实验二 环境中的微生物

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1、实验二实验二 环境微生物的检测环境微生物的检测概概 述述 因为微生物是肉眼看不见的，所以大家常常 忽略一些经常接触的微生物。比如：室内外的空 气、水、土壤；试验台面、椅子以及皮肤、头发 、口腔等等。 这些菌群大多属于正常菌群，与人们朝夕相处 ，但有些时候也能引起传染（条件致病菌），因 此大家在以后的学习与实验中一定要特别注意操 作步骤。实验实验实验实验 室室环环环环境和人体表面微生物的境和人体表面微生物的检检检检 查查查查一、实验目的一、实验目的 1. 证明实验室环境和人体表面存在微生物； 2. 比较来自不同场所与不同条件下细菌的数 量与类型； 3. 观察不同类群微生物的菌落形态特征； 4.

2、体会无菌操作的重要性。二二 、实验实验实验实验 原理原理 什么叫菌落？什么叫菌落？平板培养基含有细菌生长所需要的营养平板培养基含有细菌生长所需要的营养 成分，当取自不同来源的样品接种于培养成分，当取自不同来源的样品接种于培养 基上，在适宜的条件下，基上，在适宜的条件下，1 12d2d内每一个内每一个 菌体能菌体能通过细胞分裂（通过细胞分裂（2 2n n）而进行繁殖）而进行繁殖， 形成一个肉眼可见的有一定形态结构的子形成一个肉眼可见的有一定形态结构的子 细胞的群落细胞的群落 , ,称为菌落。称为菌落。 每一种菌落都有它自己 的特征（如大小、形状 、边缘、表面、质地、 颜色等） ，是衡量菌种 纯度

3、、辨认和鉴定菌种 的重要依据。可通过平 板培养来检查环境中细 菌的数量和类型。 菌落的形态结态结 构、大小、色泽泽、透明度、 黏稠度、色素及边缘边缘 情况等，因各种细细菌 而异。每一种细细菌保持有一定的菌落特征 ，这这些菌落特征的区别别点都可作为鉴别细为鉴别细 菌的依据之一。 菌落特征为为有呈圆圆形、凸起、边缘边缘 整齐齐、 表面光滑、湿润润、有卵黄中心、直径2 3mm、不透明菌落、周围为围为 一混浊带浊带 ，外 层层有一透明带带。 细细菌、酵母菌不形成菌丝丝，其菌落仅仅生长长 在固体培养基表面，可用接种工具将其全 部挑起，即与培养基结结合不紧紧密； 而放线线菌、霉菌的菌体大多分化为为营营养菌

4、 丝丝与繁殖菌丝丝，其营营养菌丝丝深入培养基中 吸取营营养，故具有与培养基结结合较紧较紧 ，不 易挑起等特征。 三、三、仪仪仪仪器与材料器与材料 1. 牛肉膏蛋白胨琼脂平板（2个/人）、肥 皂、标签纸、记号笔。 2. 仪器培养箱、酒精灯（1个/组）、灭菌棉签、 接种环等。四、操作步四、操作步骤骤骤骤（一）写标签（一）写标签在各自的在各自的培养皿皿底上培养皿皿底上贴上标签，贴上标签， 标明样品来源、姓名、日期。标明样品来源、姓名、日期。注意不要贴在中间！注意不要贴在中间！ 1.空气中细菌的检查（老师准备） 2.实验台上细菌的检查 3.手指上细菌的检查 4.头发上细菌的检查 5.口腔中细菌的检查（

5、二） 细细菌的检查检查1. 1. 空气中空气中细细细细菌的菌的检查检查检查检查 将平板放在实验室台面上，移去 皿盖，使培养基表面暴露于空气 中，0.5h后盖上皿盖，倒置于 28培养箱培养。2. 2. 实验实验实验实验 台上台上细细细细菌的菌的检查检查检查检查在酒精灯附近操作，划线的角度要小，移动 的压力不能太大。 在培养皿底画线，将其一分为二，并贴上相应的 标签； 取出棉签（动作要迅速）； 先在无菌平板的一个区域内试划几下； 然后用同一根棉签在实验台面擦拭2cm2的范围 ； 在培养皿的另一区域同样划线。3. 3. 手指上手指上细细细细菌的菌的检查检查检查检查用记号笔在平板底部画线，将其平均分成

6、 两部分，标明洗手前与洗手后及姓名、日 期； 移去皿盖，将未洗过的手指在琼脂平板表 面轻轻地来回划线，盖上皿盖。 用肥皂将手清洗干净，自然干燥后，在平 板的另外一部分同样划线。4. 4. 头发头发头发头发 上上细细细细菌的菌的检查检查检查检查 在揭开皿盖的平板上方，用手将头 发拨动数次，使细菌降落到平板表 面，然后盖上皿盖。5. 5. 口腔中口腔中细细细细菌的菌的检查检查检查检查 将揭开皿盖的平板放在离口约6 8cm处，对着琼脂表面用力咳 嗽，然后盖上皿盖。（三） 细细菌的培养 将所有的琼琼脂平板翻转转，使 皿底朝上，放入28培养箱 培养12d。（四） 结结果记录记录 1. 1.菌落菌落计计计

7、计数数划划线线线线的平板数的平板数最后最后1/21/2面面积积积积的的菌落数菌落数；非划非划线线线线平板直接数平板直接数1/41/4面面积积积积的菌落数。的菌落数。 2. 2.特征描述特征描述观观观观察菌落的特点察菌落的特点时时时时要要选择选择选择选择 分离很开的分离很开的单单单单个菌落个菌落 。特征明。特征明显显显显的菌落可初步判断属于哪种微生物。的菌落可初步判断属于哪种微生物。（五） 实验结果记录 将结果如实记录，并清洗各自的平板。 描述菌落特征时须选择稀疏、孤立的菌 落，其项目包括大小、形状、边缘情况、 隆起形状、表面状态、质地、颜色和透明 度等。 多数细菌菌落圆形，小而薄，表面光滑 、

8、湿润、较粘稠，半透明，颜色多样，色 泽一致，质地均匀，易挑取，常有臭味。 这些特征可与其他微生物菌落相区别。不同细菌的菌落也具有自己的特有特征： 对于产鞭毛、荚膜和芽孢的种类尤为明显。例如，对无鞭毛、不 能运动的细菌尤其是各种球菌来说，随着菌落中个体数目的剧增 ，只能依靠“硬挤”的方式来扩大菌落的体积和面积，因而就形成 了较小、较厚及边缘极其圆整的菌落。 对长有鞭毛的细菌来说，其菌落就有大而扁平、形态不规则和边 缘多缺刻的特征，运动能力强的细菌还会出现树根状甚至能移动 的菌落。 有荚膜的细菌，其菌落往往十分光滑，并呈透明的蛋清状，形状 较大。 凡产芽孢的细菌，因其芽孢引起的折光率变化而使菌落的

9、外形变 得很不透明或有“干燥”之感，并因其细胞分裂后常成链状而引起 菌落表面粗糙、有褶皱感，再加上它们一般都有周生鞭毛，因此 产生了既粗糙、多褶、不透明，又有外形及边缘不规则特征的独 特菌落。 同一种细菌在不同条件下形成的菌落特征会有差别，但在相同的 培养条件下形成的菌落特征是一致的。所以，菌落的形态特征对 菌种的分类鉴定有重要的意义。 菌落还常用于微生物的分离、纯化、鉴定、计数及选种与育种等 工作。 不同种类的细菌其菌落形态互不相同，表现在 大小、形状、边缘、隆起、光泽、质地和颜色等方 面。 细菌菌落大小不一，小的不到1毫米，大的可以 铺满整个培养皿； 菌落形状有圆形、不规则形、卷发状、假根

10、状等； 菌落的隆起形状有扩展、台状、低凸、乳头状等； 有的菌落有光泽、有的没有；有的菌落较粘，有的 则较脆； 菌落一般呈灰色，少数为白色、黄色、红色、绿色 和棕色等。 各种菌落的菌落特征各种菌落的菌落特征 细菌的菌落 细菌菌落常表现为湿润、粘稠、光滑、较透 明、易挑取、质地均匀以及菌落正反面或边 缘与中央部位颜色一致等。细菌的菌落特征 因种而异。 可作为鉴定细菌种的依据。大肠杆菌 霉菌霉菌由于霉菌的菌丝较粗而长，因而霉菌的菌落较大，有的霉菌的 菌丝蔓延，没有局限性，其菌落可扩展到整个培养皿，有的种则 有一定的局限性，直径12厘米或更小。菌落质地一般比放线菌 疏松，外观干燥，不透明，呈现或紧或松

11、的蛛网状、绒毛状或棉 絮状；菌落与培养基的连接紧密，不易挑取；菌落正反面的颜色 和边缘与中心的颜色常不一致。 放线菌的菌落 放线菌在固体培养基上形成与细菌不 同的菌落特征，放线菌菌丝相互交错缠绕 形成质地致密的小菌落，干燥、不透明、 难以挑取，当大量孢子覆盖于菌落表面时 ，就形成表面为粉末状或颗粒状的典型放 线菌菌落，由于基内菌丝和孢子常有颜色 ，使得菌落的正反面呈现出不同的色泽。放线菌放线菌放线菌的菌落由菌丝体组成。 放线菌菌丝纤细，生长缓慢， 相互交错，所以形成的菌落较 小而且质地致密，表面干燥、 多皱、绒状。放线菌基内菌丝 长在培养基内，菌落与培养基 结合较紧，不易挑起 。幼龄 菌落因气

12、生菌丝尚未分化成孢 子丝，所以不易与细菌菌落相 区分。当放线菌形成大量的分 生孢子而布满菌落表面后，形 成表面呈细粉状或颗粒状的典 型放射状菌落。由于放线菌的 菌丝和孢子常产生各种色素， 所以菌落正反两面有时会呈现 不同色泽。 放线菌的菌落质地致密，表面呈紧密的绒 状，或坚实、干燥而多皱。由于基内菌丝 长在培养基内，所以菌落与培养基结合较 紧，不容易被挑起，或者被挑起后不容易 破碎。当孢子丝形成大量孢子布满菌落表 面时，使菌落呈絮状、粉末状或颗粒状， 而与细菌菌落判然有别。此外，如用放大 镜仔细观察，可以看见菌落周围有放射状 菌丝。 酵母菌酵母菌 乳白色，圆状凸起的， 闻一下 有股酸味！ 大多数酵母菌的菌落特征 与细菌相似，但比细菌菌 落大而厚，菌落表面光滑 、湿润、粘稠，容易挑起 ，菌落质地均匀，正反面 和边缘、中央部位的颜色 都很均一，菌落多为乳白 色，少数为红色，个别为 黑色。各微生物的特征各微生物的特征细菌：湿润，粘稠，易挑起 放线菌：干燥，多皱，难挑起，菌落较小 ，多有色素 酵母菌：湿润，粘稠，易挑起，表面光华 ，比细菌的菌落大而厚 霉菌：菌丝细长，菌落疏松，成绒毛状、 蜘蛛网状、棉絮状， 无固定大小，多有光 泽，不易挑起