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1、 浅谈霉菌毒素快速检测产品莫 肖 楚 广东食品药品职业学院内容n霉菌毒素的概述n霉菌毒素污染引发的食品安全问题n几种主要的霉菌毒素及其污染情况n霉菌毒素快速检测方法n霉菌毒素检测产品市场分析一、霉菌毒素概述n霉菌毒素是由霉菌在污染物品上所繁殖的有毒有害代谢物质。 对人牲畜引起危害。在土壤中，在植物上，包括谷物 、饲草和青贮饲料均可发现霉菌毒素。n霉菌产毒的特点1）霉菌中仅有少数的菌种能够产毒,少数产毒霉菌只有 一部分菌株可以产毒。2）霉茵产毒具有可变性。3）产毒的菌种所产生的霉茵毒素无严格专一性。4）产毒的霉菌产生的毒素需要一定的条件。产生的条件和途径原料生物性原因原料种料过程中的因素原料收获
2、过程中的因素饲料和原料生产储存中的因素饲料销售过程使用中的因素二、霉菌毒素引发的食品安全问题全球大约每年至少25%的农作物受到霉菌毒 素的污染全世界每年由于霉变污染霉菌毒素引起的农 产品和工业原料的损失达数百亿美元。 受霉菌毒素污染的农作物n对各农作物输出国的对外贸易乃至整个 国民经济产生严重影响。n霉菌毒素严重影响动物和人类的健康。 n由于地理和气候的因素，加上生产经营 上的落后，我国霉菌毒素的污染状况不 容乐观。霉菌毒素的种类n主要是由霉菌分泌出来的二级产物, 目前霉菌种类已 经查证的有318种，其中曲霉属49种，青霉菌属92种 ，镰刀菌属36种，其他还有96属141种，而能够产生 的毒性
3、代谢产物即霉菌毒素共21类，340种。这些霉 菌毒素能够引起动物不同的生理表现，其中有病名的 霉菌毒素中毒病有23种。而这些霉菌毒素的命名很不 统一，通常在畜牧生产中常见并能直接影响动物生长 性能的霉菌毒素霉菌毒素主要由四种霉菌属产生：曲霉菌属-如黄曲霉毒素(黄曲霉毒素Altoxin)、赭 曲霉毒素(Ochratoxin)梭菌属-如玉米赤霉烯酮(Zearalenone)、呕吐毒素 (Vomitoxin)、T-2毒素等青霉菌属-如桔青霉素(Citrinin)麦角菌属-如麦角毒素(Ergotamin)三、几种主要的霉菌毒素及其污染情 况 (一)黄曲霉毒素( Aflatoxin, AFT) 由黄曲霉
4、( Aspergillus flavus )、寄生曲霉 ( A. parasiticus ) 和特曲霉（A.nomius） 等产生的次级代谢产物 黄曲霉毒素B1，B2，G1，G2是存在的主 要形式；M1是黄曲霉毒素B1在体内经过 羟化形成的衍生产物，主要存在于牛乳 中。 黄曲霉毒素B1，B2，M1, G1，G2n其毒性为氰化钾的10倍，五氧化二砷（ 砒霜）的68倍。（ 0.294毫克/公斤剂量 的黄曲霉毒素B1，就能引起敏感动物的 急性中毒死亡。）n1960年，由于食用了AFT污染的饲料， 英国10万只火鸡大规模中毒死亡。 n1988年，由于食用了含AFT的食物，造 成马来西亚13名儿童死亡。
5、n长期以来，由于检测技术落后，制约着 对农产品黄曲霉毒素污染的控制，也限 制着我国农产品的出口。n在天然污染的食品中以AFB1最为多见，其 毒性和致癌性也最强。 n黄曲霉毒素被世界卫生组织(WHO) 划定为 类致癌物。黄曲霉毒素中毒病理图(二)赭曲霉毒素（Ochratoxin ） 赭曲霉毒素由曲霉属和青霉属的某些菌 种产生。有7种结构类似物，其中以赭曲 霉毒素A（Ochratoxin A,OTA）的毒性最 强。 赭曲霉毒素A是由多种生长在粮食（小麦 、玉米、大麦、燕麦、大米和黍类等） 、花生、蔬菜（豆类）等农作物上的曲 霉和青霉产生的。 OTA易蓄积于组织中，其作用的主要靶 器官是肾脏、肝脏。
6、OTA还具有致癌、致畸和致突变性， （种毒引起肾脏损伤，大量的毒素也可能 引起动物的肠黏膜炎症和坏死）被IARC 划定为2B类可疑致癌物。 在亚洲、欧洲就北美的粮食及其制品 中OTA的检出率为40% 。n2002年我国的OTA在小麦、玉米的限 量标准为5g/kg。n 我国的OTA在饲料的限量标准为 100g/kg。(三)玉米赤霉烯酮(zearalenone， ZON)n又称F-2毒素，主要产毒菌株为禾谷 镰刀菌(Fusarium graminearum) 。n玉米、小麦、燕麦和大麦等易受到 ZON污染，猪和牛等家畜吃了被玉 米赤霉烯酮污染的谷物和饲料后， 可引起动物的雌激素中毒症。n它可干扰动
7、物和人体的性周期,引起雌激 素综合征,表现为性早熟、乳腺肿大、子 宫内膜增生、睾丸萎缩和脑垂体催乳素 分泌增加等,大量摄入可导致胚胎畸形和 不孕症。ZEN中毒症状图nZON可通过受污染谷类作物或被污染 的肉、奶等动物性食品进入人体。n2002年我国的ZONEN在小麦、玉米的 限量标准为60g/kg。n 我国的ZON在饲料的限量标准为 500g/kg。(四)脱氧雪腐镰刀菌烯醇（deoxynivalenol, DON）nDON又称呕吐毒素（vomitoxin）， 主要产生菌是禾谷镰刀菌（ Fusarium graminearum），是单端孢 霉烯族化合物中的一种。DON的分子结构图 受DON污染的
8、小麦n具有很强的细胞毒性。人畜摄入了 被DON污染的食物/饲料后，会导 致厌食、呕吐、腹泻、发烧、反应 迟钝等急性中毒症状，严重时损害 造血系统造成死亡。n近年来发现DON可能与人类食管癌 、IgA肾病有关。北京雏鸭 皮下注射 10.0 狗 皮下注射 0.1 猪 经口 0.1 鸽子 经口 10.0 动物种属 接触途径 致吐剂量（mg/kg）DON不同染毒途径的致吐剂量 nDON在全球污染相当普遍，主要污 染小麦、大麦、玉米等谷类作物及其 制品。n由于DON的危害严重，引起了各国 的普遍重视。谷物及饲料中DON的 含量有严格的限量标准，我国谷物中 DON的限量标准为1.0mg/kg 。预防的措施
9、n防霉：是根本的措施，是预防食品被霉 菌污染（田间耕作，防虫，晾晒及时）n贮藏：控制水分 降温 除氧n化学方法：药物防霉（用得较多的有乳 酸、二氧化碳、臭氧、甲醛、漂白粉、 氟化钠、羟基联苯酚钠等。 ）预防的措施nB 去毒：n物理方法（挑选霉粒 碾扎加工法 加水 搓洗法 吸附法）n化学方法（加碱处理法 ）n新方法：高压破坏，臭氧，微生物去毒四、霉菌毒素快速检测方法n目前霉菌毒素检测常用的方法如下几种：n一、薄层层析法：nTLC法是针对不同的样品，用适宜的提取溶剂将霉菌毒素从样 品中提取出来，经柱层析净化，再在薄层板上层析展开、分离 ，利用霉菌毒素的荧光性，根据荧光斑点的强弱与标准比较测 定其最
10、低含量。 n二、色谱法：n色谱法，包括薄层色谱、气相色谱、液相色谱等，一直是最重 要的霉菌毒素的化学分析方法。现在比较普遍的霉菌毒素的分 析方法还是液相色谱法，包括液相色谱-质谱联用技术。该法 快速而准确，但需要昂贵的仪器设备，仅限于专业检测机构获 得科研和调查分析、监测使用，未能在企业及基层广泛推广使 用，而且其结果的滞后效应大大降低了对生产实际的指导效果 。三、免疫化学检测法： （酶联免疫吸附法，胶体金免疫 层析法） n免疫学检测方法是基于抗体与抗原或半抗原之间的选 择性反应而建立起来的一种生物化学分析法。通常具 有高的选择性和很低的检出限，广泛用于各种抗原、 半抗或抗体的测定，一般可分为
11、荧光免疫法、发光免 疫法、免疫法及电化学免疫法等非放射免疫法和放射 免疫法，其中在饲料霉菌毒素检测中应用较广的主要 是酶联免疫吸附法（ELISA）和胶体金免疫层析法。n免疫学检测方法由于其快速、灵敏、准确、可定量、 操作简便、无需贵重仪器设备，且对样品纯度要求不 高等特性，特别适用于饲料厂、粮油/食品加工厂、 养殖场等企业进行原料或成品的检测以及工商质监部 门现场检测 （一）酶联免疫吸附测定法 ( enzyme linked immunosorbent assay, ELISA )主要有间接竞争 ELISA和直接竞争ELISA 。 具有较高的灵敏度和特异性。对样品的纯 度要求不高，可定量。 特
12、别适合于大批量样本的检测。技术原理简介ELISA (Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)+sample自备仪器和试剂：1. 酶标仪、粉碎机、保温箱2. 移液器、吸头3. 器皿：量筒、三角烧瓶、漏斗4. 耗材：滤纸、离心管、洗瓶5. ELISA分析软件可不使用设备，进行 半定量和定性检测试剂盒操作A. 取出试剂盒，温度平衡至室温（20-25）B. 加标准品或待检样品C. 加抗体，温育30 minsD. 洗板，加酶标记二抗，温育30 minsE. 洗板，加显色液，避光显色F. 终止，读数G. ELISA软件分析样品提取简单灵敏度高可定性、定量（二）免疫层
13、析法（ Immunochromatoghraphy，IC） n是在免疫化学基础上发展起来的定 性测定方法，其测定霉菌毒素的原 理类似于ELISA方法，只是以胶体 金颗粒、乳胶颗粒和磁性颗粒等示 踪粒子替代标记酶。AAAAAAAYAAAAAAAAYYYAY图4 快速检测试纸条的检测原理图阴性阳性 AAYYYYYYAY快速检测试纸条的检测原理检测结果的判读1、若检测卡上出现两条较明显的红线（C线控制线，T线检测线）则样品为阴性。2、若检测卡上只出现一条红线（C线）则样品为阳性 (DON含量1.0 mg/kg)。样品提取简单操作时间短可肉眼直判 结果适合快速筛查五、霉菌毒素检测产品市场分析n（一 ）
14、食品工业行业发展环境分析n我国的食品工业在过去的二十多年中,发展速度惊人, 新产品,名优产品不断涌现,市场集中度迅速提高,超临 界萃取,生物工程技术等高新技术得到广泛应用 。随 着食品的种类越来越多，食品的安全也备受人们的关 注。n不是不愿意到市场上买菜吃，实在是食品安全问题已 成“心头之患”：想吃肉，怕瘦肉精；想吃鱼，怕多宝 鱼；想吃鸡蛋，怕苏丹红；想吃火腿，怕敌敌畏；想 喝牛奶，怕三聚氰胺就连想吃蔬菜都怕农药，在 食品短缺的年代，人们为没什么可吃的发愁；在食品 丰富的今天，人们却要为吃不到安全的食品而“闹心” 。这不知道是谁的悲哀？（十二五规划建议）（二）我国霉菌毒素检验的市场现状n由于我
15、国对食品检测试剂的研发起步较 晚,我国对一些污染物,特别是一些新的污 染物缺乏科学有效的检测手段,统一的检 测方法和质量控制措施,大多数产品还处 在前期研发阶段,很多产品市场还属于空 白或者不能够完善，绝大部分的试剂都 是依靠进口，国内霉菌毒素检验产品有 着巨大的发展空间。 （三）食品检测试剂市场需求状况n目前制约我国食品工业发展的一个重要的因素是食品安全问题.2001年9 月20日在北京召开的食品安全高层研讨会上,有关专家估计,我国每年实 际发生食物中毒例数至少在2040万人,这一数字的公布,使得食品安全 问题再度成为消费者关注的热点.而且由于食品安全问题,使我们国家的 食品出口遭受了严重的
16、损失.为了改善我国的食品安全状况,政府也加大 了对这方面的投资,“十五”期间国家将拿出1.5个亿用于食品安全方面的 研发,机构建设,标准制定,法规制定等.根据科技部“十五”重大专项项目可 行性研究报告食品安全重大科技专项行动,“十五”期间我国要初步建 成食品安全检测体系,建立400500项实验室检测方法,研制出3040个 检测技术相关试剂(盒),现场快速检测技术.近年来,各地也加大了对食品 安全检测的投资力度 。n操作简单，准确度高，检验时间短的试剂盒才成为食品检验市场发展的 重要方向。（四）霉菌毒素检验试剂的发展趋向n一） 行业发展趋势 检测产品随着技术的发展有其产品生命 周期,但是对整个行业来讲,其发展是持续 的.新技术的应用以及不断出现的新的食 品污染物将不断推动行
