《血红蛋白的提取和分离》

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1、 1、蛋白质分离和提取的原理：根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和 大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质 和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同种 类的蛋白质。一、血红蛋白的提取和分离2、提取分离方法凝胶色谱法 电泳法 （一） 凝胶色谱法（分配色谱法）2.凝胶：大多数凝胶是由多糖类化合物（如葡聚糖或琼脂 糖）构成的多孔小球体，内部有许多贯穿的通道。根据被分离物质的蛋白质相对分子质量 的大小，利用具有网状结构的凝胶，来进行 分离。1.概念：凝胶色谱法分离蛋白质过程的动画演示凝胶色谱法分离蛋白质过程的动画演示（二）缓冲溶液1.概念:在一定的范围内，凡是能够抵制外加少量 强酸或强碱的

2、影响使原来溶液PH值基本保持不 变的混合溶液。能够抵制外界的酸和碱对溶液PH值的影响， 维持PH基本不变。2.作用:（三）（三） 电泳：电泳： 1. 1.概念：概念：带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。 2.2.原理：原理：分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身 的大小，形状的不同，使带电分子产生不同的迁移 速度，从而实现样品中各种分子的分离。3.3.常用电泳方法常用电泳方法: :琼脂糖凝胶电泳、聚丙稀酰胺凝胶电泳。二、实验操作样品处理粗分离纯化纯度鉴定1.样品处理：（一）蛋白质提取和分离步骤（二）操作过程可选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液来 分离血红蛋白。血 液血浆水 分固体物质：血

3、浆蛋白、无机盐、磷脂、葡萄糖等血细胞白细胞 血小板 红细胞 （最多）血红蛋白 （90）两个肽链 两个一肽链 四个亚铁血红素基团2.提问：血液有哪些成分？1.提问：用鸡的红细胞提取DNA，用猪、牛、羊的 红细胞提取血红蛋白的原因是什么？鸡的红细胞具有细胞核，含有DNA，便于进行DNA 的提取；人的红细胞无细胞核，结构简单，血红蛋 白含量丰富，便于提取血红蛋白。血红蛋白两个肽链 两个一肽链 四个亚铁血红素基团每个肽链环绕一个亚铁血红素基团， 此基团可携带一分子O2或一分子CO2 ，血红蛋白因含有血红素而 呈红色。血红蛋白的特点：(1)红细胞的洗涤:去除杂质蛋白，利于后续血红蛋白的分离纯化.目的:(

4、 (2)2)血红蛋白的释放：血红蛋白的释放：加蒸馏水到原血液体积，加40体积的甲苯 （溶解细胞膜）置于磁力搅拌器搅拌10min（加速细胞破裂）红细胞破裂，释放出血红蛋白(3)分离血红蛋白溶液：过程：将搅拌好混合液转移到离心管内，以 2000r/min的速度离心10 min。试管中溶液层次：第1层（最上层）：甲苯层（无色透明）； 第2层（中上层）：脂溶性物质沉淀层（白色薄层固体）； 第3层（中下层）：血红蛋白的水溶液层（红色透明液体）； 第4层（最下层）：杂质沉淀层（暗红色）。分离： 滤纸过滤：除去脂溶性沉淀层， 分液漏斗中静置：分出下层的红色透 明液体。(4)透 析：过程： 取1ml的血红蛋白

5、溶液装入透 析袋中，将透析袋放入盛有 300ml的20mmol/l的磷酸缓冲 液中（pH为7.0），透析12h目的： 除去样品中分子量较小的杂质和离子。20mmol/L磷酸缓冲液1mL透析过程动画演示透析过程动画演示1. 选用红细胞作为分离蛋白质的实验材料，有何好 处（ ） A. 血红蛋白是有色蛋白B. 红细胞无细胞核C. 红细胞蛋白质含量高 D. 红细胞DNA含量高A2. 将搅拌好的混合液离心来分离血红蛋白溶液时， 第二层是（ ）A. 甲苯B. 血红蛋白水溶液C. 脂溶性物质的沉淀层D. 其他杂质的沉淀C 3、下列有关提取和分离血红蛋白的程度叙述错误的是 A. 样品的处理就是通过一系列操作收集到血红蛋白溶液 B. 通过透析可以去除样品中分子质量较大的杂质，此为样 品的粗提取 C. 可通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去， 即样品的纯化 D. 可通过SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血红蛋白的纯度B