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1、 第12章 革兰氏阴性微需氧和厌氧菌n本属菌共包括8个属和1个科：1、弯曲杆菌属，2、 水螺菌属，3、螺菌属，4、固氮螺菌属，5、海洋 螺菌属，6、蛭弧菌属，7、吸血弧菌属，8、螺杆菌属，以及拟杆菌科。n在医学检疫上有意义的是弯曲杆菌和螺杆菌属。 第1节 弯曲杆菌属 Campylobacter 一类呈逗点状或S形的革兰氏阴性杆菌，广泛分布于动物界，其中 有些可引起动物和人类腹泻、胃肠炎和肠道外感染。目前弯曲菌属有18个种（含亚种），对人类致病的主要是空肠弯 曲菌和胎儿弯曲菌的胎儿亚种，前者引起人类急性腹泻，后者 在免疫功能低下时可引起败血症、脑膜炎等，其次是胎儿弯曲 菌和大肠弯曲菌等。 198
2、3年分离的幽门弯曲菌则与慢性胃炎和 胃溃疡、十二指肠溃疡有关。兽医临床上常见的有五个种（含亚种）：空肠弯曲杆菌、胎儿弯 曲杆菌（胎儿亚种和性病亚种）、小肠弯曲杆菌、幽门弯曲菌 。其中以空肠弯杆菌最多见，胎儿亚种次之。弯曲杆菌属一、形态与染色 1、0.2-0.41.5-3.0m； G -, 呈弧形、S形或海鸥 展翅状，不易着色； 2、无芽孢，一端或两端 各有一根鞭毛，运动活 泼，形态似霍乱弧菌； 3、从微需氧到厌氧， CO2有利于其生长。二 培养特性n微需氧，最适生长环境: 氧气5、二氧化碳10、氮 气85；通常42初分离空肠弯和大肠弯曲菌，其他 菌株37生长良好。n营养要求高，普通培养基不生长
3、，常用含头孢哌酮的 选择性培养基，以抑制肠道正常菌群。含血的Skirrow 培养基、头孢哌酮-万古霉素-两性霉素琼脂培养基（ CVA）和不含血的碳-头孢哌酮-去氧胆酸盐（CCDA ）、碳基选择性培养基（CSM）和半固体动力培养基 等常用于分离该属的细菌。三 生化特性氧化酶和触酶阳性，可还原硝酸盐，不分解、不发酵各种糖类，不分解尿素。四 抵抗力本属细菌抵抗力弱，对一般消毒剂敏感，但耐寒， 在4冰箱或水中可存活4周。本菌具有粘附定居和入侵上皮细胞的能力，通过产生 的肠毒素、细胞毒素和内毒素等多种毒力因子致病， 病变部位通常在空肠和回肠，也可蔓延至结肠。 五 毒力六 致病性 可引起人畜急性传染病弯曲
4、杆菌病。 1、带菌者：动物和人类，经肠道或生殖道排出； 2、感染：经口(污染的食物或水)；经产道感染婴儿；3、临床症状：潜伏期1-10d，一般3-5d。 （1）肠炎：腹泻、腹痛、呕吐及发热等，初为水样，继而转 为粘液便，少数呈脓血便。 （2）肠道外感染：可致菌血症、心内膜炎、脑脊髓膜炎、血 栓性静脉炎、关节炎、肺脓肿和腹膜炎等。 （3）母畜感染：上呼吸道症状、肺炎、发热及菌血症；死胎 或流产；新生畜败血症及脑脊髓膜炎。七 微生物学检查 1. 标本采集 采集粪便及剩余食物 ，立即送检，或将 标本接种于卡-布运 送培养基中送检； 对于高烧和脑膜炎者 ，于用药前抽取静 脉血或脑脊液，注 入布氏肉汤送
5、检。2. 细菌检验（1）显微镜检查 悬滴法动力检查：显微镜下观察有无螺旋状或投标样运 动，脑脊液标本经离心沉淀后再制成悬滴标本检查；染色标本检查：取新鲜粪便或脑脊液离心沉淀物涂片、 革兰氏染色，找革兰氏阴性、弯曲呈S状或螺旋状杆菌，鞭毛 染色见一端或两端单根鞭毛； （2）分离培养 将标本直接接种于选择性培养基上，也可将标 本过滤后培养，弯曲菌形成的菌落为灰色、扁平、表面湿润、 圆形凸起、边缘不规则，常沿穿刺线蔓延生长，血平板不溶血 ，布氏肉汤中呈均匀混浊。3. 细菌鉴定n弯曲菌属的鉴定较复杂，必须综合多种试验确定。通常氧化酶 阳性、革兰染色阴性、弯曲呈S形或螺旋形，进一步鉴定试验： 马尿酸盐水
6、解试验：鉴别空肠弯曲菌空肠亚种和多氏亚种的重 要试验；前者阳性，后者阴性。 醋酸吲哚水解试验：空肠弯曲菌为阳性而胎儿弯曲菌为阴性。 萘啶酸、头孢噻吩耐药试验：空肠弯曲菌和大肠弯曲菌对萘啶酸敏感，对头孢噻吩耐药；胎儿弯曲菌对萘啶酸耐药而对头孢噻吩敏感。近来出现了对萘啶酸耐药的空肠弯曲菌，应结合醋酸吲哚水解试 验进行鉴定。八、治疗弯曲菌感染大多呈轻症和自限性，一般不需特异性治疗 。体外试验显示，头孢菌素和青霉素耐药，环丙沙星 治疗弯曲菌感染对绝大多数弯曲菌非常有效，但近年 出现了不少耐药菌株。 空肠弯曲菌通常对红霉素敏感，耐药率小于5；而80 以上的大肠弯曲菌对红霉素耐药。胎儿弯曲菌引起 的全身感
7、染可用红霉素、氨苄西林、氨基糖苷类和氯 霉素治疗。 第2节 螺杆菌属 Helicobacter n螺杆菌属（Hilicobacter）是一群氧化酶和触酶阳性、微 需氧、37生长、25和42均生长不良的革兰阴性弯 曲菌。n本属细菌最早根据形态染色、培养条件等归于弯曲菌属 ，1989年Goodwin根据其超微结构、酶活性、脂肪酸序 列、生长特性等的不同，建议将其从弯曲菌属中划分出 来而成立一个新的属Hilicobacter（螺杆菌属）。n本属中现已鉴定的有19个种，研究得最多、最常见的是 幽门螺杆菌(H. pylori，Hp)。 幽门螺杆菌一、形态与染色革兰氏阴性、无芽孢、呈螺旋 状弯曲，杆状，尤
8、其在胃粘膜 环境中，幽门螺杆菌具典型螺 旋形或弯曲形，但在陈旧培养 物中菌体可呈圆球状；多数细 菌具有位于菌体一端的多根带 鞘鞭毛，运动活泼。 二 培养特性n微需氧，有氧及无氧环境均不生长，潮湿，37，5-10 O2、5-12CO2生长良好，5-10H2可刺激其生长； 最适温度35-37，30和42均生长不良，此点可与其 他弯曲菌区别，生长pH5.5-8.5。n普通培养基不生长，需补充血、血清、淀粉、活性炭等 。常用心脑浸出液琼脂、布氏琼脂、哥伦比亚琼脂等。n选择性培养基：改良的Skirrow琼脂培养基加入万古霉 素、两性霉素和头孢磺啶。n血平板：经3-5d形成小的半透明灰色菌落，有微弱的溶
9、血环，革兰氏染色浅。 三 生化反应n生化反应不活泼，氧化酶和触酶阳性，不分解任何糖类 ，脲酶强阳性，可与本属其他细菌区别，也是检测HP 的快速诊断方法之一。四 抵抗力n对酸敏感，尿素可保护该菌，1胆盐可抑制其生长 。 n耐药性：对多粘菌素、三甲氧苄氨嘧啶、磺胺、万古 霉素和萘啶酸天然耐药。n在体外药敏试验中，该菌对不少抗生素敏感，但体内 用药效果不佳，主要因为该菌寄生在粘液层下的胃上 皮细胞表面，抗生素不能渗入胃粘膜深层。n临床上治疗该菌的药物有阿莫西林、甲硝唑、克拉霉 素、四环素、呋喃唑酮等。 五 致病因子与致病性n该菌有较强的鞭毛动力，对胃粘膜有较强粘附力，在接近中性的 粘膜层定植，产生强
10、活性尿素酶以分解尿素，在菌体周围形成保 护性氨环境，以抵抗胃粘膜上皮细胞分泌的胃酸；该菌产生的蛋 白酶能有效分解粘液蛋白，提供营养。n幽门螺杆菌在胃内定植后，粘附于胃粘膜上皮细胞、通过胃肠激 素刺激和细胞壁脂多糖中脂质A的致炎作用、产生多种酶(尿素酶 、蛋白酶、过氧化氢酶、脂酶和磷脂酶等)以及细胞毒素，共同 作用导致临床疾病的发生。n主要引起消化性溃疡（十二指肠溃疡、胃溃疡）、慢性活动性胃 窦炎等，长期感染易发展为萎缩性胃炎、胃腺癌和胃粘膜淋巴组 织淋巴瘤。六 微生物学诊断 六 微生物学诊断 1. 标本采集 采集胃和十二指肠粘膜新鲜标本，置2ml无菌生理盐水，运输 途中不超过3h，4不超过5h
11、。流行病学调查时可取血清。2. 显微镜检查 直接镜检：取胃、十二指肠粘膜活检标本作革兰染色，在 油镜下查找细长弯曲或呈海鸥展翅状排列的菌体；组织学切片：可行Warthin-Starry银染、改良Giemsa染色、 甲苯胺蓝染色、石炭酸复红染色等。3.分离培养5绵羊血的布氏琼脂或7马血的心脑浸液分离，用改良的 Skirrow琼脂（万古霉素和两性霉素各10mg/L、甲氧苄啶5mg/L） 选择性培养，在含5O2、10CO2、85N2的微需氧环境37 孵育3-5天，长出细小、灰白色、半透明、不溶血的菌落。4. 快速检查 快速脲酶试验：取一小块新鲜活检标本置于含尿素的培养基， 由于幽门螺杆菌产生大量的细胞外尿素酶，可分解尿素产大量氨， 培养基pH升高，指示剂变色，可在5-30min内检测出幽门螺杆菌； 该法简便实用、快速灵敏且较为准确，适合胃镜检查病人； 核素标记试验：敏感性和特异性均很高，但操作稍繁琐； PCR：是一种高度敏感和特异的方法，目前仅用于实验研究； 抗原检测：可用商品化试剂盒，ELISA法直接检测菌体抗原。 5. 鉴定主要通过典型菌体形态，生长缓慢，仅于37生长。氧化酶和 触酶阳性，脲酶强阳性，对萘啶酸耐药，对头孢噻吩敏感，在1 甘油和1胆盐中均不生长。复习思考题1. 弯曲杆菌的微生物学检查。2. 幽门螺杆菌的致病因子和微生物学检查
