《微生物实验三学校公共环境微生物的分离与纯化》由会员分享，可在线阅读，更多相关《微生物实验三学校公共环境微生物的分离与纯化（22页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、实验三 学校公共环境微生物 的分离与纯化 林标声实验三 学校公共环境微生物的分离与纯化 n一、实验目的n通过本实验的学习，使学生掌握微生物的 分离与纯化的原理与方法，熟练掌握微生 物的染色方法以及微生物的计数等基本技 能，为今后微生物的遗传、生理以及分子 生物学等学习打下基础。二、实验原理-空气中微生物的发布n空气中微生物的主要来源于土壤、水体表 面、动植物、人体及生产活动、污水污物 处理等，其组成浓度不稳定，种类多样， 有细菌、真菌、病毒、噬菌体等。空气微 生物是大气污染物之一。空气微生物往往 吸附在悬浮颗粒物上，随风飘荡，可导致 人类和动植物某些疾病的发生与传播，且 常与环境的其他污染物协
2、同作用，致使环 境恶化，空气质量降低。空气微生物的浓 度是评价空气质量的重要指标之一。实验原理-空气中微生物的发布n校园是学生集中生活学习的区域，采用微 生物学方法，检测校园空气微生物的时空 分布，可进一步了解校园空气污染现状， 对于防止呼吸道疾病的传播，保护学生身 体健康具有重要的现实意义。n土壤、水样、食品等三、实验器材 n（一）主要仪器n高压蒸汽灭菌锅、生化培养箱、电子分析天平 、干燥箱、显微镜、超净工作台n（二）主要试剂n牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、可溶性淀粉 、KNO3、KH2P04、K2HP04.3H20、MgS04.7H20、 FeS04. 7H20、K2HP04、蔗糖、葡萄糖
3、、链霉素 、孟加拉红溶液、碱性美兰染液、革兰氏染色 液、香柏油、二甲苯等四、实验方法和步骤n1. 培养基的配制（牛肉膏蛋白胨培养基）n2. 选定采样点（教学楼、宿舍、图书馆、食堂、体 育馆、操场等）n3. 不同采样时间进行采样（上午、中午、下午各1 次），每次采样时间分5分钟、10分钟、30分钟（ 平皿暴露时间）采样。n4. 采样的平皿进行培养n5. 菌落计数n6. 菌落鉴别n7. 作出校园空气微生物分布图（数量、种类）实验设计方案n（1）空气 将一个牛肉膏蛋白胨琼脂平板 放在当时做实验的实验室，移去皿盖，使 琼脂表面暴露在空气中，5min后盖上皿盖n（2）超净工作台 将一个牛肉膏蛋白胨琼 脂
4、平板放在超净工作台上，移去皿盖，使 琼脂培养基表面暴露在超净工作台内的空 气中，15min后盖上皿盖采样空气中细菌总数计算公式n空气的细菌数= W* 1000/ (Q * T)n式中：W-平皿细菌数，Q-流量:L/min ，T-采样时间：min实验设计方案n（3）手指（洗手前与洗手后）uA 分别在两个琼脂平板上标明洗手前、后，并用记号笔 在皿底划分三个区域uB 移去皿盖，同组的三个人将未洗过的手指分别在三个 区域的琼脂平板表面轻轻的来回画线。uC 用肥皂和刷子用力刷手，在流水中冲洗干净，干燥后 ，在另一琼脂平板表面来回移动，盖上皿盖n（4）头发 在揭开皿盖的琼脂平板上方，用手将头发用力摇动数
5、次，使细菌降落倒琼脂平板表面，然后盖上皿盖。实验设计方案n（3）土壤样品采集不同的土壤样品，称1g溶解于100mL的无菌生理 盐水中（0.85%NaCl），梯度稀释，取0.2mL稀释液涂布于 含牛肉膏蛋白胨培养基平板中，37培养24h，计数。 （4）其他样品如鱼丸、方便面调味料等，各取1g，捣碎后，溶于100mL 的无菌生理盐水，剩余操作同上（5）水样品微生物检测：取100mL水检测，其余步骤同上0.90.10.1ml0.1ml0.1ml0.1ml0.1ml0.1ml0.1ml0.1ml0.9ml分离纯化 基本流程每克含菌样品中微生物 的活细胞数（菌落形成 数，CFU （同一稀释度平板上菌 落
6、平均数 5稀释倍数 ）/含菌样品克数 倾注平板倒置培养 培养的时候培养基会有水分蒸 发上去的嘛，当水蒸气累积到 一定的程度会聚成水滴，倒流 到培养中的细菌中，冲散菌体 ，不利于培养观察。 倒置培养可以防止水蒸气蒸发 分离纯纯化纯化（平板划线法） 倒平板划线培养挑菌落纯种（纯培养） 移接斜面常用的接种方法常用的接种方法 划线接种 点接种 穿刺接种 涂布接种 液体接种 注射接种平板划线分离的方法1.斜线法 2.曲线法 3.方格法 4.放射法 5.四格法四、实验结果n1. 空气中微生物数量、性质（革兰氏染 色）、分离保存n2. 头发、手指等一些物品表面的微生物数 量、性质（革兰氏染 色） ，分离保存n3. 每g样品中（土壤、水样、食品）中的 微生物数量、性质（革兰氏染 色） 、分 离保存。思考题n1. 影响校园环境空气中微生物分布的因素 有哪些？n2、如何进一步改进本实验？实验安排n6人一组n除实验报告以外，还必须上交打印稿的实验设计方案，包括：实验目的，实验原 理，实验器材，实验设计步骤n 本次实验共两周时间下一个实验n实验四、放线菌、霉菌、酵母菌的形态观 察
