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1、一氧化碳一氧化碳 中毒中毒石蜡包埋、 切片尼氏体免疫组化图像分析激光共聚焦常规石蜡包埋技术实验目的石蜡包埋v熟悉石蜡包埋过程和方法实验原理石蜡包埋u在显微镜下观察人体组织，必须将组织切成以微米为单位的薄片，使其透光并易于观察，但直接切取柔软组织是难医办到的。u石蜡包埋法是将“支持物质”石蜡渗入组织内部，而水与石蜡又是不相混合的，所以在浸蜡和包埋前必须将组织内所含的水分脱去。一般是浸入逐级增加浓度的酒精来完成。由于酒精和石蜡不能混合，再用二甲苯或冬青油置换出组织中的酒精，使其透明，然后放入融化的石蜡中。将浸蜡的组织块 置于包埋框中，冷却后组织块便具有石蜡的硬度，切片机便能 将组织切成薄片。实验材
2、料石蜡包埋u1.甲醛、酒精、二甲苯、石蜡等u2.切片机、切片漂烘控温仪、恒温箱、包埋框、载玻片等实验步骤石蜡包埋1取材 取新鲜组织,切成352mm小块。 在组织细胞材料准备的过程中，不仅要求保在组织细胞材料准备的过程中，不仅要求保 持组织细胞形态完整，更要保持组织细胞的持组织细胞形态完整，更要保持组织细胞的 抗原性不受损或弥漫，防止组织自溶。抗原性不受损或弥漫，防止组织自溶。标本标本 离体后离体后3030分钟内应进入固定液或低温保存。分钟内应进入固定液或低温保存。石蜡包埋2固定 常用固定液有10%中性甲醛、4%多聚甲醛等等。 3冲洗 组织固定后，一般必须经过自来水流水冲洗。固定液量：4倍于组织
3、体积进行组织固定。 固定时间：不能过长，随着固定时间的延长，对组织抗原的检出强度将逐渐降低。 石蜡包埋4脱水 通常多用酒精脱水，为减少组织收缩，脱水酒精的浓度必须由低浓度开，逐级升高浓度。一般始从70%酒精（2h）80%酒精（2h）90%酒精（1h）95%酒精I（1h）95%酒精（1h）100%酒精I（1h）100%酒精II（ 1h ）。原则是脱水透明要充分但不能过，原则是脱水透明要充分但不能过， 否则造成组织的硬脆使组织切片困难。否则造成组织的硬脆使组织切片困难。 石蜡包埋石蜡包埋5透明 1/2冬青油（2h）冬青油（过夜）二甲苯洗涤（510min）。 6浸蜡 石蜡I（ 1h ） 石蜡II（
4、1h ）石蜡III（1h）。 温度不能高，不要超过温度不能高，不要超过6565否则造否则造 成组织的硬脆使组织切片困难，成组织的硬脆使组织切片困难， 即使能切片，也使切片不能完好平整，即使能切片，也使切片不能完好平整， 染色过程中极易脱片，对免疫组化染色过程中极易脱片，对免疫组化 染色抗原的定位及背景都不利。染色抗原的定位及背景都不利。7包埋 将组织块和石蜡置于包埋框内，冷却即成蜡块，组织获得了一定硬度和韧度，就可以切成微薄的切片。石蜡包埋石蜡包埋8、切片 进行连续切片，厚5m左右，放入45oC漂烘仪内进行展片。 9、裱片 待蜡片展平后进行裱片。 10、烤片 将切片放置60oC温箱35h，使切片粘贴牢固，待用。切片时必须保持切片刀锐利，切片要薄而平整、切片时必须保持切片刀锐利，切片要薄而平整、 无皱摺、切片厚度一般为无皱摺、切片厚度一般为3 34 4mm。 切片在切片在56 56 60 60恒温箱中烤片恒温箱中烤片3 34 4小时可小时可 防止脱片。但注意烤片的温度不宜过高，防止脱片。但注意烤片的温度不宜过高， 高温烤片对抗原有破坏作用高温烤片对抗原有破坏作用。石蜡包埋
