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1、自身抗体谱自身抗体谱 在风湿病中的意义在风湿病中的意义安徽医科大学第一附属医院风湿免疫科2概 述n自身抗体：指针对自身细胞内、细胞表面和细胞 外抗原的免疫球蛋白，见于多种风湿性疾病，尤 其在弥漫性结缔组织病中更为常见，对临床风湿 病诊断意义重大。n目前用于临床的常见自身抗体有抗核抗体谱、抗 中性粒细胞胞浆抗体、抗磷脂抗体、类风湿因子 、抗线粒体抗体等。3n抗核抗体谱q抗DNA抗体q抗核糖体P抗体q抗组蛋白抗体q抗ENA抗体n抗Sm抗体n抗U1RNP抗体n抗Ro/抗SSA抗体n抗La/抗SSB抗体n肌炎特异性抗体（MSA）q抗合成酶抗体q抗SRP抗体q抗Mi2抗体n与系统性硬化相关的抗体q抗拓扑
2、异构酶1抗体q抗着丝点抗体（动粒）q抗核仁抗原的抗体n抗中性粒细胞胞质抗体qC-ANCAqP-ANCAn抗磷脂抗体q狼疮抗凝物q抗心磷脂抗体q2糖蛋白 n抗内皮细胞抗体n类风湿关节炎相关抗体类风湿因子（RF）抗CCP抗体抗核周因子抗体n自身免疫性肝病相关抗体SMA，LKM，SLA， AMA ，Sp100,gp210等4自身抗体的临床意义n自身抗体在CTD中有特殊意义疾病的筛选具有诊断意义的标记与病情及预后相关与某些临床表现相关n与疾病的发病机制有关n评估风湿性疾病重要的参数之一n研究疾病的重要方向之一5自身抗体检测方法n间接免疫荧光法（IF）：不溶性成分n酶联免疫吸附法（ELISA）；n放射免
3、疫法（RIA）；n对流免疫电泳法（CIE）；n免疫双扩散法（ID）；n免疫印迹法：针对可溶性成分（如ENA、DNA、凝血因子、补体）6抗核抗体 （Antinuclear Antibody, ANA）传统定义：将针对细胞核内成分的抗体称为ANA。 现在对ANA靶抗原的理解已从细胞核扩大到整个细胞。 是指抗核酸（nucleic acid）和核蛋白（nucleoprotein） 抗体的总称。7ANA测定原理和方法：n间接免疫荧光法（IIF):现多以Hep-2细胞（人喉癌上 皮细胞）为底物（Ag)，其以核质丰富而极大地提高 了ANA检测的阳性率和滴度。 n是系统性红斑狼疮（SLE）的标准筛选试验。 n
4、我们实验室采用欧蒙荧光检测系统，将1:100作为血 清起始稀释度，所以如果是低滴度的1:100阳性，只 能视为一个临界可疑值，临床意义不大。nANA作为自身免疫性结缔组织病的筛选试验必须强调 高滴度。8ANA的意义nANA（）结果的出现率取决于以下因素：q分析系统：由于不同厂家ANA检测系统的起始稀释度和稀释因子不同，因而不同厂家的ANA滴度结果不能直接进行比较。q区分血清（）与（）的选定的滴度值，未加稀释的正常人血清可有1/3的呈阳性ANA反应。 n是SLE独立的诊断条件之一。n滴度本身与疾病的活动度并不相关，没有评价预后的意义。n筛查风湿病，敏感性高。nANA（）可出现在多种情况下，特异性
5、差。9ANA（）的原因n风湿性疾病qSLEq多发性肌炎q干燥综合征q硬皮病q血管炎qRAn正常的健康人q女性男性，出现率随 年龄而增加q风湿性疾病患者亲属q？孕妇n药物诱导n慢性肝脏疾病n慢性肺部疾病n慢性感染n血液系统异常n恶性肿瘤10SLE患者使用IIF法测定ANA阴性的一些解释 n技术方面n临床方面q经皮质激素或免疫抑制剂治疗。q终末期肾病。q隐蔽ANA：与循环中免疫复合物结合，沉积于组织。q由于大量蛋白尿而从肾脏丢失。11ANA的荧光染色型别细胞核：核均质型（DNA、组蛋白和核小体等）核颗粒型（Sm、uRNP、SS-A、SS-B、Ku、I和型周期蛋白）核膜型（板层素、gp120等）核仁
6、型（SCL-70、PM-SCL、RNA多聚酶、原纤维蛋白等）核浆点型（着丝点、核多点及核少点型）细胞浆：胞浆颗粒型（线粒体、Jo-1、核糖体等）胞浆纤维型：波形蛋白、原肌球蛋白和肌动蛋白等分裂期细胞阳性：纺垂体、中间体、中心体等根据产生的荧光模型、靶抗原的分布部位分类如下：12核颗粒型：核粗颗粒型13n抗核抗体染色类型核仁型（nucleolar）14均质性 （ homogeneous ）15斑点型（speckled）16ANA的 荧光类型nANA试验的结果中一般会报告其分型，这些分型 可能与某一特定的抗原反应活性相关。分型 相关疾病 核仁型硬皮病 着丝丝点型CREST综综合征 周边边型SLE
7、斑点型/弥 散型混合性结缔组织结缔组织 病 （MCTD）17ANAs的分类： n抗DNA抗体n抗组蛋白抗体 n抗非组蛋白抗体 n抗着丝点抗体： n抗核小体抗体 18抗DNA抗体n已确认出两大类抗体特异性：q天然的双链DNA（dsDNA）：对诊断SLE特异性高q变性的单链DNA（ssDNA）n多数实验室采用以下方法进行测定：q放射免疫分析法（RIA，Farr分析法）：定量q酶联免疫吸附法（ELISA）：定量q间接免疫荧光法（ IIF，短膜虫法）：半定量n抗体水平与疾病活动度相关，随着疾病活动的控制，抗 dsDNA抗体滴度可以下降或消失。n抗dsDNA抗体与SLE肾损伤有关：DNA形成免疫复合物
8、在肾小球基底膜沉积，或抗dsDNA抗体直接作用于肾小球 抗原。强烈提示其致病作用。19抗核糖体P抗体 （又称为：抗rRNP抗体）n针对3磷蛋白P0、P1和P2的抗体。n诊断SLE的高度特异性标记物。n在1015的SLE患者中出现。n抗体水平与疾病的活动度相关。n与狼疮脑病有关。20抗组蛋白抗体 （Anti-Histone Antibody，AHA）n组蛋白是染色质基本结构-核小体的重要组成部分；n在药物性狼疮的患者中出现率很高（78- 95%）；n在多种结缔组织病中出现。n服用异烟肼的病人中最高，但临床上并没有出现狼 疮的临床症状，其它肼苯哒嗪、普鲁卡因酰胺。21抗核酸结合蛋白/可提取性核抗原
9、（Extractable Nuclear Antigen, ENA）抗体22抗ENA抗体的类型n抗Sm抗体n抗U1RNP抗体n抗Ro/抗SSA抗体n抗La/抗SSB抗体n肌炎特异性抗体（MSA）n与系统性硬化相关的抗体23抗ENA抗体的检测及临床意义n采用免疫扩散法；ELISA和免疫印迹法。n几乎仅出现于患有结缔组织病的患者中。n如果无症状者中出现高滴度的抗ENA抗体，常预示着未来 可能发展成结缔组织病。n抗体常在疾病的整个病程中均能够被检测到。n滴度与疾病活动度并无一致的关系。24抗Sm抗体 （Smith） nACRSLE诊断标准中，抗Sm抗体是诊断标准标准 之一。抗Sm抗体非常有助于作出S
10、LE的诊断。n30左右SLE存在该抗体。nSLE患者中，常与抗U1RNP抗体一同出现 n与临床的相关性并不强，但有证据显示其与中枢 神经系统受累、肾脏病变、肺纤维化、心包炎有 关。有人认为可以作为疾病活动度的指标。25抗U1RNP抗体n抗nRNP(nuclear RNP)：以抗核内的核糖核蛋白 而得名。临床上应用较多的是u1RNP抗体。通常 又把nRNP称之为u1RNP。n抗u1RNP抗体在混合性结缔组织病（MCTD）中 几乎均为阳性，且其滴度很高；n是区分结缔组织病和非结缔组织病的有力指标。n抗u1RNP抗体阳性的病人，常有双手肿胀、雷诺 现象、肌炎和指（趾）端硬化。n2530的SLE患者存
11、在该抗体，一般与抗Sm 抗体一同出现。26抗Sm/nRNP抗体nSm和nRNP是同一分子复合物（RNA-蛋白颗粒）中 的不同抗原位点，nSm含有u1、u2和u4-u6，而nRNP(u1RNP)仅含 u1RNA。也即抗Sm抗体阳性均伴有抗u1RNP抗体， 而抗u1RNP抗体可以单独存在。n抗u2RNP抗体在系统性硬化症伴多发性肌炎的重叠综 合征中阳性频率较高。银屑病及雷诺现象的病人也可 呈阳性。n抗u3RNP抗体常与系统性硬化相关，且常伴有肺动脉 高压、骨骼肌和小肠受累。27抗SS-A/Ro抗体 n抗SSA/RO抗体：由于该抗体与干燥综合征（ Sjogren Syndromes，SS）相关，故取
12、名为 SSA；nSSA与Ro的抗原性、生化特点一致。n在以鼠肝为底物的ANA检测中，抗SSA抗体常 呈阴性反应，而以Hep-2细胞为底物，则ANA 阳性时SSA也常呈阳性。28抗Ro抗体阳性的临床相关性 n正常健康人n干燥综合征q淋巴结病q白细胞减少q抗La抗体qRFqANAnSLEq光过敏性皮疹q血小板减少q间质性肺炎qANA（）n亚急性皮肤型红斑狼疮q抗La抗体n其它风湿性疾病qRAq多发性肌炎q系统性硬化n原发性胆汁性肝硬化n新生儿狼疮综合征q先天性完全性心脏传导 阻滞q新生儿狼疮性皮炎qRo反应针对52kD抗原 而非60kD抗原。29抗SSB/La抗体 n在原发性SS病人中，抗SSA/
13、Ro和抗SSB/La阳性率 分别为60%和40%，它们是诊断干燥综合征的血清 学标志。n抗SSB抗体较抗SSA抗体诊断干燥综合征更为特异。n免疫扩散法与免疫印迹法（Western Blot）得出 的结果常常不一致。nSSA和抗SSB抗体阳性可造成新生儿狼疮及婴儿心脏 传导阻滞等先天性心脏病。n抗SSA和抗SSB抗体常与血管炎、淋巴结肿大、白细 胞减少、光过敏、皮损、紫癜等临床症状相关。30“肌炎特异性自身抗体”（Myositis-Specific Antibody ,MSA）n抗合成酶抗体（20）：Jo-1抗体占所有抗合成酶抗体 的80%，其它还有：抗PL-7抗体、抗PL-12抗体、抗OJ 抗
14、体等。n抗SRP抗体（抗信号识别颗粒抗体）（5）与肌炎、心 脏扩大、对治疗的抵抗相关,5年生存率为20n抗Mi2抗体（10）：5年生存率为100n几乎仅见于或最常见于多发性肌炎/皮肌炎（PM/DM）或 PM/DM重叠综合征。n存在于35至40的肌炎患者中。n一个人出现一种以上MSA的情况很少见。31抗合成酶综合征 n临床表现为：肌炎、间质性肺疾病、关节炎以及常出现雷 诺现象的一组临床表现的特征性；n患者的手指侧面常出现角化过度，并伴有脱屑、裂纹和色 素沉着，从而形成许多肮脏的横纹。即“技工手”。n50至70发生间质性肺疾病（就肌炎总体而言，为10 至20）。n血清中含多有抗合成酶抗体（Jo-1
15、抗体）。n肌炎常常难以通过治疗达到完全缓解。32与系统性硬化相关的抗体n抗拓扑异构酶1抗体（抗scl 70抗体）：存在于25的患 者；主要见于患有弥漫型硬皮病以及存在系统性损害（特 别是肺间质变）的患者。n抗着丝点抗体：存在于30的患者中；90的CREST综 合征患者存在该抗体；见于患有原发性或继发性雷诺病的 患者。n抗核仁抗原的抗体：见于5的患者中，患者常常患有严 重的弥漫型疾病。33抗核小体抗体（antinucleosome antibodies, AnuA）n核小体是染色体的功能亚单位，是DNA与组蛋白形成的 复合体，存在于细胞核中，核小体是SLE主要的自身抗 原；nAnuA对SLE诊断
16、的敏感性和特异性分别为56.0%-64.2% 和97.0%-98.8%，敏感性优于抗dsDNA，是SLE的标记 抗体之一。nAnuA可出现于SLE疾病进程的各个时期，并且是狼疮肾 炎的标记性抗体，与SLE病情活动的生物标志物。nAnuA与抗dsDNA抗体可不同时出现，AnuA出现早于抗 dsDNA抗体，这对SLE的早期诊断更为有利, 目前我科 已展开了第二代AnuA的检测。34抗C1q抗体 检测方法：用C1q纯抗原包被，ELISA法检测。 发病机制：n补体系统在SLE疾病的发生和发展阶段都有重要作用 ，而且它可能是自身抗体反应的靶点。nC1q是补体C1的第一组成亚单位，在补体经典激活 途径中起重要作用。n尽管大部分SLE病人都有C1q免疫复合物沉积，但只 有那些抗C1q抗体阳性的病人才有肾脏的损伤； 35抗C1q抗体的临床意义： 抗C1q抗体与LN的活动性相关，敏感度为44% 100%，特异性为70%92%。与C3和C4水平、抗ds-DNA抗体、抗内皮细胞 抗体和抗磷脂抗体等指标相比，抗C1q抗体具 有预
