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1、第十章 甾体激素类药物的分 析n甾体激素类药物（steroid hormone drugs）：是指分子结构中含有甾体母核的激素类药物 。分子结构中均具有环戊烷并多氢菲母核，是 临床上较为重要的一类药物。来源：天然物、人工合成品。 如： 氢化可的松、睾酮、雌二醇、黄体酮等。 中国药典收载本类药物及其各种制剂97个品种 。第一节 基本结构和分类n一、基本结构：环戊烷并多氢菲母核二、分类与结构特征n分类两大类肾上腺皮质激素 性激素简称皮质激素 雄性激素与蛋白同化激素雌激素、孕激素（一）肾上腺皮质激素n本类药物均可视作皮质酮的衍生物（I ）皮质酮 （II ）氢化可的松corticosterone hy
2、drocortisone（III）地塞米松磷酸钠 （IV）醋酸氟轻松主要结构特征n（1）A环的C3上有酮基；C4/C5间有双键， 并与C3酮基共轭，称为，-不饱和酮，标记 为4-3-酮。n（2）D环的C17上有-醇酮基（ - ketol） 侧链（ ）。n（3）合成甾体抗炎药在结构上多具有C1/C2 间双键；C6-、C9-卤素；C16-羟基、甲基； C17-羟基等取代基。如：地塞米松磷酸钠、醋酸氟轻松。（二）雄性激素与蛋白同化 激素n睾酮（睾丸素）衍生物n某些蛋白同化激素在C10上无19-角甲基，如苯丙酸诺龙。n中国药典收载的原料与制剂：丙酸睾酮、十一酸睾酮、甲睾酮、硫酸普 拉睾酮钠。（V ）睾
3、丸素 （VI ）苯丙酸诺龙testosterone nandrolone phenylpropionate可供分析主要结构特征：A环的4-3-酮结构（三）雌激素n雌二醇及其C17-羧酸酯类：戊酸雌二醇、苯甲酸雌二醇n C17-乙炔基衍生物：炔雌醇、炔雌醚、尼尔雌醇（VII） 雌二醇 estradiol （VIII）炔雌醇ethinylestradioln可供分析结构特征（1）A环苯环，具有C3-酚羟基；（2）D环的C17上具有-乙炔基。（四）孕激素 （黄体激素）n黄体酮及其衍生物n如：己酸羟孕酮、醋酸甲羟孕酮、醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮（IX） 黄体酮 progesteronen可供分析结构特
4、征：（1 ）A环具有4-3-酮结构（2 ）D环的C17上有甲酮基（ketone）侧链（ ）（五）其它n中国药典收载的口服避孕药：炔诺酮及衍生物n如：炔孕酮、炔诺孕酮、左炔诺孕酮（X ）炔诺酮norethisteronen结构特征：在结构上具有上述各类性激素的特征（1 ）A环具有4-3-酮结构（皮质激素、雄性激素、孕激素类）（2 ）D环的C17上多具有-炔基（雌激素类）（3 ）C10上多无19-角甲基（雌激素类）炔诺孕酮 炔孕酮（norgestrel） （ethisterone）第二节 鉴别试验n与强酸的呈色反应n官能团的反应n测定衍生物熔点n酯类的反应n紫外分光光度法n红外分光光度法n薄层色谱
5、法n高效液相色谱法一、与强酸的呈色反应n甾体激素 硫酸（硫酸-乙醇）、磷酸、高氯酸、盐酸 呈色n反应机理： 4-3-酮 浓硫酸 质子化 正碳离子（共轭体系）显色表10-2 某些甾体激素与硫酸的呈色反应（溶液颜色、溶液荧光、加 水稀释后现象） 特点：甾体母核反应，操作简便，不同甾体形成溶液颜色或荧光各不相同， 可以互相区别。但专属性稍差，反应较灵敏。操作中对取样量和试剂用 量要求较为严格。 中国、英、日国家药典采用此方法 中国药典鉴别醋酸可的松二、官能团的反应n酮基的反应nC17-醇酮基的反应n甲酮基或活泼亚甲基的反应n酚羟基的反应n氟元素的反应n乙炔基的反应（一）酮基的反应n4-3-酮、C20
6、-酮基 + 羰基试剂 呈色（异烟肼、硫酸苯肼、2 ,4-二硝基苯肼）+ HCl黄体酮 异烟肼 黄色 反应速度: 4-3-酮（即刻反应） 1,4-3-酮(13min) C20-酮基(更长时间)(二)C17-醇酮基的反应n皮质激素分子结构中 C17 位上的 -醇酮基还原性氧化剂氧化被还原析出沉淀或显色 水合醛氧化剂 ：碱性酒石酸铜试液、氨制硝酸银试液、碱性四氮唑试液1.与碱性酒石酸铜试液反应 (斐林试液)+2Cu2+ +4OH- 醋酸泼尼松+ Cu2O + 2H2O红色 水合醛 2.与氨制硝酸银试液反应(多伦试液)+ 2Ag+ + 2OH- 醋酸去氧皮质酮+2Ag + CH3COOH黑色3. 与碱
7、性四氮唑试液反应n四氮唑盐: 氯化三苯四氮唑(TTC); 蓝四氮唑(BT)n结构如下: 还原 还原单甲 （红色） 双甲 （蓝色）n应用：-醇酮基的鉴别皮质激素中“其他甾体”TLC检出试剂含量测定显色试剂TTC BT反应原理如下：+ H2O醋酸泼尼松 TTC+ + CH3COOH水合醛 深红色（三）甲酮基或活泼亚甲基的 反应亚硝基铁氰化钠 间二硝基苯 芳香醛呈色n甲酮基的反应n亚甲基的反应1. 甲酮基的反应n黄体酮约5mg 至置小试管中 加甲醇 0.2ml 加亚硝基铁氰化钠的细粉约3mg 、碳酸钠及醋酸铵各约50mg 摇匀 放置1030min 显蓝紫色含有C17-甲酮基的黄体酮的灵敏、专属的鉴别
8、方法甲酮基的反应原理+ Fe(CN)5(NO)2- + 2OH-黄体酮+2H2O配位阴离子蓝紫色2. 亚甲基的反应n硫酸普拉睾酮钠约10mg，加乙醇1ml溶解，加间二硝基苯约10mg使溶解，加氢 氧化钠试液数滴 显紫红色+ OH- +H2O共轭结构（紫红色）(四)酚羟基的反应n雌激素类具有C3位酚羟基，C4位（芳香环的位）上的氢较为活泼，能与 重氮苯磺酸偶合生成红色偶氮化合物。+苯甲酸雌二醇红色偶氮化合物(五)氟元素的反应含氟甾体激素类药物（醋酸氟轻松 醋酸地塞米松）氧瓶燃烧无机氟化物茜素氟蓝 硝酸亚铈蓝紫色(六)乙炔基的反应+ AgNO3 + HNO3白色乙炔盐沉淀三、测定衍生物熔点甾体激素
9、类药物 甾体激素酯类试剂 反应 醇制碱液 水解酯、肟、缩氨基脲 游离甾体测熔点 （一）酮肟的生成+HONH2 +H2O （盐酸羟胺醋酸钠试液）炔诺孕酮 沉淀 滤过 水洗 重结晶测熔点约为195C，熔融同时分解（二）缩氨基脲的生成+H2NCONHNH2（盐酸氨基脲试液）苯丙酸诺龙+H2O熔点约为180C四、酯类的反应甾体激素多以羧酸酯类用药水解 乙醇制氢氧化碱游离羧酸乙醇、硫酸（12）共热羧酸乙酯 蒸除乙醇与硫酸共热 香气产生羧酸特臭五、紫外分光光度法多数甾体激素类药物共轭体系紫外吸收（ 规定 max、A、 、 Amax/Amin）六、红外分光光度法n甾体药物结构复杂 红外光谱鉴别n各国药典收载
10、的甾体激素类药物，几乎都采 用红外光谱作为鉴别方法之一。n中国药典收载甾体激素原料药40种，37种采 用红外光谱作为鉴别。n表10-3 甾体激素某些基团的特征吸收频率七、薄层色谱法n薄层色谱法（TLC） 一些国家用作甾体 激素类药物制剂的主要鉴别方法之一。n中国药典用TLC鉴别的药物和制剂有十余个品 种。n例：醋酸泼尼松片的鉴别薄层板：硅胶G板展开剂：二氯甲烷-乙醚-甲醇-水（385:60:15:2）显色剂：碱性四氮唑蓝对照品：醋酸泼尼松八、高效液相色谱法nHPLC鉴别法 ：一般采用在含量测定项 下记录的HPLC图中供试品峰的保留时间 应与对照品峰的保留时间一致。n特点：简便、快速、高分离效能
11、。n中国药典采用HPLC鉴别醋酸氟轻松软膏 等十余个品种。第三节 特殊杂质检查n杂质：原料、中间体、异构体、降解产物、试剂、溶剂。n检查项目：n 特殊杂质（有关物质）“其他甾体” （主要）n 其它检查项目n 地塞米松磷酸钠、氢化可的松磷酸钠 游离磷酸n 地塞米松磷酸钠 甲醇、丙酮n 醋酸氟轻松 氟n 炔诺孕酮 乙炔基n 醋酸氟轻松、醋酸地塞米松、泼尼松龙 硒一、游离磷酸n来源：磷酸酯化时残存的过量磷酸n检查方法：钼蓝比色法n原理：磷酸+钼酸铵 酸性溶液 磷钼酸铵还原磷铵酸蓝（钼蓝） =740nm 有最大吸收 例：中国药典收载的地塞米松钠的检查 结果： 在740nm处测定吸收度，供试品溶液的吸收
12、度不得大于对照溶液的吸收度。 二、甲醇和丙酮地塞米松磷酸钠中甲醇和丙酮的检查n来源：在生产工艺中使用大量甲醇和丙酮n检查：气相色谱法n规定：含丙酮不得过0.5%(g/g)，含甲醇不得 过0.3%(g/g)。n为什么药典规定作甲醇与丙酮残留量检查？n由于甲醇对人体有害，若用丙酮冲洗数次即可除尽甲醇。故药典规定采用 气相色谱法测定时不得出现甲醇峰。三、硒n来源：生产中使用二氧化硒脱氢工艺n检查原理：氧瓶燃烧法破坏Se（VI）盐酸羟胺 Se（IV）2,3-二氨基萘 pH24,5-苯并硒二唑环己烷提取378nm最大吸收 测定供试品溶液和对照品溶液在378nm波长处的吸收度并进行 比较，来判断供试品中的硒是否超过了限量。四、其他甾体n
