实验八核仁组织者区(nor)的银染显示法

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1、核仁组织者区（核仁组织者区（NORNOR） 的银染显示法的银染显示法 实验目的实验目的实验原理实验原理实验步骤实验步骤作业作业返回大纲实验目的实验目的 n n掌握核仁组织者区（掌握核仁组织者区（NORNOR）的快）的快 速银染显示法，并了解速银染显示法，并了解NORNOR在细在细 胞中分布情况。胞中分布情况。 实验原理实验原理n n染色体上为染色体上为5.8SrRNA5.8SrRNA、18SrRNA18SrRNA和和28SrRNA28SrRNA编编 码的基因（码的基因（rDNArDNA）所在的部位，称为核仁组成）所在的部位，称为核仁组成 区（区（NORNOR）。在间期细胞中，这一区域的染色）。

2、在间期细胞中，这一区域的染色 质，参与形成核仁，由于核仁直至前期结束才完质，参与形成核仁，由于核仁直至前期结束才完 全消散，所以这一部分染色质常常来不及完全收全消散，所以这一部分染色质常常来不及完全收 缩，在中期染色体上，比其它染色质更疏松，因缩，在中期染色体上，比其它染色质更疏松，因 而被淡染，即表现为次缢痕结构。而被淡染，即表现为次缢痕结构。n n每个染色体组中，常有多个每个染色体组中，常有多个NORNOR。例如人的。例如人的2323 对染色体中，有对染色体中，有5 5对端部着丝点染色体短臂的次对端部着丝点染色体短臂的次 缢痕处为缢痕处为NORNOR。然而，并不是所有的。然而，并不是所有的

3、NORNOR随时随时 都出于转录之中。当都出于转录之中。当NORNOR在间期转录时，产生在间期转录时，产生 一种与转录活动有关的酸性蛋白，此蛋白可保留一种与转录活动有关的酸性蛋白，此蛋白可保留 至中期并能将染液中的银离子还原为金属银而显至中期并能将染液中的银离子还原为金属银而显 现为黑色。所以银染法可在中期染色体上显示具现为黑色。所以银染法可在中期染色体上显示具 有转录活性的有转录活性的NORNOR数目，而且，染色的深黑程数目，而且，染色的深黑程 度，还可以反应出基因的活性高低。度，还可以反应出基因的活性高低。 实验方法实验方法n n银染的具体方法有很多种，如银染的具体方法有很多种，如AgAg

4、 -AS-AS法法,Ag-I,Ag-I法等，我们在此采用法等，我们在此采用 快速银染法，具体操作如下：快速银染法，具体操作如下：n n在染色体标本上滴加含在染色体标本上滴加含1%1%甲酸的甲酸的 2%2%明胶水溶液明胶水溶液3 3滴，再加滴，再加50%50%硝硝 酸银酸银3 3滴，混合后盖上盖片，将滴，混合后盖上盖片，将 标本置于标本置于6060恒温台上，处理至恒温台上，处理至 液体为棕黄色为止，自来水冲洗液体为棕黄色为止，自来水冲洗 ，空气干燥，镜检。，空气干燥，镜检。实验结果实验结果n n若染色适中，间期核及染色体为金黄色，若染色适中，间期核及染色体为金黄色， 油镜观察，可在某些染色体上看

5、到成对的油镜观察，可在某些染色体上看到成对的 黑色小点，此即为银染黑色小点，此即为银染NORNOR（Ag- NORAg- NOR ）。）。n n若整张片子色淡，间期核及染色体都不易若整张片子色淡，间期核及染色体都不易 看清，为染色时间不足，在未滴过香柏油看清，为染色时间不足，在未滴过香柏油 的情况下，可重新续染。的情况下，可重新续染。n n若染色时间偏长，则染色体为棕色，此时若染色时间偏长，则染色体为棕色，此时 ，仍可看到黑色的，仍可看到黑色的NORNOR，只是，只是NORNOR与染与染 色体间的反差较低。染色严重过度时，整色体间的反差较低。染色严重过度时，整 张片子都布满黑色沉淀，这样的标本一般张片子都布满黑色沉淀，这样的标本一般 都丢弃不用。若标本珍贵，也可采用特殊都丢弃不用。若标本珍贵，也可采用特殊 方法褪色后重新染色。方法褪色后重新染色。作作 业业 n n在油镜下绘制一中期分裂相图在油镜下绘制一中期分裂相图 ，显示，显示Ag- NORAg- NOR的位置、数目的位置、数目 和形态。和形态。