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1、实验三 水中细菌总 数的测定一.实验目的:n1.学习水样的采取方法和水样细菌 总数测定的方法;n2.了解水源水的平板菌落计数的原 则。二.实验原理:n本实验应用平板菌落计数技术测定水中细 菌总数。n由于水中细菌种类繁多,它们对营养和其 他生长条件的要求差别很大,不可能找到 一种培养基在一种条件下,使水中所有的 细菌均能生长繁殖,因此,以一定的培养 基平板上生长出来的菌落,计算出水中细 菌总数仅是一种近似值。n目前一般是采用肉膏蛋白胨琼脂培养基。n本实验以普通肉膏蛋白胨琼脂 培养基,采用平板菌落计数技 术来分别测定自来水和河水中 的细菌总数。三、实验操作n1.水体取样:n 应取距水面1015cm
2、的深层水样。先将灭菌 的带玻璃塞瓶,瓶口向下浸入水中,然后翻转 过来,除去玻璃塞,水立即流入瓶中,盛满后 ,将瓶塞盖好,再从水中取出。n2. 自来水取样:n 打开自来水龙头,让水流流出1min左右,用 烧杯接取自来水。n3. 将河水水样分别稀释成10-1、10-2、10-3三个连 续稀释浓度(注意:在稀释前后一定要充分混 匀)、自来水样不稀释。注意:河水样的稀释,取1个灭菌空试管,加入 9mL灭菌水。用取过灭菌水的移液管取1mL河 水样,放入试管中,振荡试管混合均匀。n4.涂布平板法:l1.加热已经配制好的固体培养基(肉膏蛋白胨 琼脂培养基),使固体培养基溶化。l2.倒制平板:每个空平皿中倒约
3、20mL的培养基 ,放置桌面待其凝固。l3.用移液管吸取0.1mL水样,滴于平板中;将玻 璃涂布棒于酒精灯的外焰上加热,杀死表面微 生物,然后耐心待其冷却,然后用涂布棒将水 滴均匀的涂满整个平板表面,尽量将水涂干。n5. 倒置于37度培养箱中培养24h。n6.菌落计数:l 1.挑取无片状菌苔生长的平板作为计数平板,若片状 菌苔的大小不到平板的一半,而其余的一半菌落分布 很均匀时,可将此一半的菌落数乘2以代表全平板的 菌落数。l 2.选择平均菌落数在30300之间的平板来计算该水 样的菌落总数。如果所有的平板的菌落总数都不在30 300范围之内,则取最靠近30300的平板进行计数l 3. 如果有两个稀释浓度的总菌落数落在了30300范 围之内,则先计算两个浓度下每ml水体中细菌总数, 如果两个数值的比值大于2则取小的浓度,如若小于2 则取两值的平均值。