微生物的实验室培养ppt课件

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1、一、微生物的实验室培养1培养基(1)培养基即人们按照 ，配制出供其生长繁殖的基质。(2)按物理状态，可将培养基划分为 培养基和 培养基(如琼脂培养基)。(3)培养基一般都含有的成分是： ，在此基础上还需满足微生物生长对的需求。微生物对营养物质的不同需求液体固体水、碳源、氮源和无机盐pH、特殊营养物质及氧气2消毒和灭菌项项目消毒灭灭菌条件使用 的理化方法使用 的理化因素结结果杀杀死物体表面或内部杀杀死物体内外较为较为 温和强烈一部分对对人体有害的微生物(不包括芽孢孢和孢孢子)所有的微生物，包括芽孢孢和孢孢子项项目消毒灭灭菌适用实验实验 操作的空间间、操作者的衣着和手培养器皿、接种用具和培养基等常

2、用方法消毒法， 消毒法，酒精、氯氯气、石炭酸等化学试剂试剂 消毒法灭灭菌、 灭灭菌、 灭灭菌煮沸巴氏灼烧烧干热热高压压蒸汽3大肠杆菌纯化及菌种保藏(1)制备牛肉膏蛋白胨培养基的步骤为：称量溶化 (2)微生物纯化的原理及方法：原理：在 培养基上将细菌稀释或分散成 ，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。方法： ，要求无菌操作。计算灭菌固体单个细胞倒平板平板划线法、稀释涂布平板法(3)菌种保藏：短期保存： 上4保藏，缺点是菌种易被污染或产生变异。长期保存：采用 20冷冻箱中保藏。固体斜面培养基甘油管藏法二、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(1)分离原理：土壤中细菌之所以能分解尿素，是

3、由于它们能合成 ，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起 作用。使用以 为唯一氮源的培养基能促进 的细菌的生长和繁殖，并抑制或阻止其他微生物的生长，从而分离出目的菌。脲酶催化尿素分解尿素(2)统计菌落数目：统计样品中的活菌一般用。(3)实验流程：土壤取样 微生物的培养与观察细菌的计数。稀释涂布平板法制备培养基返回元贝驾考 http:/ 元贝驾考2016科目一 科目 四驾考宝典网 http:/ 驾考宝典2016科目一 科目四三、分解纤维素的微生物的分离1纤维素酶的组成及作用(1)组成：一种 酶，它至少包括三种组分，即。(2)作用：复合C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶纤维二糖 葡萄糖2筛选方法(1)方法

4、： 法，即通过是否产生 来筛选纤维素分解菌。(2)培养基：是以 为唯一碳源的选择培养基。3筛选流程土壤取样 将样品涂布到的培养基上挑选 的菌落。刚果红染色透明圈纤维素粉选择培养梯度稀释鉴别纤维素分解菌产生透明圈考点一微生物的营养与纯化考情解读读微生物的营营养、培养基的类类型与功能、培养基对对微生物的选择选择 作用及培养基的制备备和微生物的纯纯化与培养是近年高考中生物技术实术实 践内容的主要题题源，考查频查频 率高，题题目灵活，内容丰富。预计预计 2013年可能会结结合微生物的分离与计计数予以考查查。做一题例1 如下所示为培养某种微生物的培养基的配方，请回答：成分含量NaNO3K2HPO4KCl

5、MgSO47H2OFeSO4(CH2O)H2O青霉素3 g1 g05 g05 g001 g30 g1 000 mL01万单单位(1)依物理状态，该培养基属于_培养基；依用途划分，则属于_培养基。(2)根据培养基的配方可判断出，该培养基所培养微生物的同化作用的类型是_，培养的微生物可能是_。(3)该培养基中的碳源是_。不论何种培养基，在各成分都溶化后分装前，要进行的是_和_；倒平板时，一般需冷却至_左右，并且要在_附近操作。(4)若用该培养液培养纤维素分解菌，应除去的物质是_，至少应加入的物质是_，为检测纤维素分解菌的存在与否还应加入_，形成_色复合物，若产生_，则证明有纤维素分解菌存在。解析

6、(1)从培养基成分看，没有琼脂等凝固剂，属于液体培养基；从用途上分析，加入青霉素可以杀死细菌、放线菌，选择出霉菌、酵母菌等属于选择培养基。(2)该生物以培养基中的(CH2O)作碳源，为异养型微生物。(3)考查微生物培养的基本操作。(4)培养纤维素分解菌，是以纤维素作碳源，故应去除(CH2O)；培养细菌应去除能杀灭细菌的青霉素。可用刚果红与纤维素形成红色复合物，检测纤维素分解菌的存在。若存在，菌落周围会形成透明圈。答案 (1)液体 选择(2)异养型 酵母菌或霉菌(3)(CH2O) 调整pH 灭菌 50 酒精灯火焰(4)青霉素和(CH2O) 琼脂和纤维素粉 刚果红 红 透明圈链一串1微生物的营养营

7、营养要素含义义作用主要来源碳源凡能提供所需碳元素的物质质构成生物体细细胞的物质质和一些代谢产谢产 物，有些是异养生物的能源物质质无机化合物：CO2、NaHCO3；有机化合物：糖类类、脂肪酸、花生饼饼粉、石油等营营养要素含义义作用主要来源氮源凡能提供所需氮元素的物质质合成蛋白质质、核酸以及含氮的代谢产谢产 物无机化合物：N2、NH3、铵盐铵盐 、硝酸盐盐；有机物化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨胨等营营养要素含义义作用主要来源生长长因子生长长必不可少的微量有机物酶和核酸的组组成成分维维生素、氨基酸、碱基等水和无机盐盐水不仅仅是优优良溶剂剂，而且可维维持生物大分子的稳稳定；无机盐盐是细细胞内成分和调节调

8、节 物质质外界摄摄入关键一点 微生物之所以需要补充生长因子，是由于其体内缺乏合成这些物质所需要的酶或合成能力有限，而对那些合成能力足以满足自身需求的微生物，其培养基中则不需额外补充生长因子。2培养基的类型划分标标准培养基种类类特点用途状态态液体培养基不加凝固剂剂工业业生产产固体培养基加凝固剂剂，如琼琼脂微生物分离、鉴鉴定等划分标标准培养基种类类特点用途用途选择选择培养基培养基中加入某种化学物质质，用来抑制不需要的微生物的生长长，促进进所需要的微生物的生长长培养和分离出特定微生物(如分离酵母菌和霉菌，可以在培养基中加入青霉素)划分标标准培养基种类类特点用途用途鉴别鉴别培养基根据微生物的代谢谢特点

9、，在培养基中加入某种指示剂剂或化学药药品鉴别鉴别 不同种类类的微生物，如用伊红红美蓝蓝培养基鉴别饮鉴别饮 用水或乳制品中是否含有大肠肠杆菌(若有，则则菌落呈深紫色并带带有金属光泽泽)3平板划线法的注意事项(1)第一次划线及每次划线之前都需灼烧接种环进行灭菌，划线操作结束仍需灼烧接种环，每次灼烧目的如下表：第一次灼烧烧每次划线线之前灼烧烧划线结线结 束后灼烧烧目的避免接种环环上可能存在的微生物污污染培养物杀杀死上次划线结线结 束后接种环环上残留的菌种，保证证每次划线线的菌种都来自上次划线线的末端杀杀死接种环环上残留的菌种，避免细细菌污污染环环境和感染操作者(2)灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌

10、液，以免因温度太高杀死菌种。(3)划线时最后一区域不要与第一区域相连。(4)划线用力要大小适当，防止用力过大将培养基划破。通一类1右图是微生物平板划线示意图。划线的顺序为12345。下列操作方法正确的是( )A只需操作前将接种环放在火焰旁灼烧灭菌即可B划线操作需在火焰上进行C在5区域中才可以得到所需菌落D在12345区域中画线前后都要对接种环灭菌解析：操作的前后都要对接种环进行灭菌。划线操作需在火焰旁进行，而不是在火焰上；所有的划线区都有可能得到所需菌落，只是5区得到的菌落相对较纯。答案： D考点二目标微生物的筛选与培养考情解读读目标标微生物的筛选筛选 是微生物应应用的前提，相关技术术广泛应应

11、用于微生物实验实验 室培养及发发酵工业业生产实产实 践中，本考点也常作为热为热 点内容呈现现在各地高考试试卷中，考查查点着重于选择选择 培养基的制备备、目标标微生物的分离流程、对对照实验实验的设设置等，2013年备备考应应格外关注。做一题例2 从自然菌样筛选较理想生产菌种的一般步骤是：采集菌样富集培养纯种分离性能测定。(1)不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是从合适的环境中采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯化。培养嗜盐菌的菌样应从 _ 环境中采集。(2)富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件，使其数量大大增加，从而分离出所需微生物的培养方法。对产耐高温淀粉酶微生

12、物的富集培养应选择 _ 的培养基，并在 _ 条件下培养。(3)下面两图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图解，请分析接种的具体方法。获得图A效果的接种方法是 _ ，获得图B效果的接种方法是 _ 。(4)配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行 _，接种前要进行_ ，在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在 _ 条件下进行。解析 (1)嗜盐菌就生活在高盐环境中，如海滩等环境。(2)耐高温淀粉酶应存在于以淀粉为唯一碳源且在高温环境中生存的微生物体内。(3)从菌落分布的特点可以看出，A纯化微生物的接种方法是稀释涂布平板法，B纯化微生物的接种方法是平板划线法。(4)培养基配制时应先溶

13、化，再调整pH值，然后灭菌。答案 (1)海滩等高盐 (2)以淀粉为唯一碳源 高温 (3)稀释涂布平板法 平板划线法(4)pH调整 高压蒸汽灭菌 无菌链一串1几种典型微生物的筛选方法(1)培养基中加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌。(2)培养基中加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。(3)培养基中缺乏氮源时，可以分离固氮微生物，因为非固氮微生物不能在此培养基上生存。(4)当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也具有分离效果。如当石油是唯一碳源时，可以抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，达到分离能消除石油污染的微生物的目的。(5)改变微生物的培养条件，也可以达到分离微生物的

14、目的，如将培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物。2微生物筛选过程中必要的两种对照培养基及其作用对对照组组作用现现象结论结论未接种培养基有无杂杂菌污污染的判断未接种的培养皿中无菌落生长长未被杂杂菌污污染接种的牛肉膏蛋白胨胨培养基选择选择 培养基筛选筛选 作用的确认认牛肉膏培养基上的菌落数大于选择选择 培养基上的数目选择选择 培养基具有筛选筛选作用关键一点 即使使用了选择培养基，所得到的微生物也未必全为“目标微生物”，因此，常需对选择培养基中菌落作进一步鉴定。通一类2下表为培养某种微生物的培养基配方，下列相关叙述错误的是 ( )成分NaNO3K2HPO4KClMgSO47H2OFeSO4(CH2O)H2O青霉素含量3 g1 g0.5 g0.5 g0.01 g30 g1 000 mL0.1万单单位A依物理性质划分，该培养基属于液体培养基B依用途划分，该培养基属于选择培养基C培养基中的唯一碳源是(CH2O)，唯 一氮源是NaNO3D若用该培养基培养纤维素分解菌，则应除去(CH2O)，再添加纤维素解析：由于配方中没有琼脂，所以从物理性质上划分为液体培养基；由于配方中含有青霉素，对微生物有一定的筛选作用，所以从用途上划分为选择培养基；由于培养基中含有青霉素，纤维素分解菌不能生存，除去(CH2O)外，还应除去青霉素，同时添加纤维素和琼