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1、动物组织中核酸的提取与鉴定实验原理v本实验运用盐溶液法用动物肝脏分离制备DNAv核酸在细胞内都与蛋白质结合成核蛋白，要分离核 酸必须使核酸与蛋白质分离并除去蛋白质。v已知在0.14mol/LNaCl溶液中核糖核蛋白溶解度最 大，而脱氧核糖核蛋白溶解度最小，在1mol/LNaCl 溶液中脱氧核糖核蛋白溶解度增大，核糖核蛋白的 溶解度则明显下降，根据这种特异性即可把这两种 核蛋白分开实验原理v十二烷基硫酸钠（SDS）处理，使蛋白质变 性，蛋白质与DNA分开v氯仿异戊醇除去变性蛋白质v冷的95%乙醇除去蛋白质，溶液中的蛋白质 沉淀出来v柠檬酸、EDTA等螯合物可以防止DNA酶降 解DNA实验试剂vP
2、H=8.0 0.14mol/L NaCl-0.01mol/L EDTA溶液v50g/L 十二烷基硫酸钠（SDS）溶液v氯仿异戊醇混合液（氯仿：异戊醇=24：1 ）v氯化钠溶液（75%乙醇、95%乙醇）试验器材v材料：动物猪肝（猪羊兔）v组织捣碎机、离心机、量筒、烧杯、锥形瓶 、玻璃棒、离心管、称量瓶、滴管等实验步骤v取动物肝脏浸入预先在冷水浴中冷却的0.14mol/L NaCl-0.01mol/L EDTA溶液，反复洗涤几次，直至 组织无血为止v将洗净的组织剪成碎块，称取10g，加入20ml 0.14mol/L NaCl-0.01mol/L EDTA溶液，在组织捣 碎机中匀浆，4 4000r/
3、min离心15分钟后弃上清液 ，在沉淀中加入4倍体积的低温0.14mol/L NaCl- 0.01mol/L EDTA溶液,搅匀后离心，弃上清液，如 此反复2-3次，保留沉淀实验步骤v将沉淀物悬于5倍体积的0.14mol/L NaCl- 0.01mol/L EDTA溶液中搅匀，边搅拌边滴加 SDS溶液，直至SDS的最终浓度达10g/L为止 ，然后加入固体NaCl，使NaCl最终浓度达 1mol/L,继续搅拌30-45min,以确保NaCl全部 溶解v将上述混合液倒入一个具有塞的锥形瓶中， 加入等体积的氯仿-异戊醇，振荡10min在室 温3000r/min离心10minv此时可见3层，小心吸取上层水相，记录体积 ，放入锥形瓶中再加入氯仿-异戊醇混合物， 振荡离心，如此反复抽提数次，直至界面处 不出现蛋白凝胶为止v最后一次离心后，小心吸取上层溶液计量体 积，放入干燥小烧杯，加入2倍体积的预冷 95%乙醇，产生沉淀后，4000r/min离心 10min弃去上清液，沉淀即为DNA实验步骤v加2倍体积预冷乙醇，如用滴管滴加，边加边 慢慢顺一个方向在烧杯中搅动，有粘稠维丝 物缠在玻璃棒上，直至再无丝状物缠上为止v将玻璃棒上的DNA取下，依次用75%乙醇、 95%无水乙醇洗一次，放入干净量瓶中至于 干燥器中抽干v十二烷基硫酸钠（SDS）v组织捣碎机v离心机
