维生素c含量测定方法

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1、维生素C含量测定 方法综述 摘要目前研究维生素C测定方法的报 道较多，如滴定法、光度分析 法、高效液相色谱法等，各种 方法各有特点。特别是高效液 相色谱法是近年来发展较快的 一种方法。本文对近年来有关 维生素C的测定方法进行了综述 。关键词维维生素C 滴定法 光度分析法高效液相色普法等 概述维生素C是可溶于水的无色结晶，是一种分子结构 最简单的维生素。维生素C有防治坏血病的功能， 所以在医药上常把它叫做抗坏血酸。维生素C能保 持巯基酶的活性和谷胱甘肽的还原状态，起解毒 作用等。其广泛存在于植物组织中，新鲜的水果 、蔬菜，特别是枣、辣椒、苦瓜、柿子叶、猕猴 桃、柑橘等食品中含量尤为丰富。准确测定

2、维生 素C的含量，对饮食健康、医疗保健都具有十分重 要的意义。近年来报道的测定方法主要有滴定法 、光度法、高效液相色谱法等。维生素C的结构式维生素C：六碳的多 羟基内酯测定方法测定方法滴定法测定滴定法测定 维生素维生素C C分光光度测分光光度测 定维生素定维生素C C高效液相色谱法高效液相色谱法 测定维生素测定维生素C C1 滴定法测定维生素C1.1 2，6一二氯靛酚法1.2 微量滴定法2,6-二氯酚靛酚滴定法测定维生素C含量v其能还原2,6-二氯酚 靛酚染料。v维生素C具有还原性 的烯二醇基，我们通 过氧化还原滴定来测 定维生素C2，6-二氯靛酚法原理2，6-二氯靛酚是一种染料，其氧化型在酸

3、性介质中为红色，碱性介质中为蓝色，与Vc反应后，生成无色的还原型酚亚胺，因此，在酸性条件下，用2，6-二氯靛酚滴定至溶液显玫瑰红色，即为终点；无需另加指示剂。2，6-二氯靛酚法 方法 取本品适量（约相当于Vc50mg），用适量水溶解，置100ml 量瓶中，加偏磷酸-醋酸试液20ml,再用水稀释置刻度，摇匀； 精密量取稀释液适量（约相当于Vc2mg）置50ml的锥形瓶中, 加偏磷酸-醋酸试液5ml,用2,6-二氯靛酚滴定液滴定,至溶液显玫 瑰红色,并持续5s不褪； 空白试验：取偏磷酸-醋酸试液5.5ml，加水15ml，用2，6-二 氯靛酚滴定液滴定。 计算： (V-V0) F T WW 标示量

4、标示量%=反应摩尔比100维生素C 2,6-二氯酚靛酚 维生素C 2,6-二氯酚靛酚 （还原型） （氧化型，粉红色） （氧化型） （还原型） + + = v2,6-二氯酚靛酚染料的钠盐在水溶液中显蓝色， 在酸性溶液中呈红色，被还原后红色消失。碘量法o原理：由于维生素C分子中的烯二醇基有极强的 还原性，能被碘氧化，用碘滴定VCoEC6H6O6/C6H8O6=0.18 ,EI2/I-=0.535 o终点：淀粉为指示剂，溶液出现稳定的蓝色即为 终点o反应式：碘量法n碘的浓度由已知浓度的Na2S2O3标准溶液标定n反应式：n计算式：nWvc=C(I2)V(I2)M(vc)/m(vc ) *100%碘量

5、法 注意 ！ 测定时：加HAC使溶液呈弱酸性 原因: (1) Vc还原性很强，在空气中很容易被 氧化，在碱性介质中更甚 (2)I2在碱性介质中会发生歧化反应 加HAC可减少VC的副反应，避免实验 误差电位滴定法原理：根据滴定过程中电池 电动势的变化来确定反应终 点.Pt为指示电极，甘汞作参比 电极E池E+-E-+E液接电位EI2/I- +k(常数)电位滴定法原理(具体来说:) 随着滴定剂的加入，由于发生化学反应， 待测离子浓度将不断变化；从而指示电极电位发生相应变化；导致电池电动势发生相应变化；计量点附近离子浓度发生突变；引起电位的 突变，因此由测量工作电池电动势的变化就 能确定终点。电位滴定

6、法u右图：电位滴定法基本 仪器装置n计算式：(与碘量法相 同)nWvc=C(I2)V(I2)M(vc)/m (vc ) *100%n优点：n解决了滴定分析中遇到 有色或浑浊溶液时无法 指示终点的问题2 分光光度测定维生素C 2.1 2，4一二硝基苯肼分光光度 法 2.2 钼蓝比色法 2.3 其他方法2，4一二硝基苯肼分光光度法 l原理：l维生素C在空气中尤其在碱性介质中极易被 氧化成脱氢抗坏血酸l反应式： 2，4一二硝基苯肼分光光度法 pH5,脱氢抗坏血酸内环开裂，形成二酮古 洛糖酸 二酮古洛糖酸2, 4一二硝基苯肼分光光度法脱氢抗坏血酸，二酮古洛糖酸均能和2，4二硝 基苯肼生成可溶于硫酸的脎

7、 脎在500nm波长有最大吸收 脎的结构：分光光度法o样品溶液与VC标准溶液按上述方法同样处 理o500nm处测吸光度o下图：721型分光光度计钼蓝比色法 马占玲等用钼蓝比色法测定青椒中还原 型维生素C含量的基本原理和方法。 测定波长839 nm，维生素C含量在0 0040024 mgmL范围内呈线 性关系，回收率为972。该方法 简单、快速、准确。 钼蓝比色法l逯家辉等提出了一种测定维生素C的新方 法，它是基于Folin B试剂与抗坏血酸在 pH=3的三氯乙酸酸性介质中反应生成脱 氢抗坏血酸，反应产物在910 nm波长处 有最大吸光度进行定量分析。该方法的 线性范围为0500gmL，相关系数

8、 r=0999 86，回收率为9812102 15。差示旋光法原理方法结果维生素C片在不同PH值的溶液中旋光度有 显著差异，而片剂辅料旋光度保持不变差示旋光法消除辅料的影响，直接测出该 制剂的含量讨论与差示旋光法方法TEXT1）标准溶液的配制准确称取维生素C精制品5.0g，乙二胺四乙酸钠0.37g,置于100mL容量瓶中,用新沸冷却的蒸馏水溶解,加水到指定刻度,配制成50mg/mL的维生素C标准溶液。TEXT原理方法结果讨论与差示旋光法2）比旋光度与溶液pH值的关系 量取10.0mL维生素C标准液于50mL量瓶中,用 水稀释至50mL。测定溶液的pH及旋光度,然 后逐次分批加入氢氧化钠固体(每

9、次约50mg), 每次溶解后,测定一次溶液的pH及其旋光度,得 到维生素C溶液的pH及旋光度关系原理方法结果讨论与差示旋光法选定pH为 2.2和6.2差示旋光法2）差示旋光度与溶液浓度关系 吸取2.0、4.0、8.0、16.0、20.0mL的维生素C标准液各 两份,分别置于50mL的容量瓶,一份用pH2.2的盐酸盐缓冲 液定容；一份用pH6.2的磷酸盐缓冲液定容，静置3min后, 用220mm测定管，以前者为空白，测定后者的差示旋光 度(a)。 文献结果：线性方程为a=0 205*C+ 005，r=09964原理方法结果讨论与差示旋光法3）辅料干扰试验 取混合辅料20mg(淀粉、硬脂酸镁、ED

10、TA、糊精等按 处方比例混匀)两份分别置于50mL的容量瓶,一份用 pH2.2的盐酸盐缓冲液定容,一份用pH6.2的磷酸盐缓冲 液定容,滤去不溶物,滤液在两种pH值测定差示旋光度。 文献结果：辅料的差示旋光度为零，说明辅料对维生素 C含量的测定不干扰。原理方法结果讨论与差示旋光法4）稳定性试验 同一测试样品，在120min内，每隔3min测定 一次差示旋光度。 文献结果：差示旋光度基本不变原理方法结果讨论与差示旋光法5）回收率试验 精密称取维生素C精制品500.0mg两份，分别置于50mL 容量瓶中，各加入20mg辅料，分别用盐酸盐缓冲液及 磷酸盐缓冲液配制成50mL溶液，测定差示旋光度。 文

11、献结果：平均回收率为97.8，变异系数cv为1.03原理方法结果讨论与差示旋光法方法TEXT6）样品测定 取维生素C片剂10片，称重研碎后分别用盐 酸盐缓冲液及磷酸盐缓冲液配制成50mL溶 液(相当于含Vc 20mg/mL)，滤去不溶物，测 定滤液的差示旋光度，根据回归方程计算其 含量。TEXT原理讨论方法结果与差示旋光法方法TEXT1）维生素易被氧化,空气及水中的氧均可 使其氧化分解，配制溶液时使用新沸冷却 水,同时加人EDTA作为稳定剂； 2）样品测定时，片剂部分物质不能完全溶 解，必须过滤除去，然后测定滤液的差示 旋光度。TEXT原理讨论方法结果与3 高效液相色谱法测定维生素Cn3.1

12、HYPERSILC8色谱柱 法n3.2 VenusilXBPC18柱法n3.3 其他方法HYPERSILC8色谱柱法采用HYPERSILC 8色谱柱，用0 1低浓度的草酸作流动相，陈昌 云等采用005 molL磷酸二氢钾 缓冲液：甲醇=80：20 (vv)作流 动相。流速为10mLmin，二极 管阵列检测器，检测波长为254 nm。 3.2 VenusilXBPC18柱法系统采用VenusilXBPC18柱(4 6x250 mm，5g)，用02的偏 磷酸的水溶液作为流动相，流速1 mlmin，检测波长240 nm；维生 素C浓度在01-10 mgmL范 围内有良好的线性关系。该方法回 收率99

13、89，标准偏差091， 操作简便、灵敏、可靠 薄层扫描法原理维生素C具有 较强还原性，可使蓝色染料2，6-二氯靛酚钠定量地还原成无色的酚亚胺，而本身被氧化成去氢抗坏血酸，利用此特征进行薄层扫描法测定含量。薄层扫描法操作方法与结果（1）试纸的制备 2,6-二氯靛酚钠 (DCP-Na)溶于无水乙醇配成 0.05%的DCP-Na乙醇溶液，滤纸在盛有DCP-Na乙 醇溶液的展开缸中浸渍3min，边浸边摇展开缸，使 滤纸均匀着色，充分被染料溶液所饱和。取出悬挂于 暗处，晾干后，立即放入干燥器中避光保存，备用。 薄层扫描法（2）缓冲溶液的配制 称取柠檬酸水合物10g，放入1000ml容 量瓶中，加入1M

14、氢氧化钠 420ml，并用蒸 馏水稀释至刻度，此溶液的pH应为3.5。否 则，用酸或碱调整 pH值，保存于冰箱中。 薄层扫描法3）扫描条件确定 在制备的染料试纸上定量点上维生素C对照 品进行扫描 ，维 生素 C在 290nm 处有最大 吸收，420nm处无吸收，故选择1=290nm， 2=420nm双波长反射式锯齿扫描。原理方法结果讨论与薄层扫描法4）线性实验 4.1）对照品溶液的配制 精密称取维生素C标准品100mg，用缓冲溶液配成lmg/ml的标准溶液。精密称取维生素C标准溶液1、2、3、4、5ml，分别置于10ml容量瓶中，用缓冲溶液稀释至刻度。4.2）测定 用5l定量毛细管，分别吸取上

15、述溶液各5 l，点于试纸上 。点样后晾干，并将试纸 固定在20cm20cm玻璃板上，放入薄层扫描仪。测定A 的积分值 (峰面积)作为纵坐标Y ，点样量为横 坐标X，得一直线方程 Y=15692X+130225，r= 09991 原理方法结果讨论与薄层扫描法方法TEXT5）样品的含量测定 取维生素 C片10片，研细，精密称取平均片重一片的 粉末，放入100ml容量瓶中，加入缓冲液至刻度，振摇 ，使维生 素 C溶解，放置、澄清，用吸液管取3ml 移至 10ml容量瓶中，用缓冲液稀释至刻度。用 5 l定量毛细 管点样品溶液与不同浓度的标准液于同一试纸上 ，然后 扫描 测定峰面积，由工作曲线法计算维生素C片中的维 生素C含量。TEXT原理方法结果讨论与薄层扫描法6）回收率实验 精密称取维生素C对照品20mg，其它原辅料适量，置 10ml容量瓶中，加缓冲液稀释至刻度，振摇，滤过 ，弃初滤液。分别吸取续滤液与对照品维生 素 C液各5 l点于同一试纸上，按上述条件进行扫描测定。薄层扫描法点样时各点间距应大于10mm，扫描测不定期波长可做少量变动，但每次测定必须固定同一测定波长 点样量 在38l之间线性关系较好，当点样量为10 l，线性关系较差。 原理方法结果讨论与结束语l总之，维生素C的测