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1、检验核医学第六章 体外分析技术 In vitro analysis techniques概述概述体外分析技术（体外分析技术（in vitro analysis techniquesin vitro analysis techniques）1. 1. 广义地讲，是泛指以离体组织、血液或体液等作广义地讲，是泛指以离体组织、血液或体液等作 为生物样本，在人体为生物样本，在人体外外进行的、分析样本中成分或进行的、分析样本中成分或 其含量的检测技术。以体外其含量的检测技术。以体外放射性核素标记配体（放射性核素标记配体（ ligandligand）为示踪剂，以为示踪剂，以结合反应结合反应为基础，以为基础，
2、以放射性放射性 测量测量为定量手段，在试管中进行的对微量生物活性为定量手段，在试管中进行的对微量生物活性 物质进行物质进行定量分析定量分析的标记免疫分析技术。主要指放的标记免疫分析技术。主要指放 射免疫分析技术（射免疫分析技术（radioimmunoassay, RIAradioimmunoassay, RIA）2. 2.主要主要检测放射性核素发射的放射性核素发射的 射线量射线量第一节 放射免疫分析一、基本原理 1. 放射免疫分析（RIA）是利用放射性标记的抗原（ *Ag ） 与非标记抗原（ Ag ）同时与限量的特异性抗体（Ab）进 行可逆性竞争性免疫结合反应。* Ag + Ab * Ag -
3、Ab + * Ag + AgAg-Ab + Ag * Ag和 Ab量恒定2. 标准曲线:利用一系列已知浓度的标准Ag(即标准品)与待 测样品在相同条件下反应后，用放射计数仪测定*Ag Ab(B)或游离的*Ag （F）的放射性。以各浓度点测量的相 应的放射性计数（cpm）或用计算参数 B/(B+F),B/F或 B/B0为纵坐标作图绘制标准曲线。a) Ab和*Ag 的量恒定b) 抗原抗体反应为可逆性c) Ab和*Ag 的性质与结构相同n n特点特点1. 1.灵敏度高灵敏度高 最小可测量为最小可测量为1010-9-9-10-10-15-15g g2. 2.特异性强特异性强 利用专一性强的结合反应利用
4、专一性强的结合反应3. 3.精确度好精确度好 有效的质量控制方法有效的质量控制方法4. 4.放射性不引入体内放射性不引入体内5. 5.所需待测样品少所需待测样品少 50-20050-200 l l6. 6.试剂药盒化，操作简便、快速试剂药盒化，操作简便、快速7. 7.测量微机化，方便、快捷，客观、准确测量微机化，方便、快捷，客观、准确n n类型类型竞争性体外放射分析竞争性体外放射分析标记物标记物 结合剂结合剂放射免疫分析放射免疫分析 * *Ag Ag AbAb(RIA) (RIA)竞争蛋白结合分析竞争蛋白结合分析 * *Ag Ag 血浆中固有的血浆中固有的(CPBA) (CPBA) 激素载体蛋
5、白激素载体蛋白(TBG)(TBG)放射受体分析放射受体分析 * *L RL R(RRA) (RRA)放射酶分析放射酶分析 * *S ES E(REA) (REA)非竞争性体外放射分析非竞争性体外放射分析免疫放射分析免疫放射分析 * *AbAb * *AbAb(IRMA) (IRMA)受体的放射分析受体的放射分析 * *L R L R (RBA) (RBA) 酶的放射分析酶的放射分析 * *S ES E(ERA) (ERA)放射免疫分析放射免疫分析(RIA)(RIA)n n基本原理基本原理 1 RIA1 RIA反应式反应式 分离剂分离剂* *Ag + Ag + AbAb *Ag- *Ag-AbA
6、b *Ag- *Ag-AbAb + + 分离剂分离剂Ag Ag Ag- Ag-AbAb Ag- Ag-AbAb 1) 1)一定量一定量* *Ag Ag 、不定量不定量AgAg与与限量限量AbAb进行竞争抑制结合反应进行竞争抑制结合反应 2) *Ag-2) *Ag-AbAb 与与AgAg成成负相关关系负相关关系( (反比反比) ) 3)3)在实际工作中，用在实际工作中，用一系列已知浓度的一系列已知浓度的Ag(Ag(标准品标准品) )进行实验进行实验 制备制备剂量反应曲线剂量反应曲线( (标准曲线，标准曲线， *Ag-*Ag-AbAb AgAg曲线曲线) )，未知，未知 样品在相同条件下实验，其浓
7、度通过标准曲线查出样品在相同条件下实验，其浓度通过标准曲线查出2 RIA2 RIA数学函数式数学函数式k k1 1Ag + Ag + AbAb Ag- Ag-AbAbk k2 2P + Q P + Q PQ PQP = Ag + *Ag P P = Ag + *Ag P0 0= Ag = Ag0 0 + *Ag + *Ag0 0 Q = Q = AbAb Q Q0 0= Ab = Ab0 0 PQ = Ag- PQ = Ag-AbAb + *Ag- + *Ag-AbAb k k1 1PQ PQ PQ PQK = = = (1) K = = = (1)k k2 2P Q P (Q P Q P (
8、Q0 0-PQ)-PQ)PQ PQ= (2) = (2)(P (P0 0-PQ) Q-PQ) Q将将B =B = PQ / PPQ / P0 0 、B / F = B / (1-B) = PQ / PB / F = B / (1-B) = PQ / P代入代入(1)(1)B 1 B 1K = (3) K = (3) 展开重排展开重排1 B Q1 B Q0 0 - B P - B P0 0 QQ0 0 1 Q 1 Q0 0 B B2 2 B (1 + + ) + = 0 B (1 + + ) + = 0 (4)(4)P P0 0 K P K P0 0 P P0 0 将将B = 1 - FB =
9、1 - F代入代入(3)(3)QQ0 0 1 1 1 1F F2 2 F (1 - - ) + = 0 F (1 - - ) + = 0 (5)(5)P P0 0 K P K P0 0 K P K P0 0 定义定义R = B / FR = B / F，由，由B + F = 1B + F = 1得得B = R / (1+R)B = R / (1+R)代入代入(3)(3)R R2 2 + R ( 1 + K P+ R ( 1 + K P0 0 K Q K Q0 0 ) K Q ) K Q0 0 = 0 = 0 (6) (6)3 RIA3 RIA剂量反应曲线剂量反应曲线4 4 方法流程方法流程加样加样温育温育分离分离测定测定数据处
