深部感染真菌

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1、第二十四章第二十四章 深部感染真菌深部感染真菌刘文恩刘文恩深部感染真菌深部感染真菌n n深部感染真菌是指能侵袭深部组织和内脏及深部感染真菌是指能侵袭深部组织和内脏及 全身的真菌，主要有假丝酵母菌、隐球菌、全身的真菌，主要有假丝酵母菌、隐球菌、 曲霉、毛霉、组织胞浆菌和卡氏肺孢菌等，曲霉、毛霉、组织胞浆菌和卡氏肺孢菌等， 其中以隐球菌感染较常见。其中以隐球菌感染较常见。n n组织胞浆菌为二相性真菌，假丝酵母菌、曲组织胞浆菌为二相性真菌，假丝酵母菌、曲 霉菌、毛霉菌和卡氏肺孢菌等为条件致病性霉菌、毛霉菌和卡氏肺孢菌等为条件致病性 真菌，只有在一定条件下才引起机体致病。真菌，只有在一定条件下才引起机

2、体致病。假丝酵母菌属假丝酵母菌属n n假丝酵母菌（假丝酵母菌（CandidaCandida），俗称念珠菌，生），俗称念珠菌，生 物学分类为半知菌亚门、半知菌纲、隐球物学分类为半知菌亚门、半知菌纲、隐球 菌目、假丝酵母菌属。菌目、假丝酵母菌属。n n本属菌有本属菌有8181个种，其中有个种，其中有1111种对人有致病性种对人有致病性 , ,其中以白假丝酵母菌为最常见的致病菌其中以白假丝酵母菌为最常见的致病菌 白假丝酵母菌白假丝酵母菌n n临床意义：可引起女性假丝酵母菌性阴道炎、临床意义：可引起女性假丝酵母菌性阴道炎、 外阴炎、念珠菌龟头炎、包皮炎鹅口疮等。外阴炎、念珠菌龟头炎、包皮炎鹅口疮等。n

3、 n生物学特征：白假丝酵母菌呈圆形或卵圆形，生物学特征：白假丝酵母菌呈圆形或卵圆形，直径直径36m36m。革兰阳性，着色不均匀。出芽。革兰阳性，着色不均匀。出芽方式繁殖，在组织内可见芽生孢子、假菌丝，方式繁殖，在组织内可见芽生孢子、假菌丝，在玉米粉培养基中可产生假菌丝和厚膜孢子。在玉米粉培养基中可产生假菌丝和厚膜孢子。 白假丝酵母菌微生物检白假丝酵母菌微生物检 验验一、标本直接检查一、标本直接检查二、分离培养鉴定二、分离培养鉴定三、药物敏感试验三、药物敏感试验四、抗体检测四、抗体检测五、动物试验五、动物试验 分离培养及鉴定分离培养及鉴定n n菌落特征菌落特征: :标本标本 沙氏培养基上沙氏培养

4、基上 2525或或3737培养培养14d14d后，培养基表面可出现奶后，培养基表面可出现奶油色类油色类 酵母型菌落酵母型菌落。镜检可见假菌丝和芽。镜检可见假菌丝和芽生孢子。生孢子。n n鉴定试验鉴定试验: : 芽管形成试验芽管形成试验 ，厚膜孢子形成试，厚膜孢子形成试验，糖同化或发酵试验，验，糖同化或发酵试验，产色培养基鉴定产色培养基鉴定沙氏斜面血平板返回芽管形成试验返回产色培养基 返回热带假丝酵母菌热带假丝酵母菌 n n直接显微镜检查直接显微镜检查 将标本作涂片革兰染色后镜将标本作涂片革兰染色后镜检，观察革兰阳性的假丝酵母菌。检，观察革兰阳性的假丝酵母菌。n n分离培养与鉴定分离培养与鉴定

5、标本标本 沙氏培养基上形成沙氏培养基上形成色暗而干燥的菌落取菌落作色暗而干燥的菌落取菌落作TZCTZC反应反应 取菌取菌落作糖发酵或同化试验。芽管形成较迟（血清落作糖发酵或同化试验。芽管形成较迟（血清中中6h6h以上），不形成厚膜孢子、动物试验阴性以上），不形成厚膜孢子、动物试验阴性隐隐 球球 菌菌 属属n n广泛分布于自然界，也存在于人体表、口腔广泛分布于自然界，也存在于人体表、口腔和肠道中。和肠道中。 n n生物学特性：在组织中呈圆形或卵圆形，直生物学特性：在组织中呈圆形或卵圆形，直径一般在径一般在46m46m，外周有宽厚荚膜，荚膜较，外周有宽厚荚膜，荚膜较菌体大菌体大1313倍，折光性强

6、，一般染色法不易着倍，折光性强，一般染色法不易着色而难以发现而得名。常采用墨汁负染色色而难以发现而得名。常采用墨汁负染色法，在黑色背景下可镜检到透亮菌体和宽厚法，在黑色背景下可镜检到透亮菌体和宽厚荚膜，非致病性隐球菌无荚膜。荚膜，非致病性隐球菌无荚膜。新生隐球菌（墨汁负染色） 隐球菌微生物检验隐球菌微生物检验 n n直接镜检：用病人脑脊液作墨汁负染色检查是诊断直接镜检：用病人脑脊液作墨汁负染色检查是诊断隐球菌脑膜炎最简便、快速之方法。隐球菌脑膜炎最简便、快速之方法。n n抗原检测：用免疫学方法检测隐球菌荚膜多糖特异抗原检测：用免疫学方法检测隐球菌荚膜多糖特异性抗原，已成为临床上的常规诊断方法，

7、其中以乳性抗原，已成为临床上的常规诊断方法，其中以乳胶凝集试验最为常用，此法简便、快速。胶凝集试验最为常用，此法简便、快速。n n核酸检测、药物敏感试验、抗体检测。核酸检测、药物敏感试验、抗体检测。n n分离培养：将标本接种在沙氏培养基上，病原性隐分离培养：将标本接种在沙氏培养基上，病原性隐球菌在球菌在2525和和3737孵育的可生长，而非病原性隐球孵育的可生长，而非病原性隐球菌在菌在3737时不生长。培养时不生长。培养25d25d后观察菌落形态特后观察菌落形态特点，并取菌落作印度墨汁负染色镜检。点，并取菌落作印度墨汁负染色镜检。新生隐球菌菌落新生隐球菌微生物鉴定新生隐球菌微生物鉴定1. 1.

8、酚氧化酶试验：将菌接种酚氧化酶试验：将菌接种L-L-多巴枸橼酸铁和咖啡酸多巴枸橼酸铁和咖啡酸培养基中，培养培养基中，培养25d25d，新生隐球菌呈棕黑色菌，新生隐球菌呈棕黑色菌落。用已知新生隐球菌和浅白隐球菌分别作阳性和落。用已知新生隐球菌和浅白隐球菌分别作阳性和阴性对照。阴性对照。 2. 2.脲酶试验：新生隐球菌能产生脲酶，可分解尿素琼脂脲酶试验：新生隐球菌能产生脲酶，可分解尿素琼脂培养基的尿素形成培养基的尿素形成NH4NH4和和COCO2 2，使培养基，使培养基pHpH升高，升高，培养基由黄色变为粉红色。白假丝酵母菌则为阴性。培养基由黄色变为粉红色。白假丝酵母菌则为阴性。3. 3.糖同化及

9、发酵试验：新生隐球菌能同化葡萄糖、半糖同化及发酵试验：新生隐球菌能同化葡萄糖、半乳糖、蔗糖和肌醇，但不能发酵糖类、不同化硝酸乳糖、蔗糖和肌醇，但不能发酵糖类、不同化硝酸盐。非致病性隐球菌则不能同化肌醇。盐。非致病性隐球菌则不能同化肌醇。曲曲 霉霉 菌菌 n n曲霉菌是条件致病菌，人体对其有极强免疫曲霉菌是条件致病菌，人体对其有极强免疫力，只有在人体免疫功能降低时才能致病。力，只有在人体免疫功能降低时才能致病。n n曲霉可引起呼吸系统曲霉病；全身性曲霉曲霉可引起呼吸系统曲霉病；全身性曲霉病；曲霉可产生毒素引起机体食物中毒；致病；曲霉可产生毒素引起机体食物中毒；致癌作用癌作用 。 曲霉微生物检验曲

10、霉微生物检验 n n直接显微镜检查直接显微镜检查 取痰液等被检材料涂于载玻片上取痰液等被检材料涂于载玻片上 ，在镜下可见分枝的菌丝、较粗的分生孢子头，在镜下可见分枝的菌丝、较粗的分生孢子头， 顶端膨大形成顶囊，顶囊上有小梗，小梗上有许顶端膨大形成顶囊，顶囊上有小梗，小梗上有许 多小分生孢子。多小分生孢子。n n抗原检测、抗体检测、药敏试验、皮肤试验。抗原检测、抗体检测、药敏试验、皮肤试验。n n分离培养与鉴定：标本接种沙氏琼脂，室温培养分离培养与鉴定：标本接种沙氏琼脂，室温培养 后菌落形成快，呈毛状，一般为黄绿色。将菌落后菌落形成快，呈毛状，一般为黄绿色。将菌落 涂片镜检可见特征性的分子孢子头

11、和足细胞。根涂片镜检可见特征性的分子孢子头和足细胞。根 据不同的据不同的曲霉的形态和菌落特征曲霉的形态和菌落特征确定菌种。确定菌种。 曲霉结构图返回烟曲霉菌落烟曲霉,光镜 X400黄曲霉菌落黄曲霉,光镜 X200 黑曲霉菌落 黑曲霉,光镜 X200土曲霉菌落 土曲霉，光镜 X200 构巢曲霉菌落 构巢曲霉,光镜 X400杂色曲霉菌落杂色曲霉,光镜 X400返回组织胞浆菌属组织胞浆菌属n n有两个种：荚膜组织胞浆菌、组织孢浆有两个种：荚膜组织胞浆菌、组织孢浆 菌的杜波变种。菌的杜波变种。 n n本菌传染性极大，主要侵犯网状内皮系本菌传染性极大，主要侵犯网状内皮系 统，有时也可由血行播散而侵犯全身

12、各统，有时也可由血行播散而侵犯全身各 脏器。脏器。n n组织胞浆菌是一种双相型真菌，在组织胞浆菌是一种双相型真菌，在2525 培养时呈典型菌丝体，在培养时呈典型菌丝体，在3737培养时为培养时为 酵母型，位于细胞内或外。酵母型，位于细胞内或外。 微生物检验微生物检验1. 1.直接显微镜检查 应涂片染色后检查。直接显微镜检查 应涂片染色后检查。痰液等标本：涂片后先用甲醇固定痰液等标本：涂片后先用甲醇固定10min10min，再用姬，再用姬姆萨染色镜检姆萨染色镜检 。皮损、脓液等标本：用皮损、脓液等标本：用20%KOH20%KOH涂片后镜检涂片后镜检 2. 2.抗原检测、药物敏感试验、抗体检测抗原

13、检测、药物敏感试验、抗体检测 3. 3.分离培养与鉴定分离培养与鉴定标本标本 含抗生素的沙氏培养基含抗生素的沙氏培养基 2525培培养，生长缓慢，有时需养，生长缓慢，有时需4646周才开始生长，逐渐周才开始生长，逐渐形成白色至棕色绒毛状菌落形成白色至棕色绒毛状菌落 。 转种于血琼脂培养基上，转种于血琼脂培养基上，3737培养，很快培养，很快 形成酵母型菌落。形成酵母型菌落。培养物显微镜特征培养物显微镜特征 ：2525沙氏培养，可以沙氏培养，可以 发现特征性的大分生孢子，但初代培养不发现特征性的大分生孢子，但初代培养不 典型，继代培养可有典型大分生孢子。典型，继代培养可有典型大分生孢子。鉴定：取

14、可疑菌落涂片染色镜检，并作脲鉴定：取可疑菌落涂片染色镜检，并作脲 酶试验和明胶液化试验。酶试验和明胶液化试验。 荚膜组织胞浆菌菌落为棉絮状，镜检可见细长有 隔菌丝，菌丝侧面或孢子柄上长有特殊的圆形大 分生孢子，厚壁，四周有棘突，排列如齿轮。血 液标本油镜下镜检可见在中性粒细胞或单核细胞 中有卵圆形或圆形的酵母细胞卡氏肺孢菌卡氏肺孢菌n n卡氏肺孢菌（卡氏肺孢菌（pneumocycsis carinii,PCpneumocycsis carinii,PC），曾称为卡），曾称为卡 氏肺孢子虫。氏肺孢子虫。 n n卡氏肺孢菌可寄生于多种动物，也可寄生于健康卡氏肺孢菌可寄生于多种动物，也可寄生于健康

15、人体。广泛分布于自然界，如土壤和水等。卡氏人体。广泛分布于自然界，如土壤和水等。卡氏 肺孢菌病的传播途径主要是空气传播，在健康人肺孢菌病的传播途径主要是空气传播，在健康人 体内，多为无症状的隐性感染。当宿主免疫力下体内，多为无症状的隐性感染。当宿主免疫力下 降，如长期使用免疫抑制剂、器官移植、肿瘤、降，如长期使用免疫抑制剂、器官移植、肿瘤、 艾滋病等，潜伏的卡氏肺孢菌在病人肺内大量繁艾滋病等，潜伏的卡氏肺孢菌在病人肺内大量繁 殖扩散，使肺泡上皮细胞受损，导致间质性浆细殖扩散，使肺泡上皮细胞受损，导致间质性浆细 胞肺炎，又称卡氏肺孢菌性肺炎（胞肺炎，又称卡氏肺孢菌性肺炎（PCPPCP）。）。 卡氏肺孢菌微生物检验卡氏肺孢菌微生物检验 n n直接显微镜检查 从病人痰液、支气管肺直接显微镜检查 从病人痰液、支气管肺 泡灌洗液或肺活检组织中检查泡灌洗液或肺活检组织中检查PCPC是确诊本是确诊本 病的重要依据。常用的染色方法有姬姆萨病的重要依据。常用的染色方法有姬姆萨 染色、果氏环六亚甲基四胺银染色（染色、果氏环六亚甲基四胺银染色（GMSGMS ）和亚甲胺蓝染色。可以检出包囊和滋养）和亚甲胺蓝染色。可以检出包囊和滋养 体两种形态。体两种形态。n n抗原检测，核酸检测，抗体检测等。抗原检测，核酸检测，抗体检测等。卡氏包囊卡氏包囊和滋养体毛霉目真菌毛霉目真菌 n n