水中细菌总数的测定

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1、实验三 水中细菌总 数的测定一.实验目的：n1.学习水样的采取方法和水样细菌 总数测定的方法；n2.了解水源水的平板菌落计数的原 则。二.实验原理：n本实验应用平板菌落计数技术测定水中细 菌总数。n由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其 他生长条件的要求差别很大，不可能找到 一种培养基在一种条件下，使水中所有的 细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养 基平板上生长出来的菌落，计算出水中细 菌总数仅是一种近似值。n目前一般是采用肉膏蛋白胨琼脂培养基。n本实验以普通肉膏蛋白胨琼脂 培养基，采用平板菌落计数技 术来分别测定自来水和河水中 的细菌总数。三、实验操作n1.水体取样：n 应取距水面1015cm

2、的深层水样。先将灭菌 的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转 过来，除去玻璃塞，水立即流入瓶中，盛满后 ，将瓶塞盖好，再从水中取出。n2. 自来水取样：n 打开自来水龙头，让水流流出1min左右，用 烧杯接取自来水。n3. 将河水水样分别稀释成10-1、10-2、10-3三个连 续稀释浓度（注意：在稀释前后一定要充分混 匀）、自来水样不稀释。注意：河水样的稀释，取1个灭菌空试管，加入 9mL灭菌水。用取过灭菌水的移液管取1mL河 水样，放入试管中，振荡试管混合均匀。n4.涂布平板法：l1.加热已经配制好的固体培养基（肉膏蛋白胨 琼脂培养基），使固体培养基溶化。l2.倒制平板：每个空平皿中倒约

3、20mL的培养基 ，放置桌面待其凝固。l3.用移液管吸取0.1mL水样，滴于平板中；将玻 璃涂布棒于酒精灯的外焰上加热，杀死表面微 生物，然后耐心待其冷却，然后用涂布棒将水 滴均匀的涂满整个平板表面，尽量将水涂干。n5. 倒置于37度培养箱中培养24h。n6.菌落计数：l 1.挑取无片状菌苔生长的平板作为计数平板，若片状 菌苔的大小不到平板的一半，而其余的一半菌落分布 很均匀时，可将此一半的菌落数乘2以代表全平板的 菌落数。l 2.选择平均菌落数在30300之间的平板来计算该水 样的菌落总数。如果所有的平板的菌落总数都不在30 300范围之内，则取最靠近30300的平板进行计数l 3. 如果有两个稀释浓度的总菌落数落在了30300范 围之内，则先计算两个浓度下每ml水体中细菌总数， 如果两个数值的比值大于2则取小的浓度，如若小于2 则取两值的平均值。