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1、 沙门氏菌及其检验沙门氏菌及其检验一、沙门氏菌简介 二、案例分析 三、检验 沙门氏菌属（Salmonella） 是肠杆菌科的一个大属，有2600多个血清型，我 国发现的约有100个。 沙门氏菌广泛存在于猪、牛、羊、家禽、鸟类 、鼠类等多种动物的肠道和内脏中。 本属细菌绝大多数成员对人和动物有致病性， 能引起人和动物的败血症与胃肠炎，甚至流产 ，并能引起人类食物中毒，是人类细菌性食物 中毒的最主要病原菌之一。沙门氏菌及其检验沙门氏菌及其检验 致病性最强的是猪霍乱沙门氏菌(Salmonella cholerae)，其次是鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)和肠炎沙门氏菌(
2、Salmonella enteritidis)。 沙门氏菌及其检验沙门氏菌及其检验 在食品卫生上，认为沙门氏菌所有血清型均对人 类存在致病性，因此要求所有食品中均不得检出 。生物学特性1.形态染色特性 G-无芽孢杆菌。菌端钝圆，散在，无荚膜， 除鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌外均有周 身鞭毛，能运动，绝大多数菌株有菌毛。 沙门氏菌简介沙门氏菌简介生物学特性1.形态染色特性 2.培养特性 需氧或兼性厌氧菌。 对营养要求不高，在普通培养基中生长旺盛。 胆盐可促进其生长。沙门氏菌简介沙门氏菌简介生物学特性1.形态染色特性 2.培养特性 普通琼脂：圆形、光滑、 无色半透明、中等大 小(2 4mm)菌落
3、。鸡白痢、鸡伤寒、猪副伤寒、甲型 副伤寒沙门氏菌等只能长成细小菌落。 麦康凯琼脂和伊红美兰琼脂（EMB）：菌落无 色半透明 .琼脂和琼脂：无色半透明、中心黑 色或几乎全部黑色（多数菌株）的菌落 琼脂：形成蓝绿色或蓝色菌落，产硫化氢 菌株菌落中心带黑色。沙门氏菌简介沙门氏菌简介S.typhimurium. HE Salmonella Typhi SS，无色 Salmonella Enteritidis SS，黑色(H2S) Escherichia coli ATCC25922 SS，粉红色 3.生化特性 沙门氏菌属细菌一般生化特性硫化氢 + 枸橼酸盐利用 d 甘露醇 + 尿素酶 - 赖氨酸脱羧酶
4、 + 棉子糖 - 靛基质 - 精氨酸双水解酶 （+） 鼠李糖 + M.R. + 鸟氨酸脱羧酶 + 蔗糖 - V-P - 苯丙氨酸脱羧酶 - 卫矛醇 + KCN - 分解葡萄糖产气 + 丙二酸钠 - 动力 + 侧金盏花醇 - 明胶（22） - 水杨苷 - 氧化酶 - 乳糖 - O/F试验 发酵型 注：+ 阳性；- 阴性；d 有不同的生化型；（+） 迟缓阳性生物学特性 1.形态染色特性 2.培养特性 3.生化特性 4血清学特性 沙门氏菌具有复杂的抗原结构，一般沙门氏菌具有菌体(O) 抗原、鞭毛(H)抗原和包膜抗原 (Vi抗原) 等三种抗原。 1）O抗原（菌体抗原）沙门氏菌的O抗原共有65种， 以阿
5、拉伯数字1、2、3、4代表凡含有共同O 抗原组分的各个血清型划归于一个群。目前有 58个血清群。2）H抗原 63种3） Vi抗原 为包膜抗原沙门氏菌简介沙门氏菌简介生物学特性5、抵抗力 沙门氏菌属不耐热，55 1h、60 1530min即被杀死。 但在水中、各种食品中以及冷冻条件下存活时 间较长。 由于沙门氏菌属不分解蛋白质，不产生靛基质 ，污染食物后无感官性状的变化，易被忽视而 引起食物中毒。沙门氏菌简介沙门氏菌简介二、案例浅析二、案例浅析原因食品：主要为动物性食品，特别是畜肉类及其制 品，其次为禽肉、蛋类、乳类及其制品，由植 物性食品引起者很少。国内报道，猪的带菌率为10.734.8%，鸡
6、 的带菌率为2.36.8%，鸡蛋带菌率高达30% 。国外，如荷兰报道猪的带菌率在30.1% 以 上。 沙门氏菌食物中毒发病率较高，占总食物 中毒的4060，最高可达90。 检验食品中沙门氏菌的检验方法，应按中华人 民共和国国家标准食品卫生微生物学检验 沙门氏菌检验方法(GB/ T4789. 42003)进 行。 主要程序：前增菌和增菌分离生化试验血清学分型鉴定（O、H、Vi抗原的鉴定）结果报告 沙门氏菌及其检验沙门氏菌及其检验前增菌 冷冻的肉类、蛋制品、乳制品等加工食品。 方法是将样品25g（mL）用缓冲蛋白胨水（ BP）225mL匀浆后于37培养4h。 选择性增菌MM（TTB）及SC 前增菌
7、后的样品。取10mL加入到100mL选择 性增菌液中培养1824h。 鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其它未经过加工的食品 、病人样品等。可直接取样品25g（mL）用 盐水混匀，并用MM（TTB）及SC进行选择 性增菌。细菌分离与菌落挑选 1. 取上述增菌培养物分别划线接种于BS琼脂 平板和DHL（或HE或SS）琼脂平板各一个 ，经37培养1824h（DHL、HE、SS） 或4048h（BS），观察菌落形态。 2. 挑选可疑菌落35个接种于三糖铁（TSI） 琼脂斜面，37培养1824h。 根据三糖铁（TSI）上的反应结果判断斜面 底层 产气 H2S 可能的菌属和种 - + +/- + 沙门氏菌属、弗劳地氏柠
8、檬酸菌、变形杆菌属、缓慢爱德华氏菌 + + +/- + 沙门氏菌、弗劳地氏柠檬酸杆菌、 普通变形杆菌 - + + - 沙门氏菌属、大肠埃希氏菌属、蜂窝哈夫尼亚菌、摩根氏菌、普罗菲登斯菌属 - + - - 伤寒沙门氏菌、鸡沙门氏菌、志贺氏菌属、大肠埃希氏菌、蜂窝哈夫尼亚菌、摩根氏菌、普罗菲登斯菌属 + + + - 大肠埃希氏菌、肠杆菌属、克雷伯氏菌属、沙雷氏菌属、弗劳地氏柠檬酸杆菌Triple Sugar Iron agar slant (TSI slant) Use : For the differentiation of members of the Entero- bacteriaceae
9、 base on their fermentation of lactose, sucrose and glucose and the production of H2S.生化检验结果判断： 如果H2S+、KCN-、尿素-、靛基质-、赖氨 酸+为沙门氏菌典型反应； 若其中尿素、KCN和赖氨酸3项中有1项异 常，仍可判为沙门氏菌；若有2项异常，则 判为弗劳地氏柠檬酸杆菌； 若靛基质+，应补做甘露醇和山梨醇试验， 若均为阳性，则判为沙门氏菌的变异；若均 为阴性，则为缓慢爱德华氏菌。 若H2S-补做ONPG，ONPG+为大肠埃希氏 菌，ONPG-为沙门氏菌。 凡临床分离菌乳糖、吲哚阳性或脲酶阳性者
10、，均不考虑为沙门菌。血清学鉴定 由于引起人和动物发病的沙门氏菌绝大多数分布于AF群 中，所以通常只需做AF群O抗原成分和H抗原鉴定即可 判定沙门氏菌的血清型。 （1）O抗原鉴定：首先用市售A-F多价抗O血清做玻片凝 集试验。出现凝集后，再用代表9个O群的O因子血清，逐 一检查，以确定待检菌属于哪个O群。O多价1 A，B，C，D，E，F群（并包括6，14群） O多价2 13，16，17，18，21群 O多价3 28，30，35，38，39群 O多价4 40，41，42，43群 O多价5 44，45，47，48群 O多价6 50，51，52，53群 O多价7 55，56，57，58群 O多价8 5
11、9，60，61，62群 O多价9 63，65，66，67群血清学鉴定 （2）H抗原鉴定：一般最好使用63种规格 诊断血清中的8个H多价血清来检查，方法 类似于O抗原鉴定， （3）Vi抗原鉴定：用Vi因子血清检查。 检验沙门氏菌的快速检验方法：1荧光抗体法（以前列入进出口检验专业标准）2E-15快速生化鉴定系统检查法 3噬菌体裂解法 4. 酶联免疫吸附试验（ELISA）、DNA探针 技术、PCR技术等 沙门氏菌及其检验沙门氏菌及其检验金黄色葡萄球菌及其检验金黄色葡萄球菌及其检验 Examination of Examination of Staphylococcus Staphylococcus
12、 aureusaureusS. aureus S. aureus 1000x1000xn nS. aureusS. aureus cells attaching to, cells attaching to, and invading, epithelial cellsand invading, epithelial cells 葡萄球菌葡萄球菌 葡萄球菌（Staphylococcus）是引起人类和动物化 脓性感染的最重要病原菌，可引起人类丘疹、疖、脓 肿、骨髓炎和脑膜炎以及奶牛的乳房炎，又是引起人 类食物中毒的最常见细菌之一。 葡萄球菌包括金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aur
13、eus） 、表皮葡萄球菌(staphylococcus epidermidis)和腐生葡萄球菌(staphylococcus saprophyticus)。 引起食物中毒的主要是金黄色葡萄球菌，致病因素是 其在食品中繁殖后产生的肠毒素(enterotoxin)，故属 于毒素型中毒。 中毒的原因食品主要是乳类、肉类、鱼类及含淀粉高 的食物（如剩米饭等），特别是经过加热处理的食品 。 1. 形态染色特性革兰氏阳性球菌，致病性菌株形态较小，呈葡萄 串状排列。无芽孢，无鞭毛，一般不形成荚膜 。 2. 培养特性兼性厌氧，在普通培养基上生长良好。金黄色葡 萄球菌在血平板通常产生金黄色色素，多数溶 血。在普
14、通肉汤中培养24h后，均匀浑浊生长； 23天后可形成菌膜；老龄培养物管底可有粘稠 沉淀物。耐盐性强，在含10 15氯化钠培 养基中亦能生长。一、金黄色葡萄球菌一、金黄色葡萄球菌 简介简介菌膜菌沉淀均匀浑浊对照1. 形态染色特性 2. 培养特性普通琼脂上：湿润、不透明的中等大小菌落， 直径一般为12mm。 Baird-Parker氏琼脂上：菌落为圆形、光滑、 凸起、湿润，直径为23mm，颜色呈灰色 到黑色，边缘色淡，周围为一浑浊带，其 外层有一透明带。 一、金黄色葡萄球菌简介一、金黄色葡萄球菌简介菌落完全溶血菌落完全溶血 Characteristic gold/yellow colonies of penicillin-resistant Staphylococcus aureu
