生化分析仪原理

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1、生化分析仪原理生化分析仪原理临床生化自动分析仪分类临床生化自动分析仪分类 按运行速度：按运行速度： 1 1大型生化仪速度大型生化仪速度600 test / 600 test / 小时以上小时以上 2 2中型生化仪速度中型生化仪速度300-600 test / 300-600 test / 小时小时 3 3小型生化仪速度小型生化仪速度300 test /300 test /小时以下小时以下 按仪器结构：按仪器结构： 1 1流动式自动生化分析仪流动式自动生化分析仪 2 2离心式自动生化分析仪离心式自动生化分析仪 3 3分立式自动生化分析仪分立式自动生化分析仪临床生化自动分析仪分类临床生化自动分析仪

2、分类 按运行速度：按运行速度： 1 1大型生化仪速度大型生化仪速度600 test / 600 test / 小时以上小时以上 2 2中型生化仪速度中型生化仪速度300-600 test / 300-600 test / 小时小时 3 3小型生化仪速度小型生化仪速度300 test /300 test /小时以下小时以下 按仪器结构：按仪器结构： 1 1流动式自动生化分析仪流动式自动生化分析仪 2 2离心式自动生化分析仪离心式自动生化分析仪 3 3分立式自动生化分析仪分立式自动生化分析仪自动分析仪的主要部件自动分析仪的主要部件 加样系统加样系统 比色系统比色系统 分光系统分光系统 供排水系统供

3、排水系统 操作控制与数据处理系统操作控制与数据处理系统加样系统加样系统 试剂仓试剂仓 样品转盘样品转盘 样品取样单元样品取样单元 试剂取样单元试剂取样单元 混合部件混合部件比色系统比色系统 光源光源 比色杯比色杯分立式比色转盘分立式比色转盘离心式比色盘离心式比色盘流动池式流动池式 比色杯恒温比色杯恒温水浴、空气浴、恒温液循环间接加热水浴、空气浴、恒温液循环间接加热 比色杯类型比色杯类型硬质石英硬质石英/ /玻璃、塑料，永久、半永久、一次性。玻璃、塑料，永久、半永久、一次性。分光系统分光系统 干涉滤光片干涉滤光片 光栅分光式光栅分光式无相差蚀刻凹面光栅无相差蚀刻凹面光栅后分光集束式光路系统后分光

4、集束式光路系统关于双波长检测的优点关于双波长检测的优点 通过计算两个波长之间的差值，可纠正样品中脂血、溶通过计算两个波长之间的差值，可纠正样品中脂血、溶 血和黄疸干扰的影响；也可补偿电压波动的影响，从而血和黄疸干扰的影响；也可补偿电压波动的影响，从而 获得稳定的测定结果。获得稳定的测定结果。 自动生化分析仪的工作程序自动生化分析仪的工作程序计算机进行计算打印机打印结果光电感应器检测样 本比色杯比色杯试 剂 1比色杯搅 拌延迟试 剂 2比色杯比色杯搅 拌反应比 色传 输传输自动分析仪的基本分析方法自动分析仪的基本分析方法 终点法终点法（1 1点）终点法和点）终点法和2 2点终点法点终点法 速率法

5、速率法速率法和速率法和2 2点速率法（固定时间法）点速率法（固定时间法） 终点法终点法 被测物质（反应底物）在化学反应过程中完全被消耗或被测物质（反应底物）在化学反应过程中完全被消耗或 转换，即反应达到平衡（终点），通过测定产物（反应转换，即反应达到平衡（终点），通过测定产物（反应 生成物）的多少来定量测定被测底物的含量。生成物）的多少来定量测定被测底物的含量。 终点法一般用来检测代谢物的浓度，通过测定标准液（终点法一般用来检测代谢物的浓度，通过测定标准液（ 校准液）的反应吸光度，建立一条浓度与吸光度变化的校准液）的反应吸光度，建立一条浓度与吸光度变化的 标准曲线。标准曲线。 通过检测标本的吸

6、光度与标准液的吸光度进行比较，计通过检测标本的吸光度与标准液的吸光度进行比较，计 算出该标本中待测物的浓度。算出该标本中待测物的浓度。终点法终点法 终点法终点法终点法可根据试剂原理不同设置为（一点）终点法和两终点法可根据试剂原理不同设置为（一点）终点法和两点终点法。点终点法。 对于单一试剂，在加入标本后，反应即可进行，在反应对于单一试剂，在加入标本后，反应即可进行，在反应 达到终点后，读取反应点（吸光度），故一般选用一点达到终点后，读取反应点（吸光度），故一般选用一点 终点法。终点法。 对于两种以上的试剂，加入第一试剂，主要起缓冲或者对于两种以上的试剂，加入第一试剂，主要起缓冲或者 消除干扰等

7、作用，此时可读取初始反应点，加入第二（消除干扰等作用，此时可读取初始反应点，加入第二（ 或第三）试剂后，在反应达到终点后，读取结束反应点或第三）试剂后，在反应达到终点后，读取结束反应点 。此即两点终点法。此即两点终点法。 本质均为终点法。本质均为终点法。终点法反应曲线举例（单试剂）终点法反应曲线举例（单试剂）终点法反应曲线举例（双试剂）终点法反应曲线举例（双试剂）终点法反应曲线举例（双试剂免疫比浊法）终点法反应曲线举例（双试剂免疫比浊法）速率法速率法 速率法分为：连续监测速率法和两点速率法（固定时间法速率法分为：连续监测速率法和两点速率法（固定时间法 ）。）。 连续监测速率法：在可见光区连续监

8、测速率法：在可见光区(GGT(GGT、ALPALP：405nm405nm黄色黄色) ) 或紫外（或紫外（HBDH HBDH 、LDHLDH、ALTALT： 340nm340nm）在一段时间内）在一段时间内 连续监测某一物质的生成连续监测某一物质的生成 ( (或消耗的或消耗的) ) 速率，计算待测物的速率，计算待测物的 活性，一般用于样本中酶活性的检测。活性，一般用于样本中酶活性的检测。 酶促反应，在一定条件和测定范围内，当酶促反应，在一定条件和测定范围内，当KmKm底物浓底物浓 度，符合零级速率法，底物消耗度，符合零级速率法，底物消耗/ /生成的速率只与催化反生成的速率只与催化反 应的酶的活性

9、有关，为正比例关系，直线的斜率为定值（应的酶的活性有关，为正比例关系，直线的斜率为定值（ 即即KK值或值或factorfactor）连续监测速率法的反应曲线连续监测速率法的反应曲线两点速率法两点速率法 两点速率法适用于反应吸光度随时间的变化而变化，在两点速率法适用于反应吸光度随时间的变化而变化，在 一定时间内无到达终点的趋势，该反应的变化规律为在一定时间内无到达终点的趋势，该反应的变化规律为在 一定时间内反应的趋势为直线或接近于直线。一定时间内反应的趋势为直线或接近于直线。 设定参数时选择在直线上的两个点作为检测点。设定参数时选择在直线上的两个点作为检测点。速率法的吸光度计算速率法的吸光度计算

10、 速率法吸光度计算：速率法吸光度计算： 如读点为如读点为21-26 ; 21-26 ; 用最小二乘法，得到测光点用最小二乘法，得到测光点21-2621-26间每分钟吸光度的变化量间每分钟吸光度的变化量 。 两点速率法吸光度计算两点速率法吸光度计算: :如读点为如读点为21-26 ; T 21-26 ; T 为：为：(26-21) (26-21) 点间隔的时间点间隔的时间 (A26+A25)/2-(A21+A20)/2/T (A26+A25)/2-(A21+A20)/2/T 定标方法定标方法 对于终点法和两点速率法，必须通过使用标准液，建立对于终点法和两点速率法，必须通过使用标准液，建立 一条标

11、准曲线。一条标准曲线。 速率法检测的酶类可以采用理论因数法（速率法检测的酶类可以采用理论因数法（KK因数或因数或 FactorFactor法），不过法），不过目前，大多数实验室对酶类（速率法目前，大多数实验室对酶类（速率法 ）测试亦采用标准液校正）测试亦采用标准液校正FactorFactor的方式，以消除仪器和的方式，以消除仪器和 试剂的系统误差。试剂的系统误差。定标方法定标方法22点定标点定标 两点定标：以水作为零点，标准液作为另一点，建立标两点定标：以水作为零点，标准液作为另一点，建立标 准曲线。此方法适用于浓度随吸光度变化呈线性变化的准曲线。此方法适用于浓度随吸光度变化呈线性变化的 试剂

12、。曲线的方程为：试剂。曲线的方程为：Y=AXY=AX 对于一些特殊试剂如：对于一些特殊试剂如：KK，NaNa，CLCL，因水中痕量离子浓，因水中痕量离子浓 度的存在或者线性范围限制，一般不以水作为零点，而度的存在或者线性范围限制，一般不以水作为零点，而 采用定值的高、低两个标准液，建立标准曲线。曲线的采用定值的高、低两个标准液，建立标准曲线。曲线的 方程为：方程为：Y=AX+BY=AX+B。2 2点定标的标准曲线点定标的标准曲线定标方法定标方法多点定标多点定标 多点定标：采用两个以上的标准液来建立一条标准曲线多点定标：采用两个以上的标准液来建立一条标准曲线 。该曲线的特征一般为非线性，即吸光度

13、与浓度的变化。该曲线的特征一般为非线性，即吸光度与浓度的变化 不是直线关系。计算方式在自动生化仪上可选择为：不是直线关系。计算方式在自动生化仪上可选择为： NONLINEARNONLINEAR或或LOGIT-LOGLOGIT-LOG法。法。 对于一些通过对于一些通过（胶乳增强）（胶乳增强）免疫比浊法测定的试剂，多免疫比浊法测定的试剂，多 为此方法。因为抗原抗体反应形成的浊度的线性范围较为此方法。因为抗原抗体反应形成的浊度的线性范围较 窄。窄。多点定标的标准曲线多点定标的标准曲线自动生化分析仪的操作控制系统自动生化分析仪的操作控制系统 仪器操作和控制软件的功能：仪器操作和控制软件的功能： （1

14、1）设置系统参数）设置系统参数 （2 2）设置项目参数）设置项目参数 （3 3）设置试剂参数）设置试剂参数 （4 4）设置校准品和质控品参数）设置校准品和质控品参数 （5 5）实施校准和质控测试）实施校准和质控测试 （6 6）进行样品测试）进行样品测试 （7 7）结果查询）结果查询 （8 8）反应全程监控）反应全程监控 （9 9）执行维护）执行维护自动生化分析仪的上机参数自动生化分析仪的上机参数 生化分析仪的参数就是仪器工作的指令，操作者通过设生化分析仪的参数就是仪器工作的指令，操作者通过设 置正确的参数控制仪器完成一系列复杂而有序的操作程置正确的参数控制仪器完成一系列复杂而有序的操作程 序，主要包括试剂量、样本量、测定方法、校准方法、序，主要包括试剂量、样本量、测定方法、校准方法、 反应时间、测定波长和控制因素等。通常各个机型性能反应时间、测定波长和控制因素等。通常各个机型性能 不同，参数设置也不同。不同，参数设置也不同。酶类试剂的理论酶类试剂的理论K K值值 公式公式 贝克曼贝克曼 局限性局限性