):8% - High 8% - HighWhere Are The Long-Term HBV Carriers? Margolis Margolis et alet al 1991 1991HBV感染的自然史急性清除（成人：90%）HBV慢性携带（婴幼儿：90%）25-40%无症状 乙型肝炎肝硬化肝 癌乙型肝炎发病机理 免疫发病机理感染结果免疫应答状态急性清除完全应答无症状携带不应答各种肝病应答紊乱免疫发病机理目前认为，HBV感染后造成的肝细胞损伤不是病毒复制的结果，而是机体产生的特异性免疫应答的的结果。机体在产生免疫应答清除病毒的同时，

3、损伤了感染的肝细胞。其中，细胞免疫应答，尤其是CTL反应起了关键性的作用。乙型肝炎可怕吗？不可怕，理由：v血液途径传播 v婴幼儿（接种疫苗）v成人（90%急性清除）vWHO目标 乙型肝炎可怕吗？可怕，理由：v3.5亿携带者v3000万癌症患者v治疗效果不理想乙型肝炎治疗v抗炎保肝治疗v抗肝纤维化治疗v免疫调节治疗v抗病毒治疗专家建议：以抗病毒为主的综合治疗治疗药物近十年，针对病毒性肝炎药物的研究，取 得了相当多的进展，国外已上市的用于抗乙、 丙型肝炎病毒的药物有十余种，进入临床试验 的药物有二十余种。v 干扰素仍为目前治疗乙、丙型肝炎的主要药物 。v 核酸类似物的研究进展较快，可能不久的将来

4、会突破。v 抗病毒基因治疗、反义核酸、DNA疫苗等也获 得了可喜的苗头。治疗策略v药物设计的最高原则（高效低毒与特异性）v来自急性感染恢复期病人的启示v来自病毒生活周期的启示嗜肝DNA病毒生活周 期w 入侵 (识别, 吸附, 穿膜）w 脱壳w 转位 (形成 cccDNA)w 逆转录w 病毒蛋白表达w 装配w 颗粒释放 (或再循环)核苷酸衍生物HBV多聚酶模型核苷酸结合槽商品名 贺普丁药物名称 拉米夫定化学名 （2R-顺式）-4- 氨基-1-（2-羟甲基-1，3-氧 硫杂环戊-5-基）-1H-嘧啶- 2-酮C8H11N3O3S 229.26品名和结构式拉米夫定负链单链DNAMDYD拉米夫定和野生

5、株dCTPHBV -多聚酶（野生型）高亲合力Y = 酪氨酸 M = 蛋氨酸 D = 天冬氨酸拉米夫定能有效地抑制HBV的 复制v核苷类似物 “-2，3-双脱氧-3硫代胞嘧啶”v对HBV&HIV的抗病毒活性v能抑制依赖RNA的DNA多聚酶拉米夫定有较好的药代动力学 特性v最佳推荐剂量为100mg/dv迅速吸收v肝脏代谢率低v从尿中以原型排泄v中重度肾功能不全患者需作剂量调整v无显著药物间相互作用研究周数改变的 中位数01020304050Schiff DienstagLaiDienstag Schiff Lai Schalm拉米夫定-100-80-60-40-20010安慰剂拉米夫定迅速地抑制了

6、血清HBV DNA水平核苷酸抑制减弱亲合力降低VDYD拉米夫定和变异株Y = 酪氨酸 M = 蛋氨酸 D = 天冬氨酸负链单链DNAHBV -多聚酶（突变型）拉米夫定发生YMDD变异 2年的患者，及未发生 变异的患者的HBV DNA均呈低水平YMDD 变异株 (n =24) 野生株 (n=95)0102030405060708090013263952657891 104 117 130 143 156 时间 (周)l l拉米夫定治疗期间拉米夫定治疗期间 l l156156周时，周时，HBV DNAHBV DNA中位数明显低于基线水平中位数明显低于基线水平YMDD YMDD 变异株出现 HBV

7、DNA(pg/mL)HBV DNA聚合酶 的氨基酸序列 FLLAQ YMDD 密码子 528 L to M 552 M to V or I组变异 FLMAQ YVDD 组变异 Y I DD 组变异 FLMAQ Y I DD F=苯氨酸 Q=谷氨酸 D=天冬氨酸 L=亮氨酸Y=酪氨酸 V=颉氨酸 M=蛋氨酸 I=异亮氨酸 在YMDD基序中的氨基酸的改变57%野毒株病人：HBeAg阳性的慢性乙肝病人 n=33514%YMDD变异株10%混合型19% HBV DNA阳性（PCR）无变异=76%拉米夫定治疗一年后变异的发生率YMDD变异株的特性v复制活性比野生株弱v使用拉米夫定的最初36周内，极少检测

8、到 YMDDvvYMDDv检测率:1年后 = 24% (综合的资料)2年后 = 42%3年后 = 53%4年后 = 67%DAPD双脱氧鸟嘌呤类核苷酸DXG的前体药物 。v 大白鼠体内实验证实90%的DAPD在腺苷酸脱氨酶的作 用下可迅速转化为DXG，在血清中的半衰期为2-8小 时v 用该药治疗土拨鼠肝炎模型连续12周，同拉米夫定一 样可以降低血清中WHV DNA的水平。DAPDv 2.2.15细胞实验显示DAPD有抑制HBV的作用。v 体外研究发现，该药对拉米夫定和泛昔洛韦产生耐 药的HBV毒株有效，与抗病毒药物enviroxime(恩韦 肟)有协同抗HBV的作用。v 针对AIDS治疗的I/

9、II期临床试验正在进行。治疗 HBV感染的II期临床试验计划在2001年第二季度开 始。Entecavir (恩替卡韦）q 特异性抑制HBVq 0.1mgETV即可达到100mgLVD的作用q 正在中国申请作II期临床验证（全球多中心，中国7家单位）q 用土拨鼠肝炎模型比较ETV（0.1mg/Kg/d）与LVD （5mg/Kg/d）的抗病毒效果，持续用药12周，ETV 在停药2周后仍不能检测到血清中的病毒DNA，而 LVD出现了病毒DNA反跳。q 2000年5月，在第十届欧洲临床微生物和感染疾病 会议上报道entecavir与adefovir合用有协同抗 HBV作用。q 2000年9月，在加拿

10、大多伦多第四十届ICAAC会议 上，有关该药的安全性和抗病毒活性的研究有了 报道，发现有良好的耐受性，没有与剂量相关的 毒副反应。Entecavir (恩替卡韦）q 小鼠在10、50mg/Kg/d剂量下，连续用Clevudine30 天，无明显毒性反应；对人骨髓细胞及H1细胞线粒 体无明显毒性。q 在土拨鼠肝炎模型实验中，用Clevudine10mg/Kg/d, 持续12周，血清WHV DNA下降1000倍，表面抗原 下降100倍，肝内WHV DNA复制中间体下降10倍， 治疗结束后没有病毒标志物反跳。q 在鸭乙肝动物模型中也观察到相同效果。已经证实 与抗病毒药物enviroxime(恩韦肟)

11、、3TC、FTC、DAPD 、cidofovir有协同作用。q 2000年9月-11月，相关的I/II期临床试验已陆续见诸 报道。Clevudineq Novirio制药公司正在研制的一系列有抗HBV作用的 -L-2-脱氧核苷酸类药物。q 计划于2001年1-3季度进入临床试验。q L-dA和L-dT口服后能被吸收利用, L-dT的口服生物 利用度可达70%,而L-dC要被双磷酰酯甘油修饰后才 能被吸收利用, 口服生物利用度较低。q 土拨鼠肝炎模型证实用L-dT口服10mg/Kg/d的剂量 ，可使病毒降低3-9logs，而L-dC用相同剂量仅降低 病毒1-5logs，L-dT与L-dC合用有协

12、同作用。L-dT L-dC L-dAq Enzo Biochem和纽约艾伯特爱因斯坦医学院合作 开发的具有免疫调节及抗病毒作用的寡核苷酸药物 。 q 于2000年6月开始慢性乙型肝炎治疗的II期临床试 验。q I期临床试验结果显示15例患者用EHT-899口服治 疗20周，均可以明显改善疾病症状、降低肝脏转氨 酶、减少病毒含量。q 动物实验显示EHT-899可以抑制小鼠肝癌的生长， 提示该药有潜在的治疗HBV相关性肝癌和其它癌症 的作用。EHT-899q 由美国Emory大学研究、Triangle 制药公司 获得生产许可证的 Emtricitabine(FTC),是与 拉米夫定结构相近的硫代嘧

13、啶核苷类药物。q 已于1998年着手进行抗HIV的II/III期临床试 验，抗HBV也进入I/II期临床试验阶段。Emtricitabine(FTC)q 临床前研究表明，该药没有与剂量相关性的毒副作用 ，在100mg/d的剂量下，其抗病毒活性可以达到最大 活性的90%；增加剂量到200mg/d，抗病毒活性仅增 加5%。q 应用转基因小鼠模型及土拨鼠肝炎模型的动物实验证 实，FTC可以显著抑制血液中嗜肝病毒DNA水平，停 药1周后，同拉米夫定一样，仍有DNA水平回升。 q 初步的临床试验报道，乙肝患者用25mg/d、200mg/d 剂量，持续56天，血清中HBV含量分别可以下降 2.0log10

14、和4.3log10。但尚无与其它核酸类似物疗效比 较的研究报道。Emtricitabine(FTC)干 扰 素1.Interferon alfacon-1Interferon alfacon-1IFN-1 Amgen Inc 2.Roferon-ARoferon-A IFN-2Hoffman-La Roche Inc3.Interferon alfa-n3Interferon alfa-n3 IFN-3Interferon Sciences Inc 4.PEG-Intron PEG-Intron (聚乙二醇长效干扰素) Enzon Inc 5.Interferon(gamma1b)Interf

15、eron(gamma1b) IFN-1b Genentech Inc国外已上市的用于抗乙、丙型肝炎病毒的药物干扰素同种细胞受体干扰素激活基因（ISG）ISG-mRNA抗病毒蛋白2-5AS磷酸二脂酶 蛋白激酶 2-5A核酸酶激活病毒mRNA降解tRNA 的pCpCA末端降解病毒蛋白转译抑制病毒蛋白合成起始受阻抑制病毒复制IFN 在转录和转译水平抑制病毒复制蛋白合成的起始因子磷酸化重组重合干扰素（CIFN）系由美国安进 公司开发，商品名为：干复津。本品于1997年 10月由美国食品药品管理局（FDA）批准治疗 慢性丙型肝炎，于同年12月由我国卫生部批准 进口。 IFNa可分成2025种亚型，其生物活性各 异。通过对多种天然a亚型干扰