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1、实验二十八 荧光分光光度法测定硫酸奎宁含量S2S1S0T1吸 收发 射 荧 光发 射 磷 光系间跨越3内转换振动弛豫能 量l 2l 1l 3外转换l 2T2内转换振动弛豫一、实验目的1掌握荧光分光光度法的基本原理2学会使用F- 4500荧光分光光度计二、方法原理利用荧光分析方法，测定能产生荧光的物质含量，对不能产生荧光的物质，可以利用某些具有能发生荧光基团的有机试剂，与非荧光物质形成较纯的荧光化合物，然后进行测定，是一种高灵敏度的分析方法。定性依据：激发光光谱荧光光谱定量依据：当 l c0.05时,将括号项近似处理后：F= 2.3 I0 l c = Kc定量方法标准曲线法：配制一系列标准浓度试
2、样测定荧光强度，绘制标准曲线，再在相同条件下测量未知试样 的荧光强度，在标准曲线上求出浓度.比较法：在线性范围内，测定标样和试样的荧光强度，比较.荧光仪器组成：激发光源、样品池、双单色器系统、检测器。特殊点：有两个单色器，光源与检测器通常成直角。三、实验内容（一）硫酸奎宁激发光谱的绘制用0.05 mol/L硫酸溶液为参比溶液，用10 mg/L的硫酸奎宁溶液作为测定液。固定荧光波长为443 nm，从300 nm到400 nm，每间隔10 nm测定一次荧光相对强度。以波长为横坐标，荧光相对强度为纵坐标，在坐标纸上绘出 激发光谱图，指出最大激发波长max为345 nm。 （二）硫酸奎宁荧光光谱的绘制 用10 mg/L的硫酸奎宁溶液作为测定液。 从380 nm到600 nm，每隔20 nm测定一次荧光相对强度。以波长为横坐标，荧光相对强度为纵坐标，在坐标纸上绘出荧光光 谱图，指出最大发射波长max为445 nm。（三）直接比较法测定测定硫酸奎宁含量式中： CX待测液的浓度； CS标准液的浓度； FX待测液的荧光强度 FS标准液的荧光强度。
