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1、家兔急性 肾功能不全实验目的n n复制急性中毒性肾衰动物模型，通过对复制急性中毒性肾衰动物模型，通过对 肾功能指标的检测及肾脏形态学改变的肾功能指标的检测及肾脏形态学改变的 观察，了解中毒家兔肾功能的改变。判观察，了解中毒家兔肾功能的改变。判 断、分析致病因素及导致急性肾衰的可断、分析致病因素及导致急性肾衰的可 能发病机制。能发病机制。实验原理n n肾脏是一个多功能器官，其主要功能之一肾脏是一个多功能器官，其主要功能之一 是泌尿功能。肾脏通过调节肾血流、肾小是泌尿功能。肾脏通过调节肾血流、肾小 球滤过率、肾小管排泌与重吸收以及排泄球滤过率、肾小管排泌与重吸收以及排泄 体内代谢物质以维持机体内环
2、境的稳定。体内代谢物质以维持机体内环境的稳定。 当肾血流量减少，肾小球滤过率下降或肾当肾血流量减少，肾小球滤过率下降或肾 小管排泌重吸收功能障碍时，肾的泌尿功小管排泌重吸收功能障碍时，肾的泌尿功 能受到影响，从而导致肾功能不全。能受到影响，从而导致肾功能不全。n nARFARF发病机制的中心环节是发病机制的中心环节是GFRGFR的降低。的降低。 肾血流量减少，肾小管阻塞、肾小管原尿回肾血流量减少，肾小管阻塞、肾小管原尿回 漏或肾细胞损伤等均可导致漏或肾细胞损伤等均可导致GFRGFR的降低。的降低。n n本实验通过皮下注射本实验通过皮下注射1 1HgClHgCl2 2造成家造成家 兔急性肾小管性
3、坏死。兔急性肾小管性坏死。n n通过本实验学习复制急性通过本实验学习复制急性中毒性中毒性肾衰肾衰 动物模型；观察肾衰家兔的一般状态、酚红动物模型；观察肾衰家兔的一般状态、酚红 排泄率、肌酐清除率等变化；观察急性肾衰排泄率、肌酐清除率等变化；观察急性肾衰 时肾脏大体形态；根据实验指标，判断、分时肾脏大体形态；根据实验指标，判断、分 析急性肾衰的发病机制及病理生理变化；对析急性肾衰的发病机制及病理生理变化；对 急性肾衰的病因、发病机制和功能代谢变化急性肾衰的病因、发病机制和功能代谢变化 加深理解。加深理解。实验对象n n家兔家兔2 23kg3kg。实验药品与器材n n1 1HgClHgCl2 2、
4、生理盐水、生理盐水、2525氨基甲酸乙氨基甲酸乙 酯、酯、0 06 6酚红、酚红、2020葡萄糖、葡萄糖、1010 NaOHNaOH、手术器械一套，注射器、试管、手术器械一套，注射器、试管、 加样器、加样器、721721分光光度计、水浴锅、离心分光光度计、水浴锅、离心 机。机。 实验步骤n n复制肾功能衰竭模型：于实验前一天，复制肾功能衰竭模型：于实验前一天， 取两只家兔，称重，一只皮下或肌肉注取两只家兔，称重，一只皮下或肌肉注 射射1 1HgClHgCl2 2(o(o8 81 10ml0mlkg)kg)造成急造成急 性肾功能衰竭，为实验组兔；另一只皮性肾功能衰竭，为实验组兔；另一只皮 下或肌
5、肉注射等量的生理盐水下或肌肉注射等量的生理盐水(1(10ml0ml kg)kg)作为对照组兔。作为对照组兔。实验步骤n n观察：观察：24h24h后，比较两组动物的一般状态后，比较两组动物的一般状态 、活动情况与尿量。、活动情况与尿量。n n家兔称重，耳缘静脉注射家兔称重，耳缘静脉注射2525氨基甲酸氨基甲酸 乙酯乙酯4 40ml0mlkgkg，待动物麻醉后，固定，待动物麻醉后，固定 于兔台于兔台。角膜反射夹肢反射实验步骤家兔家兔心脏采血心脏采血35ml35ml置于一干燥管中（不抗置于一干燥管中（不抗 凝），放置凝），放置10min10min后，后，3000r/min3000r/min离心离心
6、 15min15min，小心吸取血清置于另一干燥管中，小心吸取血清置于另一干燥管中 ，备测血肌酐备测血肌酐实验步骤n n如果心脏采血失败，则如果心脏采血失败，则颈总动脉颈总动脉采血采血n n颈部正中剪毛，切开皮肤，分离左侧颈颈部正中剪毛，切开皮肤，分离左侧颈 总动脉，在动脉下穿两根丝线，用一根总动脉，在动脉下穿两根丝线，用一根 丝线结扎动脉的远心端，近心端用动脉丝线结扎动脉的远心端，近心端用动脉 夹夹闭，在结扎线下方的动脉壁上剪一夹夹闭，在结扎线下方的动脉壁上剪一 小斜口，然后向心脏方向插入动脉导管小斜口，然后向心脏方向插入动脉导管 放血放血3ml3ml备测血肌酐备测血肌酐实验步骤n n分离右
7、侧颈外静脉，插管用于输液。分离右侧颈外静脉，插管用于输液。输输 液速度一定要慢液速度一定要慢n n下腹部正中剪毛，在耻骨联合上约下腹部正中剪毛，在耻骨联合上约1 1 5cm5cm处做切口，长约处做切口，长约4cm4cm，暴露膀胱，暴露膀胱，用用 注射器收集注射器收集2ml2ml尿液于试管中，尿液于试管中，做做尿肌酐尿肌酐 检查。检查。实验步骤n n在膀胱底部，找出两侧输尿管，并分离在膀胱底部，找出两侧输尿管，并分离 之。在近膀胱端结扎输尿管，稍等片之。在近膀胱端结扎输尿管，稍等片 刻刻 ，待其略充盈后，用眼科剪剪一小口，待其略充盈后，用眼科剪剪一小口， 向肾脏方向插入一细塑料管向肾脏方向插入一
8、细塑料管( (塑料管事先塑料管事先 用肝素冲洗或充满肝素用肝素冲洗或充满肝素) )，结扎并固定，结扎并固定， 用于收集尿液。用于收集尿液。实验步骤酚红排泄率测定：酚红排泄率测定：n n1) 1)两组家兔分别耳缘静脉注射两组家兔分别耳缘静脉注射o o6 6酚酚 红溶液红溶液(1ml(1mlkg)kg)，接着从颈外静脉插管，接着从颈外静脉插管 处注射处注射2020葡萄糖溶液葡萄糖溶液(30ml(30mlkg)kg)。收集。收集 从开始注射酚红起从开始注射酚红起15min15min或或30min30min的尿液的尿液 。换算成单位时间的尿量。换算成单位时间的尿量(ml(mlmin)min)。实验步骤
9、n n将收集的尿液倒入将收集的尿液倒入500ml500ml量筒内，加量筒内，加1010 NaOH NaOH lOmllOml，用自来水补充至，用自来水补充至500ml500ml处处 ，混匀后，取出适当量放入与比色管，混匀后，取出适当量放入与比色管口口 径相同径相同的试管中与标准比色管比较，得的试管中与标准比色管比较，得 出出15min15min或或30min30min内肾脏酚红排泄率。内肾脏酚红排泄率。实验步骤n n肾脏酚红排泄率：是反映肾血流量与肾肾脏酚红排泄率：是反映肾血流量与肾 小管排泌功能的指标。小管排泌功能的指标。正常情况下从静正常情况下从静 脉注入酚红后脉注入酚红后15min15m
10、in或或30min30min，肾脏酚红，肾脏酚红 排泄率分别排泄率分别30%30%与与45%45%。实验步骤n n血清和尿液肌酐含量测定血清和尿液肌酐含量测定苦味酸沉定苦味酸沉定 蛋白法蛋白法n n原理：在碱性条件下，苦味酸与（血、尿原理：在碱性条件下，苦味酸与（血、尿 中）肌酐作用，生成黄红色苦味酸肌酐，中）肌酐作用，生成黄红色苦味酸肌酐， 使溶液呈色后进行使溶液呈色后进行比色比色测定；然后加测定；然后加醋酸醋酸 ，在酸性环境中，黄红色的苦味酸肌酐被，在酸性环境中，黄红色的苦味酸肌酐被 清除，非肌酐物质（清除，非肌酐物质（假肌酐）假肌酐）呈色，呈色，两者两者 比色之差为血及尿中肌酐。比色之差
11、为血及尿中肌酐。按表按表1 1、表、表2 2的的 操作步骤测定血清及尿液肌酐。操作步骤测定血清及尿液肌酐。表1 血清肌酐测定单单位（ml）标标准管测测定管空白管肌酐标酐标 准 应应用液（ 0.05mg/ml ）0.20_血清_0.20_蒸馏馏水_0.20碱性苦味酸2.02.02.0实验步骤n n混匀，混匀，37OC37OC水浴水浴30 min30 min，以以510nm510nm波长比波长比 色，空白管调零，读色，空白管调零，读ODOD值，然后，各管加值，然后，各管加 50%50%醋酸醋酸液两滴，放置液两滴，放置6min6min后，在测后，在测ODOD 值。计算：值。计算：n nCr Crp
12、p(mg%)=OD(mg%)=OD测测ODOD测测/ OD/ OD标标ODOD标标 0.01/0.20.01/0.2 100 100 n n正常值正常值:0.7:0.70.8mg%(1mg%=88.40.8mg%(1mg%=88.4 mol/L)mol/L) 。表2 尿肌酐测定单单位（ml）测测定管标标准管空白管尿液（原尿或1 ：50稀释释）0.1_尿肌酐标酐标 准应应 用液（ 0.5mg/ml）_0.1_蒸馏馏水_0.1碱性苦味酸222125%NaoH0.50.50.5实验步骤n n混匀，放混匀，放10min10min后加蒸馏水后加蒸馏水6 6。0ml0ml，摇匀，摇匀 ，以以530nm53
13、0nm波长比色，空白管调零，读波长比色，空白管调零，读 ODOD值。计算：值。计算：n nCr Cru u(mg%)=OD(mg%)=OD测测/OD/OD标标 0.05mg0.05mg 100ml/0.1ml100ml/0.1mln n实验步骤n n尿肌酐尿肌酐/ /血肌酐的意义：器质性肾衰时比血肌酐的意义：器质性肾衰时比 值值2020；功能性肾衰时比值；功能性肾衰时比值4040。内生肌酐清除率(Ccr)： 能较准确的反映肾小球滤过率能较准确的反映肾小球滤过率(GFR) (GFR) n nCcr=CrCcr=Cr尿尿 尿量（尿量（ml/minml/min）/Cr/Cr血血n n为此，实验步骤为
14、此，实验步骤收集尿液收集尿液必须采集有必须采集有“ “记录单位记录单位 时间的尿量时间的尿量” ”的尿液样品做尿肌酐的尿液样品做尿肌酐CrCr尿尿测定，测定， 才能与血肌酐才能与血肌酐CrCr血血比，计算出比，计算出GFRGFR。肌酐能自。肌酐能自 由从肾小球滤过，在肾小管中很少被重吸收，由从肾小球滤过，在肾小管中很少被重吸收， 但有少量是由近曲小管分泌。内生肌酐在血浆但有少量是由近曲小管分泌。内生肌酐在血浆 中的浓度相当低，近曲小管分泌的肌酐量可忽中的浓度相当低，近曲小管分泌的肌酐量可忽 略不计，因此略不计，因此CcrCcr与菊粉清除率相近，可以代表与菊粉清除率相近，可以代表 肾小球滤过率。
15、肾小球滤过率。实验步骤肾形态学观察：处死家兔，取出肾脏，称肾形态学观察：处死家兔，取出肾脏，称 肾重量，计算肾体比，比较两组家兔肾肾重量，计算肾体比，比较两组家兔肾 脏外形，纵向剖开肾脏，观察皮髓质条脏外形，纵向剖开肾脏，观察皮髓质条 纹、色泽等。纹、色泽等。思考题n n1 1试分析氯化高汞（升汞）中毒性急性试分析氯化高汞（升汞）中毒性急性 肾功能不全的主要发病机制是什么？肾功能不全的主要发病机制是什么？n n2 2哪些实验结果可说明肾血流量减少也哪些实验结果可说明肾血流量减少也 参与升汞中毒性肾衰的发生机制？为什参与升汞中毒性肾衰的发生机制？为什 么肾血液量会减少？么肾血液量会减少？n n3. 3. 急性肾功衰时，家兔的尿液有哪些变急性肾功衰时，家兔的尿液有哪些变 化？为什么？化？为什么？
