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1、梅毒的实验室诊断2011.8.31WWW.ZHCCDC.COM梅毒的实验室诊断梅毒（Syphilis）是由苍白螺旋体 （Treponema Pallidum TP）感染引起的一种慢 性性传播疾病，本病表现复杂、病期长，几乎 可侵犯全身各个器官，发展过程时隐时现，症 状和体征呈多样化，自然感染过程（不治疗） 可产生不同临床症状的一期、二期、三期梅毒 。2011.8.31WWW.ZHCCDC.COM病原体n梅毒螺旋体特点 1.小而细螺旋状，长614um,直径0.250.3um. 有814规则、紧密螺旋。 2.透明不容易着色. 3.微需氧（13）,人工培养不生长。 4.繁殖方式为裂殖. 5. 对热敏
2、感，骤冷超低温保存数年，复活后接种 动物其毒性、活力、形态不变。2011.8.31WWW.ZHCCDC.COM致病机理n梅毒螺旋体破损皮肤及粘膜感染 24周 潜伏感染局部螺旋体大量繁殖硬下疳 经38周 症状自行消失 TP附近淋巴结 血液播散 全身组织和器官 二期梅毒 三 期梅毒 心血管、神经等损害。2011.8.31WWW.ZHCCDC.COM传播途径性传播：性接触n是主要的传染途径n未经治疗的患者在感染后的1年内最具有传染 性。n随着病期的延长，传染性越来越小。n到感染后4年，通过性接触一般无传染性。2011.8.31WWW.ZHCCDC.COM传播途径垂直传播：胎传n在妊娠任何阶段，梅毒螺
3、旋体均可通过胎盘传 染。n病期越长，传染性越小。n早期梅毒的母亲，发生流产、死产、胎儿先天 梅毒或新生儿死亡率高于晚期梅毒的母亲。2011.8.31WWW.ZHCCDC.COM传播途径间接传播：n污染物、输血。2011.8.31WWW.ZHCCDC.COM各期梅毒标本采集及检查方法临床症状 取材部位 检查方法n一期梅毒 硬下疳、淋巴结 暗视野检查血液 血清学检查n二期梅毒 皮损、淋巴结 暗视野检查血液 血清学检查n隐性梅毒 血液 血清学检查n三期梅毒 血液 血清学检查n神经梅毒 血液、脑脊液 血清学检查2011.8.31WWW.ZHCCDC.COM梅毒实验室诊断方法梅毒病原体检查血清学检查暗视
4、野检查法镀银染色法直接免疫荧光法确证试验: FTA-ABS、TPHA、 TPPA、TP-ELISA、 TP-RT 19S-IgM初筛试验：VDRL、USR RPR、TRUST2011.8.31WWW.ZHCCDC.COM梅毒实验室诊断方法病原体（梅毒螺旋体）检查：一、暗视野检查二、直接荧光抗体检查三、涂片染色检查法：镀银染色、吉姆萨染色、墨汁 负染色。2011.8.31WWW.ZHCCDC.COM病原体检查法n 一、暗视野检查法n 原理 一期梅毒硬下疳、肿大淋巴结的淋巴液。 二期梅毒皮肤粘膜损害、扁平疣、梅毒疹。 梅毒孕妇羊水(7周)以上标本均有梅毒螺旋体存在，此时用暗视野 显微镜检查能找到梅
5、毒螺旋体。2011.8.31WWW.ZHCCDC.COM病原体检查法检查方法n1、皮损取材：在载玻片加一滴生理盐水，用棉拭 子蘸取无菌生理盐水抹去皮损（硬下疳、溃疡、 梅毒疹、扁平疣）表面污物，挤压皮损周围，用 钝刀刮取组织液混入载玻片盐水中，加盖玻片后 暗视野镜检。n2、肿大淋巴结取材：酒精消毒淋巴结表面，用 1ml无菌注射器配12号针头，吸取无菌生理盐水 0.25-0.5ml,无菌操作穿刺淋巴结并注入盐水，再 吸入注射器内，如此反复2-3次，取少量淋巴液于 载玻片上，加盖玻片后暗视野镜检。2011.8.31WWW.ZHCCDC.COM病原体检查法n3、羊膜穿刺：梅毒孕妇的羊膜穿刺由专职人
6、员操作，将取得的羊水直接滴于载玻片上加盖 玻片暗视野镜检。2011.8.31WWW.ZHCCDC.COM病原体检查法n 结果暗视野镜检可观察到特征性的梅毒螺旋体。 螺旋整齐，数目固定（814）。 白色透明折光性强。 特征性运动方式：旋转运动、伸缩移行、弯曲 前行。2011.8.31WWW.ZHCCDC.COM暗视野显微镜法直接镜检图像（1000）2011.8.31WWW.ZHCCDC.COM病原体检查法n 临床意义、暗视野检查可作为梅毒诊断的确证试验， 若发现有梅毒螺旋体，即可确诊为梅毒感染。、此法特别适用于血清学试验阴性的早期梅 毒诊断，尤其对早期有硬下疳，但梅毒血清反 应尚未呈阳性者意义更
7、大。3、暗视野检查是目前快速诊断先天性梅毒可 靠的检查方法。2011.8.31WWW.ZHCCDC.COM非梅毒螺旋体血清试验-TRUSTn注意事项1.试剂保存 ，不能以下冰冻。2.实验环境以2329 为宜，用前试剂恢复室温。3.试剂在效期内使用，怀疑试剂失效，需用试剂阴、阳对照及已知阴、阳标本对照。4.用旋转式摇床，不能用平衡式振荡仪。5.试验要用纯血清，以防假阴性。6.血清加抗原后要充分混匀分开。2011.8.31WWW.ZHCCDC.COM非梅毒螺旋体血清试验-TRUST7.试验完毕立即观察结果，否则影响结果准确性 。8.定性阳性者，确诊治疗前应作定量试验，一是 可以了解患者抗体滴度，便
8、于复查作比较，以判 断疗效和预后观察；二可以避免“前带现象”。9.初筛试验阳性，应做确证试验以排除生物学假 阳性。10.AIDS合并感染梅毒，梅毒血清可阴性，应作暗 视野检查螺旋体，同时做HIV检查。2011.8.31WWW.ZHCCDC.COM梅毒螺旋体血清试验-TPPAn一、TPPA(梅毒螺旋体明胶凝集试验)n 原理TP-Ag（明胶颗粒）Ab（血清） 洋红色凝集（肉眼观察）2011.8.31WWW.ZHCCDC.COM梅毒螺旋体血清试验-TPPAn方法定性、定量试验 孔号 1 2 3 4 5 6 7 8 血清稀释液 100 25 25 25 25 25 25 25 血清标本 25 25 2
9、5 25 25 25 25 25 25 标本稀释度 1:5 1:10 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 非致敏颗粒 25 致敏颗粒 25 25 25 25 25 最终滴度 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 轻轻振荡混匀，置湿盒内室温（1530 ）小时后观察结果。2011.8.31WWW.ZHCCDC.COM梅毒螺旋体血清试验-TPPAn结果定性试验 2+4+：颗粒凝集覆盖整个孔底，边缘粗糙呈膜状。 1+：颗粒凝集呈多边性粗糙大环状。 +/-：颗粒浓集于孔底呈小环状 ：颗粒聚集于孔中央，边缘光滑呈小红点。定量试验出现阳性反应的最
10、高稀释度作为最终滴度2011.8.31WWW.ZHCCDC.COM梅毒螺旋体血清试验-TPPA2011.8.31WWW.ZHCCDC.COM梅毒螺旋体血清试验-TPPAn临床意义1. 确证试验阳性可诊断梅毒感染，一种 是现症感染者，另一种是治愈者。 2.由于特异性梅毒螺旋体抗体可终生阳性 ，因此不能用来作为疗效观察及治愈的判 断标准。一般只作定性试验，根据临床需 要才做定量试验。2011.8.31WWW.ZHCCDC.COM梅毒螺旋体血清试验-TPPAn注意事项1.反应板要清洁干净，遐免假阳性。 2.要用U形板不能用V形板，遐免假阴性。 3.试剂保存 ，不能以下冰冻。 4.反应温度以1830
11、为宜，用前试剂恢复至 室温。 5.试剂要在有效期内使用，不同批号不要混用。 6.血清要分纯，不能混有血液有形成分。2011.8.31WWW.ZHCCDC.COM梅毒螺旋体血清试验-TPPA7.如未致敏颗粒出现凝集，应做吸收试验或改用其它方法。8.对于可疑阳性结果（1：80），建议作连续观察或暗视野检查。9. AIDS合并感染梅毒，血清学试验可阴性，应作暗视野检查螺旋体。2011.8.31WWW.ZHCCDC.COM梅毒螺旋体血清试验-TPPAn方法学评价： 优点： 1、试剂稳定，批间差小2、结果判读清晰明确3、敏感性和特异性较TPHA进一步提高 不足：结果判定主观，较难实现自动化。2011.8
12、.31WWW.ZHCCDC.COM梅毒螺旋体血清试验- FTA-ABSn二、荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS)TP-AgTP-Ab（灭活吸收后血清）37 x30分钟 TP-Ag-AbPBS洗涤TP-Ag-Ab+IgG-FITC37 x30分钟TP-Ag-Ab-IgG-FITCPBS洗涤、封片、荧光镜检 莱果绿色荧光2011.8.31WWW.ZHCCDC.COMFTA-ABS IgG抗体阳性（400）2011.8.31WWW.ZHCCDC.COMFTA-ABS IgM抗体阳性（400）2011.8.31WWW.ZHCCDC.COM梅毒螺旋体血清试验- FTA-ABS方法学评价：FTA-
13、ABS是所有螺旋体试验中最敏感的方法，特异 性也很高，被认为是检测梅毒的“金标准”，且 该试验可分开检测IgM和IgG。但由于该试验需有 优质的荧光显微镜和技术熟练的操作人员才能得 到准确的结果，故常不被临床实验室作为常规方 法开展。2011.8.31WWW.ZHCCDC.COM梅毒螺旋体血清试验TP- IgMn三、梅毒IgM抗体血清学检测n临床应用梅毒螺旋体感染人体， 机体体液免疫系 统最早产生的抗梅毒螺旋体特异性抗体是 IgM ，然后才是IgG。IgM抗体滴度水平经 治疗下降较快并可转阴性。一期梅毒3 个月 阴转率100，二期梅毒9个月阴转率100 ，早期潜伏期梅毒2年阴转率100。201
14、1.8.31WWW.ZHCCDC.COM梅毒螺旋体血清试验TP- IgMn 因此，未经治疗患者IgM抗体阳性可能是 活动性梅毒的表现。另外，由于IgM聚合体 分子量较大，是IgG的5倍，不能通过某些屏 障，因此对某些疑难病例的诊断具有重要意 义。IgM检测主要应用于以下方面。2011.8.31WWW.ZHCCDC.COM梅毒螺旋体血清试验TP- IgMn先天性梅毒的诊断：IgM不能通过胎盘屏障，新生儿血清中IgM阳性，说明怀孕期间胎儿已被母体梅毒螺旋体感染而产生IgM抗体。n早期梅毒诊断：IgM产生最早，理论上当其它血清试验阴性时初筛试验、确证试验（IgG），可早期检测出IgM抗体。n晚期梅毒诊断：由于不规则治疗或不治疗而致的晚期梅毒病人，IgM检测阳性。2011.8.31WWW.ZHCCDC.COM梅毒螺旋体血清试验TP- IgMn活动性神经梅毒诊断： IgM抗体不能通过血脑屏障，神经性梅毒活动期时，病人脑脊液中存在IgM抗体，检测可阳性。n梅毒螺旋体再感染：再次感染梅毒螺旋体，IgM抗体重新出现，检测呈阳性。
