[医药卫生]实验动物

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1、实验动物实验室的生物安全防护要求 中国医学科学院实验动物研究所秦 川 教授主要内容 第一节 实验动物的护理和使用原则 第二节 实验过程的行为规范 第三节 实验动物使用程序和要求 第四节 动物生物安全实验室设施与防护要 求 第五节 无脊椎动物使用安全原则 实验动物是经过科学的育种、繁殖生产，遗传背景清楚，携带的微生物状况明确，并对其生态学、生物学、生物化学、形态结构了解的特殊动物，因此，对其护理和使用也有严格的要求，首先应遵循以下原则： 实验动物的饲养和使用应遵守国家有关的法律和规定 。 应明确使用实验动物的理由和目的。 明确实验所使用动物的种类和数量，动物的数量应满 足统计学的要求。第一节 实

2、验动物的护理和使用原则 完善操作规程，避免或减轻因实验对动物造成的不适和 痛苦。包括使用适当的镇静、镇痛或麻醉方法；禁止不 必要的重复。 严格按程序实施实验后动物的处理，包括麻醉、止痛、 实验后的护理或用麻醉方法处死。 实验过程中要求保证实验动物的良好生活条件，包括饲 养环境、符合需求的饲料及细心的护理等。 研究人员和实验动物操作人员应接受实验动物的基本知 识和操作技能等方面的培训。 使用过程中要求保证周围环境和实验人员的安全。第二节 实验过程的行为规范 物理限制 手术操作 饮食的限制 废弃物和尸体处理一、物理限制(1) 物理限制： 是指在实验过程中（包括检查、收集标本、 给药、治疗或实验操作

3、等），用手或工具限 制动物活动的过程。根据实验内容不同，限 制时间有差异，但要求尽量缩短限制时间。 有些动物，如狗和灵长类动物可以通过简单 的训练达到目的。物理限制的主要原则和要求包括： 限制的工具不能作为常规的饲养工具。 工具的设计应合理，不要仅考虑实验的便利，主要考虑尽量减少动物的不适，避免伤害。 尽量减少限制的时间，以达到实验目的为基准。 在限制过程中，如果发生损伤或严重的行为改变，应暂停或禁止限制，并给予处理或治疗。 保证实验人员和周围人员的安全。一、物理限制(2) 有些实验需要对动物进行手术，即打开或刺穿动物的身体，对动物的物理或生理机能产生较大的损害，同时，实验人员也容 易被血液/

4、体液污染或被器械、针头刺伤，存在潜在生物污染的威胁，因此必须做到： 操作一定要使用适当的镇静、镇痛或麻醉方法。 禁止不必要的重复操作。 不提倡利用一个动物进行多个手术实验，但是，为充分利用动物 资源，经动物伦理委员会许可，在可能的条件下可以实施。 严格实验操作规程，防止发生血液/体液外溅和针刺伤，避免生物污染。 手术后的动物、标本以及所用器具材料等必须按规定程序妥善处 置。二、手术操作实验用动物原则上要求随时饮食，如果一些实验需要动物限制食物或水的摄入量，应保证动物存活所需要的最低需求量。根据研究的目的，食物的限量应经过科学的论证，其限量的标准应容易操作，如正常摄入量的百分比或动物体重的百分比

5、。对于水分的限量摄入，一定要防止动物发生脱水现象，并要保持动物的膳食平衡。三、饮食的限制三、饮食的限制 1. 血液和体液标本的处理 用于抗体、抗原、病原微生物、生化指标等检查的血液和体液，按照要求进行处理并检测，检测后的标本经 121，30min高压消毒处理。 2. 动物脏器组织的处理 动物器官组织，尤其是用于病原微生物分离的组织按照标准程序进行处理；用于病理切片的组织，均需要经过甲 醛固定后再进行切片。剩余的组织经121，30min高压消毒处理。四、废弃物和尸体处理(1)3动物尸体的处理安乐处死后的动物尸体，取材完毕后，经121 30min高压灭菌处 理后，集中送环保部门处理。朊病毒感染动物

6、的处理原则参见第8章。 动物生物安全三级（animal biosafety level 3, ABSL-3）实验室及以上级的实验室的感染动物尸体需经室内和双扉两道高压灭菌，才能移 出实验室。4. 动物咽拭子的处理用于病原分离和PCR检测的咽拭子，按照各自的要求处理后，进行 病毒分离和PCR检测，剩余的标本经121，30min高压消毒处理。5. 病原分离培养物的处理病原分离的培养物，不论是阳性还是阴性结果，均需经121， 30min高压消毒处理。 四、废弃物和尸体处理(2)第三节 实验动物使用程序和要求 基础使用程序和要求 有感染性材料的动物实验要求 小动物饲养 大动物饲养 动物的检疫 动物实验

7、的有关操作 兽医职责实验动物的基本使用程序和要求 实验室如需要使用实验动物，应首先向生物安全和伦理委 员会提出申请，填写申请表（见附件，实验动物使用申 请表）。 使用实验室得到认可后，根据申请表中申请的动物种属和数量，安排实验动物的饲养和使用。 实验动物必须在指定的区域内饲养和使用，禁止在实验室饲养动物。实验操作结束时，动物须返回指定的饲养区域 内，不能在实验室内过夜。 动物实验应在实验室内指定的区域进行。 实验动物使用申请表 批 准 号：_ 批准日期：_ 有效日期：_ 一、申请请者基本情况科室课题负责课题负责 人电话电话传传真E- mai l课题课题 名称申请请目的初次申请请， 延长长 或

8、修改原申请请（原申请请批准号_）二、所需实验动实验动 物种类类年 龄龄体重/大/小性 别别来源饲饲养场场所实验实验 场场所数量_ + _ + _ = _ （第一年） （第一年） （第一年） （总计总计 ）三、动动物的运送（是否需要运送，如果需要，说说明运送的路线线和使用工具等）四、研究的目的（简单简单 描述研究的目的，和该该研究对对人类类，或动动物，或科学研 究的贡贡献）五、使用实验动实验动 物的原理（解释释使用动动物的原理；阐阐述选择动选择动 物属种和数量的 依据）六、描述动动物实验实验 的设计设计 和操作程序（具体包括：注射或接种的物质质、剂剂量、 部位、体积积和针针次等；血标标本的收集体

9、积积、部位、方法、时间时间 ；非手术术的操作 步骤骤（手术术操作见见第七项项）；限制动动物的方法；放射性同位素的使用剂剂量和时时 间间；识别动识别动 物的方法，如耳朵标签朵标签 、饲饲养笼笼的卡片等；对动对动 物的损损害，如疼痛 、腹水等；实验终结标实验终结标 准，如肿肿瘤的大小、体重降级级的百分比、行为为学的改变变 、中毒症状等，及何时执时执 行安乐乐死。）七、手术术操作程序（如需要，请请填写本目录录）具体操作步骤骤手术术操作人及培训训情况手术执术执 行的地点实验实验 后的护护理是否在同一动动物上进进行多个手术术 否 是，具体说说明：八、导导致疼痛的分类类实验动实验动 物的数量第一年 第二年

10、 第三年 A 轻轻微，或一过过性，或无疼痛 _ _ _ B 有疼痛，但能够够解除 _ _ _ C 不能缓缓解的疼痛 _ _ _九、麻醉，镇镇痛（对对第八项项目中的B或C类动类动 物，应说应说 明使用麻醉或镇镇痛的方法 ，包括麻醉剂剂的名称、剂剂量、使用方式和时间时间 ）十、实验终结实验终结 后，如何终终止动动物的生命（麻醉剂剂的名称、剂剂量和使用方法）和 如何处处理动动物尸体 涉及感染性材料的操作要在生物安全柜中进行，并防止泄 露在安全柜底面。操作包括感染动物的解剖、组织的取材 、采血及动物的病原接种。 动物笼具在清洗前先做消毒处理。 污物、一次性物品需放入医疗废物专用垃圾袋中，经高压 灭菌后

11、方可拿出实验室。 动物尸体用双层医疗废物专用垃圾袋包裹后，放入标有动 物尸体专用的容器中，用消毒液喷雾容器表面后，运至解 剖区域剖检。 生物安全柜使用后应用消毒液擦拭、揩干。含有感染性材料的动物实验要求（1）含有感染性材料的动物实验要求（2） 废液需按比例倒入有消毒液的桶中，倒入时需沿容器壁轻 倒并戴眼罩，防止溅入眼中。 如果有感染性物质溅到生物安全柜上、地上以及其他地方 ，应按“菌（毒）外溢在台面、地面和其他表面”处理。 每天工作结束时，应用消毒液擦拭门把手和地面等表面区 域。 废物放入高压灭菌器内时需同时粘贴指示条，物品移出前 观察指示条是否达到灭菌要求。颜色不符时需重复高压灭 菌。 高压

12、灭菌器需每月做灭菌测试一次，并作记录。 小动物的饲养 小动物主要指小鼠、大鼠、豚鼠等啮齿类动物，其饲养应遵循下列原则： 使用动物必须按国家标准或实验特殊要求检验合格，充 分准备后进入系统，饲养人员应按实验设施规定程序要 求进入系统。 及时观察动物饮食、精神状况，有无异常表现，患病或 死亡。 动物应可自由进食、饮水。定期检查水、料是否充足并 及时补给。同时保证其他饲养条件完备。大动物饲养大动物主要指狗、猪及非人类灵长类动物等，其饲养应遵循下列原则 ： 使用动物必须按国家标准或实验特殊要求，检验合格，充分准备后 方可进入动物实验室。 应将每只动物日摄取总量分批次喂给，以保证动物的进食量和减少 浪费

13、。 应经常检查饮水装置，及时补充不足。 动物饲养区域应每天打扫，保持清洁，每周将地面消毒三次。 喂给瓜果、蔬菜等须洗净消毒。禁止喂给腐烂发霉不洁的食物，饮 水要清洁。 对饲喂动物所用的小推车、食物、水容器等用品每周进行两次消毒 。 室内光照，要求明暗各12h自动交替（开灯12h，关灯12h）。 动物的检疫 实验动物进入检疫室：在检疫室的缓冲间内，用75%酒精 喷洒动物的外包装进行消毒，打开紫外灯照射1015min 。 将经上述处理的动物移入检疫室，根据要求进行检疫。 各动物的检疫期不同，大动物为2周，小动物为1周。 在检疫期内观察动物的精神状态、食欲、营养状况、排泄 物等，如有任何异常，动物不

14、得用于实验，应退出动物检 疫室。 检疫合格的动物经适当处理后由缓冲间或物流通道进入动 物实验室。 动物实验的有关操作 1投药 根据实验要求，按不同的动物，不同途径给药。主要包括灌胃和静脉注射。对接种了高致病性病原微生物的动物 ，尤其是大动物，将动物麻醉后方可进行灌胃或静脉注射 。小动物灌胃或静脉注射可根据情况选择是否麻醉，静脉 注射时需使用保定器。 2采样 原则上活检时应对动物进行麻醉。对接种了病原体的大动物进行采血或体检时，要求将动物麻醉。对小动物进行 灌胃、注射和采血时，可不麻醉动物，但要防止动物咬抓 。兽医职责 了解所饲养动物的健康状况，建立疾病预警机 制，对工作环境与生产管理提出改善建

15、议，确 保实验动物的品质; 主管兽医师由单位主任指定，不得接触有病原 污染的物品； 主管兽医师每天检查实验动物各项健康事项， 检查各区域工作环境和卫生条件； 主管兽医师在检查完后应提出报告，动物是否 进一步隔离观察和实验室检查建议等。第四节 动物生物安全实验室设施 与防护要求由于实验内容不同，尤其是进行微生物实验研究，使用的动物也有具体要求，因而，关于动物实验室中使用的微生物的危害评估，需要考 虑以下因素：病原微生物的传播途径；病原微生物标本使用的容量和浓度；病原微生物接种途径和方法；病原微生物能否和以何种途径被排出体外。病原微生物的总体危险程度。对于使用的动物，需要考虑的因素包括：动物的自然特性，包括动物的攻击性和抓咬倾向性；自然存在的体内外微生物和寄生虫等；易感的动物性疾病；动物接种病原微生物后可能产生的结果等。表 动动物设设施的防护护水平：实验实验 操作和安全设备汇总设备汇总 ABSL：动物生物安全级别；BSC：生物安全柜 危险度等 级防