免疫学的临床应用

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1、第十章 免疫学的临床应用免疫学诊断免疫学防治第一节 免疫学诊断 抗原或抗体的检测免疫细胞及其功能检测第一节 体外抗原抗体结合反应的特点及影响因素一、抗原抗体反应特点 1高度特异性 由抗原表位与抗体分子中的超变区互补结合所决定的。 2表面化学基团之间的可逆结合 3适宜的抗原抗体浓度和比例 抗原抗体结合后能否出现肉眼可见的反应取决于两者适当的浓度 和比例。 二、抗原抗体反应的影响因素 1电解质 抗原、抗体通常为蛋白质分子，等电点分别为pH35和56不等 。实验中常用0.85%的NaCl溶液，以提供适当浓度的电解质。 2温度 适当提高反应的温度可增加抗原与抗体分子的碰撞机会，加速抗 原抗体复合物的形

2、成。通常37是抗原抗体反应的最适温度。 3酸碱度 抗原抗体反应的最适pH在68之间，pH过高或过低，均可直接影响抗原、抗体的理化性质。 第二十二章 免疫学检测技术（四）常见抗原抗体反应的种类 1.凝集反应类型：直接凝集反应 间接凝集反应间接凝集抑制试验 协同凝集试验概念：细菌、红细胞等颗粒性抗原与 相应抗体结合后形成凝集团块称凝集反 应。凝集反应原理图解（一）凝集反应原理图解（二）凝集反应原理图解（三）2.沉淀反应概念：可溶性抗原与相应抗体结合后出现沉淀物称沉淀反应。类型：单向免疫扩散免疫比浊法双向免疫扩散对流免疫电泳单向琼脂扩散试验双向琼脂扩散试验对流免疫电泳三、免疫标记技术（immunol

3、abeling technique） 将抗原抗体反应与标记技术相结合，以检测抗原或抗体的一类试验方法 。 常用的标记物有酶、荧光素、放射性核素、胶体金及化学发光物质等 。 1.免疫酶测定法（EIA） 这是一种用酶标记一抗或二抗检测特异性抗 原或抗体的方法。 双抗体夹心法 间接EILSA 血清检测中：肝癌、骨肉瘤-血清碱性磷酸酶（ALP）升高 。前列癌-血清酸性磷酸酶升高。 2.免疫荧光技术 是用荧光素标记一抗或二抗，检测特异性抗原或 抗体的方法。 12 3.放射免疫测定法 是用放射性核素标记抗原或抗体进行的免疫测定 。敏感性可达到pg/ml水平，常用的放射性核素有131I 和125I等。 于1

4、977年因创建放射免疫测定法而获得医学诺贝尔奖 。最敏感4.化学发光免疫技术 是将化学发光分析和免疫反应相结合而建 立的一种新的免疫分析技术。 5.免疫胶体金技术 用胶体金颗粒标记抗体或抗原，以检测未 知抗原或抗体的方法称免疫胶体金技术。 四、蛋白质芯片技术 是指固定于支持介质 上的大量蛋白质构成 的微阵列。 6.免疫印迹技术又称 Western blotting 蛋白定性定量应用最广泛第二节 免疫细胞功能的检测一、免疫细胞的分离1. 外 周 血 单 个 核 细 胞 的 分 离 2.淋巴细胞及其亚群的分离和分析 有：免 疫吸附 分离法 、磁珠 分离法 、荧光 激活细 胞分离 仪分离 法、抗 原

5、肽- MHC分 子四聚 体技术 流式细胞术可用于分离混合的T、B细胞。用于细胞分离鉴定的最好方法 。二、免疫细胞功能的测定1.T细胞功能测定 T淋巴细胞增殖试验：T细胞受到特异性抗原或有丝分裂原（PHA 、ConA）刺激后可发生增殖，可通过以下三种方法检测。 形态计数法 3H-TdR或125- UdR掺入法 MTT比色法 迟发型超敏反应（DTH）的检测 此方法为体内检测细胞免疫功能的简便易行的皮试方法。 2. B细胞功能测定 抗体形成细胞测定：常用溶血空斑试验。 3.细胞毒试验 培养4-6小时51Cr释放法 乳酸脱氢酶释放法 细胞染色法 凋亡细胞检测法 第二十二章 免疫学检测技术4.吞噬功能测

6、定 硝基蓝四氮唑试验 巨噬细胞吞噬试验 5.细胞因子的检测 生物活性检测法 免疫学检测法 酶联免疫斑点试验 第二十二章 免疫学检测技术用于功能性细胞的 定量检测第二节、免疫学防治一、免疫预防特异性免疫的获得方式 ：1、自然免疫： 自然主动免疫（感染病原体后） 自然被动免疫（经胎盘、乳汁获得抗体）2、人工免疫：人为获得 人工主动免疫（也称预防接种） 人工被动免疫 过继免疫人工主动 免疫制品人工被动 免疫制品疫苗类毒素抗毒素（动物血清）人丙种球蛋白（人血浆和胎盘）细胞因子与单克隆抗体1.灭活疫苗（死疫苗）2.减毒活疫苗1、死疫苗（death vaccine） 用物理或化学方法将病原微生物杀死或灭活

7、而制成 如霍乱、百日咳、伤寒疫苗等 优点：安全，稳定，易保存 缺点：主要诱导体液免疫，不能通过内源性抗原呈 递途径诱导产生效应性CTL。不能繁殖，需多次刺 激注射局部和全身反应严重2、减毒活疫苗（live-attenuated Vaccine）用毒力高度减弱或基本无毒的病原微生物制成优点：一次免疫即可获得长久免疫力，类似隐性感染。诱导体液免疫和细胞免疫缺点：不易保存，存在回复突变的危险如卡介苗 牛痘 麻疹等死疫苗与活疫苗的特点比较区别要点 死疫苗 活疫苗制剂特点 强毒株制成 弱毒或无毒株制成接种方式 多为皮下注射 多模拟自然感染途径接种剂量次数 量较大，23次 量较小，多为1次副作用 较大 较

8、小免疫效果 较差，维持 较好，维持35年数月数年 或更长疫苗保存 较易保存 不易保存 3.亚单位疫苗（Subunit Vaccine） 提取有效免疫原成分,去除无关或有害成 分 如提取乙肝表面抗原-乙肝亚单位疫苗 优点：免疫效果高，不良反应少4.基因工程疫苗原理：编码免疫原基因载体酵母菌、大肠杆菌体内体外培养，表达目的基因产物 （2）类毒素（Toxid） 细菌外毒素经0.3-0.4%甲醛处理，使其毒性减弱而保留其免疫原性。 白百破：白喉类毒素+百日咳杆菌死疫苗+破伤风类毒素二、人工被动免疫(一)概念：是人为的给机体输入抗毒素、免疫血清等免疫效应 物质，使机体立即获得特异性免疫力的方法。(二)特

9、点：免疫力出现快、维持时间短，可用于传染病的特异性治疗和紧急预防。(三)常用人工被动免疫制剂抗毒素 用细菌类毒素多次给马注射， 待其产生大量抗体后，放血并分离马血清 经提纯后制成的制剂。胎盘球蛋白 从胎盘血中提取的免疫球 蛋白（IgG）。血浆丙种球蛋白 从正常人血中提取的 免疫球蛋白（IgG、IgM）。是指给患者转输具有在体内继续扩增效应细胞的一种疗法。四、过继免疫治疗（四）计划免疫1.概念 根据特定传染病的疫情监测和人 群免疫状况分析，按照规定的免疫程 序有计划地进行人群预防接种，以提 高人群免疫水平，控制或消灭相应传 染病。2.我国儿童计划免疫程序（表）第三节 免疫治疗 免疫治疗是指利用免

10、疫学原理，针对疾病的发 生机制，人为地调整机体的免疫功能，达到治疗 目的所采取的措施。 第二十三章 免疫学防治一、分子治疗分子治疗指给机体输入分子制剂，以调节机体的特异性免疫应答， 例如使用抗体、细胞因子以及微生物制剂等。1.分子疫苗 2.抗体 3.细胞因子 4.微生物抗原疫苗 二、细胞治疗细胞治疗指给机体输入细胞制剂，以激活或增强机体的特异性免 疫应答，例如使用细胞疫苗、干细胞移植、过继免疫治疗等。1.细胞疫苗 肿瘤细胞疫苗 、基因修饰的瘤苗 、树突状细胞疫苗 。2.过继免疫治疗 取自体淋巴细胞经体外激活、增殖后回输患者，直 接杀伤肿瘤或激发机体抗肿瘤免疫效应。如TIL。3.造血干细胞移植 干细胞是具有多种分化潜能，自我更新能力很强的 细胞，在适当条件下可被诱导分化为多种细胞组织 。骨髓 、外周血、脐血 第二十三章 免疫学防治三、生物应答调节剂与免疫抑制剂1.生物应答调节剂 2.免疫抑制剂 免疫功能低下者有促进或调节作用。 常用于防止移植排斥反应的发生和自身免疫病的治疗 。 化学合成药物：糖皮质激素、环磷酰胺、硫唑嘌呤。 微生物制剂 ： 环孢素A 、FK-506 、麦考酚酸酯 、雷帕霉素 。第二十三章 免疫学防治四、免疫治疗举例