《中图版生物选修1第一节《 蛋白质的提取和分离》(素材)教学设计》由会员分享，可在线阅读，更多相关《中图版生物选修1第一节《 蛋白质的提取和分离》(素材)教学设计（3页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、 中小学教育资源站（http:/)，百万资源免费下载，无须注册！中小学教育资源站 http:/ 6.16.1 蛋白质的提取和分离蛋白质的提取和分离问题：问题：斐林试剂和双缩脲试剂成份相同，为什么斐林试剂不能用来检测蛋白质？斐林试剂和双缩脲试剂成份相同，为什么斐林试剂不能用来检测蛋白质？（1）溶液浓度不同 斐林试剂中乙液为 0.05g/ml 的 CuSO4 溶液，双缩脲试剂中 CuSO4 溶液为 0.01g/ml（2）使用原理不同 斐林试剂是新配制的溶液，它在加热条件下与醛基反应，被还原成砖红色的沉淀，可用于鉴定可溶性还原糖的存在。用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时，溶液的颜色变化过程为：浅蓝色棕色砖
2、红色（沉淀）。 鉴定生物组织中是否含有蛋白质时，常用双缩脲法，使用的是双缩脲试剂，发生的是双缩脲反应。双缩脲反应实质是在碱性环境下的与双缩脲试剂发生的紫色反应。而蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，所以蛋白质都能与双缩脲试剂发生颜色反应，可以用双缩脲试剂鉴定蛋白质的存在。 （3）使用方法不同 斐林试剂使用时，先反溶液和溶液混合（将滴溶液滴入溶液中），而后立即使用,需要加热。来源:学科网来源:学+科+网双缩脲试剂使用时，先加入溶液（2mL），振荡摇匀，造成碱性的反应环境，然后再加入 34 滴溶液，振荡摇匀后观察现象。（4）颜色反应不同 斐林试剂与还原糖混合是产生砖红色沉淀，双缩脲试剂与蛋
3、白质反应产生紫色反应。来源:Zxxk.Com来源:学科网 ZXXK一、植物组织蛋白质提取方法 来源:学科网 ZXXK1、根据样品重量（1g 样品加入 3.5ml 提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4 小时）。3、用离心机离心 8000rpm40min4或 11100rpm20min44、提取上清液，样品制备完成。蛋白质提取液：300ml1、1Mtris-HCl（PH8） 45ml2、甘油（Glycerol）75ml3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g这种方法针对 SDS-P
4、AGE，垂直板电泳！来源:Zxxk.Com二、植物组织蛋白质提取方法 氯醋酸丙酮沉淀法1、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积 3 倍的提取液在-20的条件下过夜，然后离心（48000rpm 以上 1小时）弃上清。中小学教育资源站（http:/)，百万资源免费下载，无须注册！中小学教育资源站 http:/ 3、加入等体积的冰浴丙酮（含 0.07%的 -巯基乙醇），摇匀后离心（48000rpm 以上1 小时），然后真空干燥沉淀，备用。来源:学科网 ZXXK4、上样前加入裂解液，室温放置 30 分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（158000rpm 以上 1 小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临
5、时保存在 4待用。5、用 Brandford 法定量蛋白，然后可分装放入-80备用。药品：提取液：含 10%TCA 和 0.07%的 -巯基乙醇的丙酮。裂解液：2.7g 尿素0.2gCHAPS 溶于 3ml 灭菌的去离子水中（终体积为 5ml），使用前再加入 1M 的DTT65ul/ml。这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！来源:学.科.网 Z.X.X.K 三、植物材料：水稻苗，叶鞘，根1、200 毫克样品置于冰上磨碎2、加 lysis buffer，离心，10000rpm，4 度，5min 取上清3、重复离心 5minlysis bu
6、ffer：urea np-40 ampholine 2-me pvp-40来源:学,科,网 四、蛋白质样品制备秧苗蛋白质样品的提取按 Davermal 等（1986）的方法进行。100mg 材料剪碎后加入 10mgPVP-40(聚乙烯吡咯烷酮)及少量石英砂，用液氮研磨成粉，加入 1.5 ml 10% 三氯乙酸（丙酮配制，含 10mM 即 0.07%-巯基乙醇），混匀，-20沉淀 1 小时，4，15000 r/min 离心 15 min，弃上清，沉淀复溶于 1.5ml 冷丙酮(含 10 mM-巯基乙醇)，再于-20沉淀 1 小时，同上离心弃上清，（有必要再用 80丙酮(含 10 mM-巯基乙醇所
7、得沉淀低温冷冻真空抽干。按每 mg 干粉加入 20l（可调） UKS 液9.5 M 尿素，5mM 碳酸钾，1.25%SDS，0.5%DTT(二硫苏糖醇)，2% Ampholine (Amersham Pharmacia Biotech Inc，pH3.5-10)，6% Triton X-100 ，37温育 30min，期间搅动几次，28 度 （温度低，高浓度的尿素会让溶液结冰）16000 r/min 离心 15 min，离心力越大时间长一点越好！上清即可上样电泳。或者-70 度保存来源:Z,xx,k.Com五、植物根中蛋白质的抽取(1) sample, 液氮研磨(2) 装 1.5 ml centrifuge 用 tube(3) 加 1M KH2PO4 K2HPO4 700 ul(4) 12000 rpm, 4 度, 10-15minite(5) 取上层液，蛋白质就在里面 来源:学.科.网 Z.X.X.K来源:Z|xx|k.Com中小学教育资源站（http:/)，百万资源免费下载，无须注册！中小学教育资源站 http:/
