实验四 细菌转导

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1、实验四 细菌转导厦门大学生命科学学院实验目的n通过大肠杆菌噬 菌体专一性转导 半乳糖发酵基因 学习掌握局限性 转导的原理，掌 握转导实验的基 本方法噬菌体介绍噬菌体是指细菌病毒生活周期：吸附、侵入 、复制合成、装配、释 放烈性噬菌体如T4温和噬菌体如、Mu-1、P1和P2等噬菌体结构噬 菌 体 组 装噬菌体载体证明遗传 物质是 DNA而非 蛋白质的 Hershey- Chase实验溶源菌的形成噬菌体整合进大肠杆菌 染色体中的固定位点上 ，这个位点在gal(半乳糖 代谢基因)和bio(生物素 合成基因)之间，这位点 称为BOB，它与的附 着位点POP有相同的核 心序列区，由15bp组成 ，它们通

2、过同源单交换 发生整合，形成溶源菌 。实验原理n转导定义：以噬菌体作为媒介将一个细胞（供体） 的遗传物质传递给另一个细胞（受体） 的过程。n普遍性转导 P1和P2n局限性转导 dg db实验材料n菌株：E.coli k12()gal+k12Sgal-n用品：Eppondoff离心管(1.5ml/4.5ml)Tip枪头(1ml/200ul/20ul)n培养基(肉汤固体/半固体/加倍肉汤 /EMB)n试剂：氯仿、磷酸buffer实验步骤n噬菌体的诱导和裂解液的制备n取4ml gal+菌液至离心管，4000rpm，5minn倒去上清，加3ml磷酸buffer，震荡悬浮n将悬浮液倒入培养皿，UV照射处

3、理10sn加入3ml加倍肉汤，37避光培养2hn取0.8ml培养液于小离心管，加入0.2ml氯 仿剧烈震荡半分钟，6000rpm, 10minn得到的上清液即噬菌体裂解液实验步骤n噬菌体效价测定n取10ul裂解液至990ul磷酸buffer, 震荡混匀 ，再从中取10ul裂解液至990ul磷酸buffer ，震荡混匀，得到10-6稀释液n取0.1ml稀释液和0.5ml gal-受体菌至半固体 肉汤培养基(3ml)管中，混匀，倒入肉汤固 体培养基中，摇匀，凝固后37培养过夜n观察出现的噬菌斑数，计算效价实验步骤n转导方法n取1ml gal-受体菌，4000rpm, 5min, 弃上清 ，加入1ml磷酸buffer，制成受体菌悬浮液n取一环受体菌在EMB培养基上划线(如图) ， 37培养1.5h, 再滴加裂解液后培养2天n各加50ul gal-受体菌和裂解液于EMB培养 基上, 混合涂布；另外再作对照涂布培养 混合液对 照作业n填表n结果分析，计算噬菌体效价和转导频率效价(单位/ml)=斑数x稀释倍数x取样量转导频率=(转导子数/ml)/(噬菌体数/ml)x100%n画图表示dg转导颗粒转导gal-细菌的过 程