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1、DNA的粗提取与鉴定 海安李堡中学 张云无论是果胶酶还是加酶洗衣粉中的酶 制剂，都是从细胞中提取出来的。从 今天开始，我们学习生物化学成分的 提取与改造技术。基础知识： DNA粗提取的原理 提取DNA的溶解性原理包括哪些方面？提取DNA的原理包括DNA的溶解性和耐 受性两个方面。 DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同 ；DNA不溶于酒精。思考1分析图51。DNA在不同浓度 NaCl溶液中溶解度有何特点？要使DNA溶 解，需要使用什么浓度？要使DNA析出， 又需要使用什么浓度？在0.14mol/L时溶解度最小；较高浓度可使 DNA溶解；0.14mol/L可使DNA析出。 思考2 在溶解细胞中
2、的DNA时，人们通 常选用2mol/LNaCl溶液；将DNA分子析出 的方法是向溶有DNA的NaCl溶液中缓慢注 入蒸馏水，以稀释NaCl溶液。酒精是一种 常用有机溶剂，但DNA却不能溶于酒精（ 特别是95冷却酒精），但细胞中蛋白质 可溶于酒精。问：采用DNA不溶于酒精的 原理，可以达到什么目的？将DNA和蛋白质进一步分离思考3 提取DNA还可以利用DNA对酶、高温 和洗涤剂的耐受性原理。利用该原理时，应选用 怎样的酶和怎样的温度值？蛋白酶，因为酶具有专一性，蛋白酶只水解蛋白质 而不会对DNA产生影响。温度值为6080，因 为该温度值蛋白质变性沉淀，而DNA不会变性。补充：DNA的变性是指DN
3、A分子在高温下解螺旋 ，其温度在80以上，如在PCR技术中DNA变性 温度在95。 DNA的鉴定原理 当鉴定提取出的物质是否是DNA时，需要 使用什么指示剂进行鉴定？ 在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺呈现蓝色原理总结。通过利用不同浓度NaCl溶液溶 解或析出DNA，可以从细胞中提取和提纯 DNA；再利用酒精进一步将DNA与蛋白质 分离开来，达到提纯的目的；最后利用二 苯胺试剂鉴定提取的物质是否是DNA 1实验材料 不同生物的组织中DNA含量不同。在选取 材料时，应本着DNA含量高、材料易得、 便于提取的原则。你认为教材提供的材料 中哪些不适合提取DNA？ 从核DNA数目来看，猪38条，鸡78条，
4、哺 乳动物血0条，猕猴桃58条，洋葱16条，豌 豆14条，菠菜12条，大肠杆菌1条。请选择 动植物材料各一种。哺乳动物的血液和液体培养基中的大肠杆菌。鸡血、猕猴桃。 2 破碎细胞，获取含DNA的滤液 若选用鸡血和洋葱作实验材料，则怎样获 取含DNA的滤液？ 在以上实验中，加入蒸馏水、洗涤剂和食 盐的作用分别是什么？过滤时应当选用（ 滤纸、尼龙布）。在鸡血细胞液中加入一定量蒸馏水并用玻棒搅 拌，过滤后收集滤液；切碎洋葱，加入一定量 洗涤剂和食盐，搅拌研磨，过滤后收集滤液。血细胞在蒸馏水中大量吸水而张裂；洗涤剂瓦 解细胞膜；食盐溶解DNA物质；选用尼龙布进 行过滤。 在处理植物组织时需要进行研磨，
5、其目的 是什么？研磨不充分产生什么结果？ 具体做法。10mL鸡血20mL蒸馏水同 方向搅拌3层尼龙布过滤滤液破碎细胞壁，使核物质容易溶解在NaCl 溶液中；研磨不充分会使DNA的提取量 减少 3 去除滤液中的杂质 最初获得的DNA滤液含有蛋白质、脂质等 杂质，需要进一步提纯DNA。阅读教材提 供的三种方法，分析其中的原理。 方案一的原理是DNA在不同浓度NaCl溶液 中溶解度不同； 方案二的原理是蛋白酶分解蛋白质，不分 解DNA； 方案三的原理是蛋白质和DNA的变性温度 不同。 具体做法。 方案一：30mL滤液35gNaCl同方向搅 拌，DNA溶解加入蒸馏水DNA析出 过滤得到过滤物放到2mo
6、l/LNaCl溶液中 溶解DNA-NaCl溶解液 方案二：30mL滤液嫩肉粉（木瓜蛋白酶 ）静置1015分钟DNA滤液 方案三：30滤液6067处理过滤获 得DNA滤液 4 DNA析出与鉴定 在滤液中仍然含有一些杂质，怎样除去这 些杂质呢？得到的DNA呈何颜色？ 滤液与等体积的冷却酒精混合均匀，静置2 3分钟，析出的白色丝状物就是DNA。 DNA呈白色。 怎样鉴定析出的白色丝状物就是DNA呢？ 阅读教材。 阅读。简述DNA的鉴定过程。 具体做法。试管2支，编号甲乙各加等量 5mLNaCl溶液甲中放入少量白色丝状物 ，使之溶解各加4mL二苯胺，混合均匀 沸水浴5min观察颜色变化 3实验操作 制
7、备鸡血细胞液加柠檬酸钠，静 置或离心 破碎细胞，释放DNA 加蒸馏水，同一方 向快速通方向搅拌 过滤，除去细胞壁、细胞膜等。 溶解核内DNA 加入NaCl至2mol/L ，同一方向缓慢搅拌 DNA析出 加蒸馏水至 0.14mol/L，过滤，在溶解到2mol/L溶液中 除去细胞质中的大部分物质。 DNA初步纯化 与等体积95冷却 酒精混合，析出白色丝状物 除去核蛋白、RNA、多糖等。 DNA鉴定 二苯胺，沸水浴， 呈现蓝色 其它注意事项： 在鸡血中加入柠檬酸钠防止凝固；鸡血静 置或离心以提高细胞悬液浓度；使用塑料 烧杯；使用尼龙布过滤；玻棒沿同一方向 搅拌；玻棒搅拌要缓慢（细胞破裂快速搅 拌）；玻棒不要碰到烧杯壁；二苯胺试剂 要现用现配等。为了提高DNA纯度，在科 学实验中通常使用的洗涤剂有十六烷基三 甲基溴化铵（CTAB）、十二烷基硫酸钠（ SDS）。
