第四节 钩端螺旋体病简称钩体病，是由致病性钩体引起的一 种重要人畜共患病和自然疫源性传染病 家畜中主要发生于猪，其次是牛、犬 、马、羊，临诊表现多样，主要有发热 、黄疸、血红蛋白尿、出血性素质，流 产、皮肤及粘膜坏死，水肿等但大多 数病畜都呈隐性感染，缺乏明显临床症 状第一章第一章多种动物共患细多种动物共患细 菌病菌病一、病原 钩端螺旋体病1、分类：钩体目前公认的只有一个 种，再根据物生物学特点不同，可 分为两大群：（1）双曲钩体，为非致病性或腐生 性钩体2）问号状钩体，为致病性钩体； 2、形态特点：钩体形态纤细，螺旋整 齐而致密，一端或两端弯曲如钩， 不易为普通细菌染色剂着色，常用 镀银染色和姬姆萨染色法，最容易 观察的方法是将活菌置暗视野显微 镜下观察，可见钩体象一串发亮的 微细珠粒，运动活泼而特殊，沿长 轴方向旋转，旋转时两端柔软，中 段僵硬，由此可确认n姬姆萨染色n 姬姆萨染液（天青色素、伊红、次甲蓝的混合液 ）的染色法 n 染前用蛋白酶等进行处理，然后再用姬姆萨染液 染色，在染色体上，可以出现不同浓淡的横纹样着色 n 初染剂结晶紫进行初染，再用碘液媒染，然后用 乙醇(或丙酮)脱色，最后用复染剂(如番红)复染。
经 此方法染色后，细胞保留初染剂蓝紫色的细菌为革兰 氏阳性菌；如果细胞中 n姬姆萨染色n初染剂被脱色剂洗脱而使细菌染上复染剂的颜色(红色 )，该菌属于革兰氏阴性菌 n 革兰氏染色法所以能将细菌分为革兰氏阳性和革 兰氏阴性，是由这菌形态n 4．培养：对营养要求不严格，但初次 分离的菌株需用要含兔血清的培养基， 最常用的为柯索夫氏和希夫纳氏培养基 在人工培养基上生长较一般细菌为慢 ，如在上述培养基上，置28-30℃需5-7 天，最长在一月以上才能生长良好，此 时液体呈半透明、云雾状混浊，（1%） 琼脂固体培养基上，有些菌株生长不好 n钩端螺旋体培养基一柯少夫（Korthof ）培 养基 [配法]n蛋白胨400mg ，氯化钠700mg ，碳酸氢钠 10mg，氯化钾20mg，氯化钙20mg，磷酸二 氢钾120mg，磷酸氢二钠44Omg ，蒸馏水 500ml，无菌兔血清（灭活）8-10mln将各成分溶于蒸馏水内煮沸20min ，以滤纸 滤，调至pH 为7.2 ，分装烧瓶内每瓶100ml ，121℃ 灭菌20min ; 无菌采取兔心血分离 血清，置56 ℃ 水浴箱中30min以破坏补体； 上述蛋白胨盐溶液每100ml中加入无菌兔血 清8-10ml；混合后，用无菌分装中号试管中 ，每管5ml；置56 ℃ 水浴箱30min ; 37℃ 温 箱中孵育2 天，剔去污染者。
n注：n为防止污染，每100ml培养基可加50mg磺胺嘧啶 钠n为了促进钩端螺旋体生长，可于该培养基中加入 维生素Bl2 及烟酸（各1 mg／100ml），并将兔 血清量自8％减至5 % ，培养基中不加氯化钙， （因氯化钙对生长无作用，且常形成沉淀物）， 再以100 ℃ 加热30min 用此法制得培养基清 晰，无任何沉淀n4．实验动物：以50-60g金地鼠和100- 200g豚鼠最敏感n5．抵抗力：对理化（如日光、高温、干 燥，酸碱、一般消毒剂、抗生素）很敏 感，但对低温抵抗力较强，如可在-20℃ 可存活100天，但在中性到偏弱碱性（ pH7.0-7.6）较适宜，可在pH 7.2-7.4水 中生存1-2月，弱碱性湿土中生存达279 天，这在流行病学上有一定意义二、流行病学n 几乎所有温血动物都可感染钩体流行病学 上意义最大的是鼠、猪、犬、蛙；动物种类 带菌率 带菌时间 黑线鼠 14.6-28.0% 黄胸鼠 2.4-4.8% 1-2年，甚至终身 黄毛鼠 8.1-34.6% 猪（但放养猪） 5-7% （45.9%） 371天犬 高 700天蛙 46天 不详n主要以消化道、还可通过交配、 损伤皮肤粘膜、乳汁、精液、尿 分别传给仔猪、母猪，也可以吸 血昆虫传播，有明显季节性（7- 10月为高峰）。
三、症状猪：主要菌型是波摩那，出血性黄疸和犬型三 种；居于症状首位的是流产及新生仔猪多数归于死 亡妊娠母猪感染后1-4周流产，常为死胎或弱胎 ， 产后不久即死亡流产率可高达半数以上产木 乃伊胎是本病与其它细菌子宫感染区别之一；哺乳、断奶前后小猪，初似感冒，腹泻，后出 现结膜炎（图4）、皮肤黄染（图3）、贫血、头颈 或全身水肿（图2），尿色深黄色 ，茶尿病死率很 高，架子猪可见体温升高，耳、尾尖皮肤坏死图2下颔水肿图3病猪全身黄胆和水肿图4眼炎n牛：最初发热、鼻镜干燥、龟裂，皮 肤粘膜黄染、贫血，随之出现血红蛋 白尿，产乳量下降，乳色变黄，浓如 初乳并含有血凝块；n 还可见脑炎型：出现兴奋不安，冲 向障碍物，自行撞伤，有的运动失常 、转圈运动n 妊畜流产n 马：体温升高，出血，黄疸皮肤干裂、坏 死，血红蛋白尿，妊娠马流产；也有报道脑膜脑炎型；周期性眼炎：多半两眼同时受害，病马常失明 n 犬：以犬型最多见，发热、黄疸，厌食呕吐 ，腹泻，齿龈口粘膜常见到小溃疡、扁桃体炎 ，呼出恶臭气体，许多犬表现腹壁紧张，同时 肾区有压痛 五、病变n急性病例，主要为黄疸、出血，血红蛋白 尿、肝肾损害，慢性或轻型病例，则以肾 的变化为突出 。
皮肤、皮下、粘膜、浆膜 ，脏器表面有出血、黄疸，胸腔有黄色积 液，膀胱积有血红蛋白尿或浓茶样尿，肝 肿大，棕黄色，肾肿大淤血，慢性者有散 在灰白色病灶，有的皮肤坏死，有的还在 身体各部，（头、颈、背、胃壁）等处出 现水肿六、诊断n 1．微生物学检查：发热期、未出现 黄疸前，采取血液，发病中后期用尿 液（脊髓液不常用），要求在发病后 6-10天，死后立即采取（不超过1-3 小时，）肝、肾、脾、脑等组织，进 行处理后，作暗视野检查或荧光抗体 染色镜检，病理组织可用姬姆萨染色 或镀银染色后检查n２．分离培养：上述材料接种柯索夫 氏培养基（需灭活的兔血清），28- 30℃培养，每隔5-7天，需作一次检 查，一般7—20天内开始生长，有时 在1-3月才出现，镜检阳性者要及时 传代，适应后可2个月传代一次，若 需保存毒力，需用动物和培养基交替 传代，个别钩体在常用培养基不生长 ，兼用动物接种分离更好n3．动物接种：采用幼龄豚鼠或地鼠 ，腹腔接种被检材料2-3ml，隔离饲 养观察，污水和尿可用浸泡感染法， 动物感染后3-14日发病，应于发热时 采取心血检查，或濒死前剖检，观察 病变并取肾、肝组织盲传三代。
4．血清学诊断 ：①凝溶试验：本试验适于钩体病诊断和菌型鉴定 一般先定性（初筛），将血清作低倍稀释，查明 被检血清是否有钩体抗体及群别，后定量，即将血 清作进一步稀释，测定凝溶效价及型别，作出诊断 ②补反：血清效价在1：20以上有诊断价值，本 试验所用抗原具有属特异性，阳性结果只能证明是 钩体感染，不能定型，故常用于流行病学调查（感 染3天即出现，4周达高峰，持续一年）n钩端螺旋体的显微镜凝集（显凝）实验n【原理】 钩端螺旋体显凝实验是一种血清学反 应，可用已知的抗原（标准菌株）来测定患者 血清中的未知抗体及其效价来进行辅助诊断； 也可用已知的抗体（标准免疫血清）来鉴定未 知菌株的型别作血清学鉴定钩体运动活泼， 在暗视野显微镜下，明显可见，若遇到相应抗 体时可发生凝集如血清中的补体未灭活，时 间过久出现凝集的钩体发生溶解，则为钩体的 凝（集）溶（解）实验 n【材料】 1、抗原的选择和制备：将我国15群15型钩端 螺旋体代表株接种于：Korthof培养液中， 28℃培养5—7天，暗视野显微镜检查，暗视 野显微镜400倍观察每视野下不少于50条，运 动活泼且无 自凝者可作显凝抗原 2、钩体免疫血清（家兔免疫血清）做血清学 诊断时用疑似患者的血清。
3、1ml无菌吸管、无菌试管、清洁载玻片及 盖玻片、0.9%氯化钠溶液、塑料凹孔板、24 —28℃温箱 n【方法】 1、用0.95氯化钠溶液将钩端螺旋体免疫血清 自1:50开始，做50倍系列稀释，直到1:1600 2、取各稀释度免疫血清0.1ml分别加入塑料 凹孔板中，最后1孔加0.1ml0.9%氯化钠溶液 作对照 3、每孔加0.1ml钩端螺旋体纯培养物，摇匀 ，置28—30℃温箱 4、2小时后用接种环 自各孔中取1—2环于载 玻片上，置暗视野显微镜下观察 n【结果】 先观察阴性对照孔，该孔如出现凝集则实 验失败该孔无凝集时方能观察实验孔，根据凝集程 度以“+”记录结果，结果判定参照如下标准进行 -：完全无凝集，与对照管相同 +：25% 以上钩端螺旋体凝集呈小蜘蛛状，大多数游 离且运动活泼 + +：50%以上钩端螺旋体凝集呈蜘蛛状，约有半数 未凝集 + + +：75%以上钩端螺旋体凝集呈蜘蛛状，其间有 少数游离 + + + +：几乎全部钩端螺旋体凝集呈巨大蜘蛛状， 偶见极少数游离钩端螺旋体存在 效价判定：出现“+ +”的血清最高稀释度（终末稀 释度———加入等量抗原后的稀释度）为该血清的凝 集效价。
测定患者血清时，单份血清效价1：300以上 有诊断意义，双份血清呈4倍以上升高时，更有诊断 价值 补体结合反应原理：在补体参与下，以绵羊红 细胞和溶血素（红细胞相应抗体）为指示系 统的抗原抗体反应此反应包括两个系统，5 种成分一是被检系统，即已知的抗体（或 抗原）和被检的抗原（或抗体）；另一个是 指示系统，包括绵羊红细胞和溶血素，以及 补体成分补体用豚鼠新鲜血清实验方法 是先将被检系统的抗原、抗体及补体放入试 管中，作用一定时间后，再加入指示系统， 继续作用一定时间后，观察结果n ③间接凝集（炭凝集、间接血凝、乳胶凝集等）利 用钩体属特异性抗原吸附于载体颗粒上，使之成为 致敏颗粒抗原，当与被检血清中相应抗体相遇时， 则出现肉眼可见的凝集现象，其方法简便迅速，准 确性强④ELISA、荧光抗体法：检出率高，且有早期诊断的 优点，有条件单位可试用⑤多价菌苗紧急接种诊断，用人用的3-5价菌苗作紧 急接种，两周后新病例停止出现，既具有诊断效果 ，也具有治疗效果七、防制1.做好防鼠、灭鼠和家畜管理工作，消除带 菌、排菌的各种动物；清理污染的水源，污 水、淤泥、牧地，饲养场、舍，用具，以防 扩散传染。
2.选用与当地流行菌型一致的菌苗预防接种 ，或使用多价浓缩菌苗预防，接种应在本病 流行前一月完成，中草药：穿心莲、板蓝天 根、金银花、土茯苓，千里光，大青叶有一 定预防效果n3.治疗：急、亚急性抗菌素疗效不佳，可结合 保肝、强心利尿，可用高免血清或多价 苗试治，慢性、带菌者可用土霉素、四 环素、链霉素等药物治疗 。