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1、视黄醇结合蛋白视黄醇结合蛋白4 4与代谢综合征的相关性研究与代谢综合征的相关性研究作者：作者：王湘芸 学科专业：学科专业：老年病学授予学位：授予学位：博士学位授予单位：学位授予单位：第二军医大学导师姓名：导师姓名：殷仁富学位年度：学位年度：2010目的：观察脂肪因子视黄醇结合蛋白4(Retinol-binding protein-4，RBP4)与代谢综合征的关系，探讨它对胰岛素抵抗、肥胖以及糖、脂代谢等方面的作用，对代谢综合征的并发症如冠心病、糖尿病等疾病的影响，以及他汀类药物对 RBP4表达水平的调控作用。方法：ELISA 试剂盒测定血清 RBP4在单纯冠心病和冠心病合并2型糖尿病患者中的变
2、化，观察RBP4与体脂、糖、脂代谢及肝功能的关系。建立代谢综合征大鼠模型，ELISA 法比较两组血清 RBP4水平、IL-6和 MDA，Western-blot 方法观察肝脏、附睾脂肪和心肌组织中 RBP4的含量变化，RT-PCR方法检测 RBP4、脂联素和 PPAR- mRNA 在各个组织的表达变化。体外诱导3T3-L1小鼠前脂肪细胞为脂肪细胞后，Western-blot 方法观察不同浓度和不同时间他汀类药物辛伐他汀对细胞 RBP4表达水平的调控作用，RT-PCR 方法检查不同组的辛伐他汀对于 RBP4、脂联素和 PPAR- mRNA 的表达变化。结果：冠心病合并2型糖尿病患者血清 RBP4
3、升高显著，单纯冠心病患者血清 RBP4无明显升高，腰围、TG 和年龄是 RBP4的独立相关因素。代谢综合征大鼠的肝脏、附睾脂肪和心肌组织 RBP4含量均升高显著，血清 RBP4、IL-6和 MDA 升高显著，RBP4mRNA 在肝脏、脂肪和心脏组织中均升高，脂联素 mRNA 下降，PPAR- mRNA 升高。辛伐他汀可以显著降低3T3-L1诱导的成熟脂肪细胞分泌 RBP4。结论：RBP4与冠心病可能无显著相关，与冠心病合并2型糖尿病相关，与血糖、血脂、血压以及胰岛素抵抗有关指标有着不同程度的相关，提示 RBP4可能是提示代谢综合征的一项血清学标志物。代谢综合征中 RBP4与脂联素表达相反。辛伐
4、他汀可以显著降低小鼠脂肪细胞 RBP4的表达，可能与PPAR- 有关。近年来，代谢综合征的发病率呈逐年上升趋势，其并发症的严重性日益升高，对代谢综合征发病机制的研究也越来越受到人们的重视。2005年 Yang 博士等人发现了视黄醇(维生素 A)结合蛋白4，不仅是转运维生素 A 的运载蛋白，还是一种与胰岛素抵抗密切相关的脂肪因子，而胰岛素抵抗目前来说是代谢综合征发病机制的核心因素。动物试验中发现 RBP4在大鼠肝脏、附睾脂肪、肾脏，心肌和骨骼肌都有表达，在临床试验中发现血清 RBP4水平与糖、脂代谢，非酒精性肝硬化等疾病都有关系，但其中具体机制仍然未明确。本次研究以临床试验，动物模型和体外细胞试
5、验三个部分，分布阐述 RBP4与代谢综合征的相关性研究。第一部分冠心病患者以及冠心病合并2型糖尿病患者血清视黄醇结合蛋白4水平的临床研究目的：Yang 等发现了一种参与胰岛素抵抗发生的脂肪因子视黄醇结合蛋白4(RBP4)。临床试验证实，在肥胖和2型糖尿病患者中血清 RBP4升高明显。RBP4主要由肝脏合成和分泌，在人体内，肝脏、脂肪细胞表达较多，在心脏组织、骨骼肌中表达量较低。RBP4与心肌细胞的相关作用尚未明确，它在人体内的病理生理意义仍需进一步的研究。本研究主要通过临床研究探讨：1、血清 RBP4在非冠心病，单纯冠心病冠心病患者以及冠心病合并2型糖尿病患者的变化；2、血清 RBP4与体脂、
6、糖、脂代谢及肝功能的关系。对象与方法：我们入选2009年8月至2010年1月在本院经冠脉造影检查后年龄在40-80岁之间共120例病人，分组如下：非冠心病组(NS)30例，单纯冠心病(CHD)(n=45)，冠心病合并糖尿病患者(CHD+DM)(n=45)。测定受试者的体重指数(BMI)、腰臀比(WHR)、空腹状态下血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbAlc)、谷草转氨酶()、谷丙转氨酶(ALT)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和 RBP4。小结：1、冠心病合并2型糖尿病患者的血清 RBP4显著升高，单纯冠心病患者血清 RBP
7、4未见明显升高；2、血清 RBP4与 WHR，TG，年龄呈正相关；3、 RBP4与血糖、血压、血脂以及中心型肥胖等与胰岛素抵抗有关指标有着不同程度的相关，表明 RBP4是提示代谢综合征的一项血清学标志物；4、冠心病合并2型糖尿病患者的 ALT 和 AST 都较高，其肝脏可能存在不同程度脂质沉积，但我们未发现这组人群的血清 RBP4变化与 ALT 和 AST 有显著相关。第二部分视黄醇结合蛋白4在代谢综合征大鼠各组织中的表达以及血清 RBP4与其他细胞因子的关系目的：RBP4在肝脏、脂肪和心肌等多种组织均有合成和分泌。本研究通过高盐高脂饲养状态下形成的代谢综合征大鼠模型，阐明 RBP4在中各组织
8、的表达水平，并研究大鼠血清 RBP4与炎症因子IL-6以及氧化应激指标丙二醛的关系，进一步阐明 RBP4与代谢综合征的关系。材料与方法：7周龄雄性健康 SD 大鼠25只，体重(25020)g。普通饲料喂养1周后随机分成2组：对照组12只继续普通饲料喂养，模型组13只给予高脂高盐饲料；每月测量体重、血压、心率、空腹血糖、空腹胰岛素，每2月测血脂，32周行有创血压和心率检查，高胰岛素-正常血糖钳夹试验和葡萄糖耐量试验。在32周时，以2戊巴比妥钠45mg/kg 腹腔注射麻醉，测量鼻到肛门的长度为体长，并计算 Lees 肥胖指数，开腹后迅速摘取心脏组织，肝脏组织，附睾脂肪组织制成冰冻切片，应用RT-P
9、CR，Western-blot 和免疫组化的方法测定和比较各组织中 RBP4的表达。利用 ELISE 法测定大鼠血清中 RBP4，IL-6，丙二醛的浓度。小结：1、MS 大鼠血清 RBP4显著高于 NC 组；2、MS 大鼠肝脏组织、附睾脂肪组织的 RBP4mRNA 显著高于 NC 组，心肌组织的 RBP4mRNA 与 NC组相比无明显差异。MS 大鼠肝脏组织、脂肪组织的脂联素 mRNA 显著低于 NC 组，心脏脂联素 mRNA与 NC 组无明显差异；3、代谢综合征大鼠血清炎症因子和氧化应激产物升高明显。第三部分辛伐他汀对3T3-L1诱导的脂肪细胞视黄醇结合蛋白4表达的影响目的：本实验尝试在细胞
10、水平上研究以辛伐他汀为代表的他汀类药物对于3T3-L1诱导的脂肪细胞中视黄醇结合蛋白4表达是否有调控作用，以进一步研究他汀类药物在代谢综合征中的重要作用。材料与方法：培养3T3-L1小鼠前脂肪细胞诱导8-12天后为成熟的脂肪细胞，后加入辛伐他汀干预。分对照组、辛伐他汀0.1uM24小时、1uM24小时、0.1u M48小时、1uM48小时五组。应用 RT-PCR，Western-blot 的方法测定和比较各组 RBP4的表达，用 ELISE 法测定各组中 IL-6，丙二醛的浓度。小结：1、辛伐他汀对于小鼠脂肪细胞 RBP4有抑制作用，随时间和浓度增加而抑制作用明显；2、辛伐他汀对于脂肪细胞中炎性因子 IL-6和氧化应激指标 MDA 有明显抑制作用。结论：1、RBP4与冠心病可能无显著相关性，但与血糖、血脂、血压等与胰岛素抵抗有关指标有着不同程度的相关，提示 RBP4可能是提示代谢综合征的一项血清学标志物；2、RBP4在代谢综合征大鼠模型中肝脏，附睾脂肪和心脏均表达增强；3、辛伐他汀有抗炎，抗氧化应激的作用，同时能抑制脂肪细胞 RBP4的表达，它在降脂作用以外还可能有抗胰岛素抵抗的积极作用。
