中药及其制剂中丹皮酚的含量测定

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1、中药及其制剂中丹皮酚的含量测定摘 要 ： 丹 皮 酚 的 含 量 是 衡 量 牡 丹 皮 、 徐 长 卿 等 中 药 材 及 以 其 组 方 的 制 剂 六 味 地 黄丸 等 质 量 控 制 的 重 要 指 标 。 本 文 综 述 了 近 年 含 丹 皮 酚 的 中 药 材 及 中 药 制 剂 测 定 时 的前 处 理 条 件 和 各 种 测 定 方 法 。关 键 词 ： 丹 皮 酚 ;牡 丹 皮 ;徐 长 卿 ;药 物 分 析牡 丹 皮 为 毛 茛 科 芍 药 属 牡 丹 (PaeoniasuffruticosaAndr.)的 干 燥 根 皮 ， 徐 长 卿 为摩 萝 科 植 物 徐 长 卿

2、 (Cynanchumpaniculatum(Bge.)kitag.)的 根 及 全 草 。 两 者 均 是 具有 抗 菌 消 炎 作 用 的 常 用 中 草 药 ， 其 主 要 有 效 成 分 均 是 丹 皮 酚 (patpnol)。 在 常 见 的中 药 制 剂 六 味 地 黄 丸 、 金 匮 肾 气 丸 、 麦 味 地 黄 丸 、 当 归 养 血 丸 等 十 余 种 中 成 药 处 方中 均 有 配 伍 使 用 。 丹 皮 酚 含 量 是 评 价 这 些 中 成 药 质 量 的 重 要 定 量 指 标 。 中 国 药 典 (一九 九 五 年 版 )规 定 六 味 地 黄 丸 中 丹 皮

3、酚 含 量 是 其 定 量 指 标 之 一 1。 由 于 中 药 材 及其 制 剂 成 分 十 分 复 杂 ， 若 需 要 测 定 其 中 某 一 成 分 ， 样 品 的 前 处 理 是 关 键 的 一 步 ， 而处 理 方 法 又 必 须 与 选 定 的 分 析 方 法 相 适 应 。 现 将 含 丹 皮 酚 的 中 药 材 及 其 制 剂 的 样 品处 理 和 含 量 测 定 方 法 综 述 如 下 。1、 光 谱 法1.1 紫 外 -可 见 分 光 光 度 法 (Ultravioet-VisibleSpectrophotometry， UV)紫 外 -可 见 分 光 光 度 法 具 有

4、操 作 简 单 、 费 用 较 低 等 优 点 。 但 由 于 该 法 基 本 上 没 有分 离 能 力 ， 样 品 处 理 要 求 严 格 ， 故 常 被 用 于 一 般 要 求 不 很 严 格 的 测 定 以 及 中 药 材 炮制 方 法 、 处 理 条 件 的 比 较 、 制 剂 工 艺 选 择 等 方 面 。 丹 皮 酚 具 有 一 定 的 挥 发 性 ， 光 谱法 中 样 品 处 理 一 般 都 用 水 蒸 气 蒸 馏 或 直 接 蒸 馏 法 提 取 ， 以 减 少 混 入 杂 质 ， 通 常 蒸 馏液 稀 释 后 于 274nm 处 测 定 吸 收 度 。 周 玉 生 等 2用 该

5、 法 测 定 了 牡 丹 皮 中 丹 皮 酚 含 量 ，比 较 了 不 同 加 工 方 法 的 丹 皮 酚 的 含 量 ： 取 已 加 工 的 牡 丹 皮 样 品 适 量 ， 置 蒸 馏 瓶 中 ，加 水 约 120mL， 蒸 馏 后 得 馏 出 液 约 有 95mL， 稀 释 后 在 274nm 测 定 吸 收 度 。 结 果发 现 ， 水 洗 50 烘 干 损 失 率 最 高 ， 为 34.96%;白 酒 喷 淋 晾 干 ， 损 失 率 最 低 ， 为11.19%。 毛 黎 明 等 3用 水 蒸 汽 蒸 馏 法 测 定 了 六 味 地 黄 的 浓 缩 丸 、 口 服 液 、 胶 囊 三 类

6、制 剂 中 丹 皮 酚 含 量 ， 将 试 样 蒸 馏 后 ， 收 集 馏 液 约 450mL， 加 水 稀 释 ， 定 容 后 ， 在270nm 处 测 定 吸 收 度 。 结 果 发 现 不 同 制 剂 含 量 有 明 显 差 别 。 周 海 梅 等 4将 样 品置 烧 瓶 中 ， 加 水 后 直 接 蒸 馏 ， 收 集 蒸 馏 液 ， 稀 释 后 用 UV 测 定 ， 结 果 与 水 蒸 气 蒸馏 提 取 测 定 无 明 显 差 异 。 陈 文 斗 5利 用 丹 皮 酚 能 与 对 硝 基 氯 化 重 氮 苯 在 碳 酸 钠 溶液 (pH10.5 11.5)中 偶 合 呈 色 的 原 理

7、 ， 测 定 了 制 剂 中 丹 皮 酚 含 量 。 其 方 法 是 将 牡 丹皮 样 品 在 P2O5 真 空 干 燥 器 中 干 燥 至 恒 重 ， 取 粉 末 100mg 加 0.2%NaOH 溶 液 振摇 ， 静 置 过 滤 ， 取 续 滤 液 适 量 ， 加 入 乙 酸 钠 缓 冲 液 和 偶 合 试 剂 ， 反 应 2min， 再加 入 碳 酸 钠 溶 液 ， 反 应 3min， 定 容 ， 以 溶 剂 加 试 剂 同 样 处 理 后 为 空 白 ， 在480nm 处 测 定 吸 收 度 ， 结 果 丹 皮 酚 在 6.02 30.1mol/L 范 围 成 良 好 线 性 关 系

8、， 丹皮 酚 回 收 率 达 (99.970.97)%。1.2 胶 束 荧 光 法 (MicellarFluorimetry， MCF) 胶 束 荧 光 法 常 用 十 二 烷 基 硫 酸 钠 (SDS)作 为 胶 束 试 剂 ， SDS 在 水 溶 液 中 能 形成 一 种 亲 水 基 团 向 外 、 疏 水 基 团 向 内 的 有 序 排 列 。 当 浓 度 该 试 剂 的 临 界 胶 束 浓度 时 ， 在 溶 液 中 形 成 胶 束 。 在 胶 束 的 胶 核 里 有 一 个 疏 水 环 境 ， 有 利 于 极 性 较 小 的 丹皮 酚 的 溶 解 ， 提 高 了 微 环 境 里 丹 皮

9、 酚 的 浓 度 ， 特 别 是 由 于 胶 束 的 稳 定 作 用 ， 能 提 高荧 光 量 子 产 率 ， 使 该 方 法 的 灵 敏 度 得 到 提 高 。 庞 志 功 等 6用 该 法 测 定 了 牡 丹 皮 和徐 长 卿 中 的 丹 皮 酚 含 量 。 样 品 用 1mol/L 的 HCl-甲 醇 溶 液 浸 泡 1h 后 ， 氯 仿 提 取 ，提 取 液 浓 缩 至 干 ， 用 V(氯 仿 ) V(甲 醇 )=1 1 溶 解 定 容 ， 取 20L， 硅 胶 薄 板 点样 ， 展 开 ， 刮 取 丹 皮 酚 斑 点 ， 用 =95%乙 醇 浸 泡 洗 脱 后 ， 取 适 量 ， 加

10、 2mLSDS溶 液 (1.5%)和 水 ， 快 速 混 匀 器 上 振 荡 5min， 再 用 水 定 容 ， 于EX275nm， EM550nm 处 测 定 荧 光 强 度 ， 丹 皮 酚 在 20pg/mL 800ng/mL 浓 度 范 围内 成 线 性 ， r=0.9934， 平 均 回 收 率 94.2%(n=4)， 最 低 检 出 限 5.7pg。 该 方 法 操 作简 便 ， 灵 敏 度 高 ， 适 用 于 微 量 丹 皮 酚 的 测 定 。2、 色 谱 法 (chromatography)用 于 分 析 丹 皮 酚 的 色 谱 法 有 GC 法 、 HPLC 法 、 TLC 法

11、 等 ， 由 于 色 谱 法 具 有较 高 的 分 离 能 力 和 灵 敏 的 检 测 能 力 ， 最 适 合 于 中 药 材 及 其 制 剂 中 有 效 成 分 的 定 性 定量 测 定 。2.1 气 相 色 谱 法 (Gaschromatography， GC)气 相 色 谱 法 具 有 很 强 的 分 离 能 力 和 很 高 的 灵 敏 度 ， 只 需 很 少 量 的 样 品 即 可 得 到满 意 的 结 果 。 因 此 是 分 析 成 分 复 杂 的 中 药 中 痕 量 成 分 的 有 效 手 段 。 为 了 增 加 检 测 灵敏 度 和 选 择 性 ， 并 出 于 对 色 谱 柱 和

12、 检 测 器 的 保 护 ， GC 以 及 HPLC 对 中 药 样 品 的处 理 要 求 也 较 严 格 ， 除 水 蒸 气 蒸 馏 法 外 ， 还 有 多 种 其 它 有 效 的 提 取 方 法 。 杨 昌 金 等 7将六 味 地 黄 丸 粉 末 1g 用 V(氯 仿 ) V(丙 酮 )=2 14mL， 室 温 浸 泡 1h， 超 声20min， 再 加 内 标 溶 液 (十 八 烷 ， 2mg/mL 丙 酮 液 )1mL， 摇 匀 ， 静 置 ， 取 上 清 液1L 进 样 。 色 谱 条 件 :2m 长 玻 璃 柱 ， 填 充 剂 用 5%E-301 涂 布 chromasorbw 担

13、 体(80 100 目 )而 成 ， 柱 温 185 ， 检 测 器 及 进 样 口 温 度 220 ， N2 为 载 气 。 结 果 ，丹 皮 酚 含 量 在 4 200ng 内 线 性 良 好 ， r=0.9998， 平 均 回 收 率 99.6%， 检 测 下 限浓 度 20ng/mL。 殷 霞 等 8用 高 分 辨 气 相 色 谱 法 测 定 了 六 味 地 黄 丸 中 丹 皮 酚 含 量 ， 将样 品 碾 碎 ， 置 索 氏 提 取 器 中 用 乙 酸 乙 酯 提 取 4h， 提 取 液 过 滤 ， 浓 缩 至 干 ， 残 渣 用含 内 标 正 十 六 烷 的 甲 醇 溶 液 2mL

14、 溶 解 ， 离 心 ， 取 上 清 液 1L 进 样 。 色 谱 条 件 ：28m0.28mmFSOT 柱 ， 固 定 液 SE-30， 柱 温 180 ， 检 测 室 、 气 化 室 温 度 均320 ， N2 为 载 气 ， 分 流 进 样 ， 分 流 比 1 93， FID 检 测 。 结 果 ， 在2.5 12.5g/mL 内 ， 线 性 相 关 系 数 r=0.9995， 平 均 回 收 率100.3%， RSD=1.38%。 郭 丽 冰 等 9用 直 接 蒸 馏 -大 孔 树 脂 -气 相 色 谱 法 ， 测 定 了 徐长 卿 中 丹 皮 酚 含 量 。 样 品 粉 末 经 水

15、蒸 气 蒸 馏 后 ， 取 蒸 馏 液 上 大 孔 树 脂 DA-201柱 ， 用 乙 醇 洗 脱 ， 定 容 后 吸 取 0.5mL 洗 脱 液 ， 加 0.5mL 内 标 (正 十 七 烷 乙 醇 液 )，混 匀 后 ， 取 1L 进 样 。 色 谱 条 件 ， Hp-1710m0.53mmI.D.弹 性 交 联 石 英 毛 细 管 柱 ，程 序 升 温 ， 分 离 检 测 ， 检 测 器 FID， 温 度 220 ， N2 为 载 气 ， 分 流 进 样 ， 分 流 比1 5， 在 3 80ng 内 ， 线 性 相 关 系 数 r=0.9997， 平 均 加 样 回 收 率99.42%，

16、 RSD=2.28%。 段 玲 等 10用 毛 细 管 气 相 色 谱 法 ， 以 正 十 五 烷 为 内 标 ， 测 定了 牡 丹 皮 中 丹 皮 酚 含 量 ， 样 品 置 100mL 恒 压 滴 液 漏 斗 中 ， 用 无 水 乙 醇 回 流 提 取4h， 取 提 取 液 1mL 加 内 标 50L， 混 匀 ， 进 样 0.1L。 色 谱 条 件 ， 石 英 毛 细 管 柱(10m0.25mmI.D.)， SE-30 键 合 相 ， FID 检 测 ， 用 三 因 素 二 水 平 正 交 设 计 -单 纯形 组 合 优 化 法 对 柱 温 、 进 样 室 温 度 、 柱 前 压 进 行 试 验 ， 得 出 最 佳 条 件 ： 柱 温130 ， 柱 前 压 0.55kg/cm2。 丹 皮 酚 在 10 900ng 范 围 内 线 性 相 关 ， r=0.9984，平 均 回 收 率 99.28%， RSD2.6%， 结 果 与 药 典