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1、医学实验室生物安全w本标准规定了微生物和生物医学实验室生物安全防护的基本原则、实验室的分级、各级实验室的基本要求。本标准为最低要求。w本标准适用于疾病预防控制机构、医疗保健、科研机构。总则定 义w实验室生物安全防护：实验室工作人员所处 理的实验对象含有致病的微生物及其毒素时， 通过在实验室设计建造、使用个体防护装置、 严格遵从标准化的工作及操作程序和规程等方 面采取综合措施，确保实验室工作人员不受实 验对象侵染，确保周围环境不受其污染。当建设使用传染性或有潜在传染性材料的实验室前，必须 进行微生物危害评估。应依据传染性微生物致病能力的程度、 传播途径、稳定性、感染剂量、操作时的浓度和规模、实验
2、对象的来源、是否有动物实验数据、是否有有效的预防和治疗方 法等诸因素进行微生物危害评估。w通过微生物危害评估确定对象微生物应在哪一级的生物安 全防护实验室中进行操作w根据危害评估结果，制定相应的操作规程、实验室管理制度和紧急事故处理办法，必须形成书面文件并严格遵守执行。微生物危害评估w第一类，不引起健康成年人疾病w第二类，可通过破损皮肤、消化道及粘膜暴露等方 式引起人类疾病w第三类，本土或外来的微生物，通过吸入途径暴露 时可以造成严重或潜在致死性疾病w第四类，可以引起严重且威胁生命的人类疾病，可 通过气溶胶传播，或相关的传播危险性不明的微生物w生物安全防护实验室根据不同的微生物和防护要求 分为
3、四个生物安全防护级别。美国CDC/NIH对微生物指导性分类Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 4th Edition, May 1999 实验室生物安全防护的基本原则w实验室生物安全防护的内容包括安全设备、个体防护装 置和措施（一级屏障），实验室的特殊设计和建设要求（二 级屏障），严格的管理制度和标准化的操作程序及规程。w应将每一特定实验室从立项、建设到使用维护的全过程 中有关生物安全防护综合措施的内容编入各实验室的生物安 全手册中。必须设有专职的生物安全负责人。w生物安全防护实验室根据不同的微生物和防护要求分为 四
4、个生物安全防护级别。w安全设备和个体防护是确保实 验室工作人员不与致病微生物及 其毒素直接接触的一级屏障。w生物安全柜是最重要的安全设备，形成最主要的防护屏障。实验室应按要求分别配备、级生物安全柜。所有可能使致病微生物及其毒素溅出或产生气溶胶的操作，除实际上不可实施外，都必须在生物安全柜内进行。不得用超净工作台代替生物安全柜。安全设备和个体防护（一级屏障 ）w必要时实验室应配备其它安全设备，如设置配有排风净化装置的排气罩等，或采用其它不使致病微生物逸出确保安全的设备。w实验室所配备的离心机应在生物安全柜或其它安全设备中使用，否则必须使用安全密封的专用离心杯。w必须给实验室工作人员配备必要的个体
5、防护用品，如个人防护服、防毒面具、安全眼镜或眼罩。安全设备和个体防护（一级屏障 ）生物安全柜（biosafety cabinet）处理危险性微生物时所用的箱型空气净化 安全装置。 I类生物安全柜（class I biosafety cabinet ）至少装置一个高效空气过滤器对排气进行净 化，工作时柜正面玻璃推拉窗打开一半，上部为 观察窗，下部为操作窗口。外部空气由操作窗吸 进，而不可能由操作窗口逸出。工作状态时保证 工作人员不受侵害，但不保证实验对象不受污染 。生物安全柜类生物安全柜 （class biosafety cabinet）至少装置一个高效空气过滤器对排气进行 净化，工作空间为经高
6、效过滤器净化的无涡流的单 向流空气。工作时柜正面玻璃推拉窗打开一半，上 部为观察窗，下部为操作窗口。外部空气由操作窗 吸进，而不可能由操作窗口逸出。工作状态下遵守 操作规程时既保证工作人员不受侵害，又保证实验 对象不受污染。三、CLASS II 二级生物安全柜CLASS II 级生物安全柜根据结构以及气流分配不同主要是外排气流不同分为：A型:（30%排在室内 ）B型: B1 （70%接管道外排）B2 （100%接管道外排） B3 （30% 接管道外排）CLASS II A 生物安全柜 由向下的气流和从开口处向 内进入的气流混合后部分经 HEPA高效过滤形成向下的气 流进入工作区，部分（30%气
7、 流）经HEPA过滤后外排在室 内； 允许经HEPA过滤的外排气 流在实验室内排放；CLASS II B1生物安全柜 经过HEPA高效过滤 的向下气流大部分由未经污 染的向内进入的气流和循环 气流组成 大部分被污染的向下的 气流（70%）通过专用的管 道经HEPA过滤后接管道外 排至室外；CLASS II B2生物安全柜 来自实验室内或室外的经过HEPA 过滤的向下气流 （即：向下的气流中没 有在安全柜内循环的气流）； 所有向内进入的气流和向下的气流 均通过HEPA过滤后排到室外而不在柜 内循环，也不能排入实验室；100%接 管道外排。 所有的被污染的管道和气流通道都 在负压状态下或被直接外排
8、的负 压管道 或气流管道所包围。 。 3.3CLASS II B3生物安全柜 经过HEPA过滤后的向下气流 是由共用外排风道中的向下的气 流和内向气流组成； 全部外排到室外的气流 （30%）均经过HEPA高效过滤 它与CLASS II A型气流方向相 同，但与CLASS A型不同的是， 它30%外排气是接管道排到室外 的。 类生物安全柜（class biosafety cabinet）至少装置一个高效空气过滤器对排气进行净化，工作空间为经高效过滤器净化的无涡流的单向流空气。正面上部为观察窗，下部手套箱式操作口。箱内对外界保持负压可确保人体与柜内物品完全隔绝。CLASS III生物安全柜 全封闭
9、的、气密结构的通风柜 通过与柜体联结的橡胶手套进 行操作；柜内保持至少120Pa的负 压(0.50wg)；供气通过HEPA抽入 内；外排的气流经过双层HEPA过 滤或经HEPA后再经燃烧处理。管理制度实验室内设置和准入w在主实验室内应合理设置清洁区、半污染区和污 染区w非实验有关人员和物品不得进入实验室w实验室工作人员、外来合作者、进修和学习人员 在进入实验室及其岗位之前必须经过实验室主任的批 准实验室工作人员资格和培训w实验室的工作人员必须是受过专业教育的技 术人员。在独立工作前须在中高级实验技术人员 指导下进行上岗培训，达到合格标准，方可开始 工作w实验室的工作人员必须被告知实验室工作的
10、潜在危险并接受实验室安全教育，自愿从事实验 室工作w实验室的工作人员必须遵守实验室的所有制 度、规定和操作规程实验室特殊管理w对可能的危险因素，制定保证安全的工作程序w事前进行有效的培训和模拟训练w对于意外事故要能够提供包括紧急救助或专业 性保健治疗的措施，足以应付紧急情况w实验室事故处理及上报w实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对健康成年人已知无致病作用的微生物，如用于教学的普通微生物实验室等。w包含微生物举例大肠杆菌 格鲁伯耐格里原虫感染性犬肝炎病毒 枯草杆菌一级生物安全防护实验室w实验室应设洗手池（靠近出口处 ）w实验室围护结构内表面应易于清 洁。地面应防滑、无缝隙，不得铺设
11、 地毯w实验室中的家具应牢固。应有专 门放置生物废弃物容器的台（架）w实验台表面应不透水，耐腐蚀、 耐热w实验室如有可开启的窗户，应设 置纱窗一级生物安全防护实验室实验室设计及建造w工作过程中禁止非工 作人员进入实验室。w接触微生物或含有微 生物的物品后，脱掉手套 后和离开实验室前要洗手w禁止在工作区饮食、 吸烟、处理隐形眼镜、化 妆及存储食物一级生物安全防护实验室标准微生物操作规程w使用机械移液器吸取液体，禁止 口吸w制定尖锐器具的安全操作规程w按照实验室安全规程操作，降低 溅出和气溶胶的产生w每天至少消毒一次工作台面，活 性物质溅出后要随时消毒w所有培养物、废弃物在运出实验 室前须进行灭活
12、（如高压）。需运出 实验室灭活的物品必须放在专用密闭 容器内。一级生物安全防护实验室标准微生物操作规程一级生物安全防护实验室安全设施和个体防 护w一般无须使用生物安全柜等专用安全设备w工作人员在实验室应穿工作 服，带防护眼镜w工作人员手上有皮肤破损或 皮疹时应戴手套n实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对人或环境具有中等潜在危害的微生物。n包含微生物举例麻疹病毒 沙门氏菌 乙型肝炎病毒 HIV 血清学检测衣原体 志贺氏菌二级生物安全防护实验室w设计和建造的特殊要求消毒设施（高压灭菌锅、化学消毒装置 等）洗眼装置可自动关闭的门锁门口有发光指示装置换气装置（3-4次/小时）满足一级实验室
13、 (标准微生物操作规程) 各款要求 ，在此基础上特别注意w制定出入制度w实验室人口贴上生物危险标志w制定实验室特定的生物安全操作规则w每年一次最新培训制度二级生物安全防护实验室特殊微生物操作规程生物危险级 禁止用手处理破碎的玻璃器具。二级生物安全防护实验室特殊微生物操作规程使用塑料器材代替玻璃器材。 培养基、组织、体液及其它具有 潜在危险性的废弃物须放在防漏的容器中储存、运输及消毒、灭菌v用过的针头禁止折弯、剪断、折断、重新盖帽，禁止 用手直接从注射器取下。v用过的针头必须直接放入防穿透的容器中。v非一次性利器必须放入厚壁容器中并运送到特定区域 消毒，最好进行高压消毒w工作人员应接受必要的免疫
14、接种和检测 (如乙型肝 炎疫苗，卡介苗等)w必要时收集从事危险性工作人员的本底血清严格执行实验室工作人员年度采血检测 HIV 抗体 和备案制度。每半年进行一次 HIV 抗体检测，并保留 样品对从事艾滋病实验室工作的人员，因工作中意外事 故造成HIV 职业暴露者，所在单位应负责解决抗病毒 及其它相应治疗的医疗费用二级生物安全防护实验室特殊微生物操作规程w实验设备在运出修理或维护前必须进行 消毒w人员暴露于感染性物质时，及时向实验 室负责人汇报，并记录事故经过和处理方案w禁止将无关动物带入实验室w处理以下致病微生物时应在生物安全柜 (级) 中进行 ，包括: 高浓度 大容量 有喷溅可能性w上述材料的
15、离心操作如使用密封的离心机转子或安全离心杯，且只在生物安全柜中开闭，可在实验室中进行。w级生物安全柜必须每年进行一次年度现场检测。二级生物安全防护实验室安全设施和个体防护安全设施和个体防护w当微生物的操作不可能在生物安全柜内进行时，须使用面部保护装置w应有相应的SOP二级生物安全防护实验室安全设施和个体防护n在实验室中应穿着工作服或罩衫等防护服，不得穿着外出。用过的工作服应先在实验室中消毒，然后统一洗涤 或丢弃。n当手可能接触感染材料、污染的设备时应戴手套。如可 能发生感染性材料的溢出或溅出，宜戴两副手套。不得 戴着手套离开实验室，工作完全结束后方可除去手套。 一次性手套不得清洗和再次使用。样
16、品从一个实验室转送到另外一个实验室，必须是血清或 血浆，除特殊需要外，一般不能用全血。且需置于带有盖帽的试管内，防止样品流出，试管上应有 明显的标记。清楚地标记为感染性材料（按所在生物安全防 护实验室的级别标明相同的级别）。感染性材料必须放在密闭的管子中，再放入含有足够吸水材料 的生物危险管中，以防泄漏。将试管放入专门带盖的容器内，容器 的材料要易于消毒处理，在所放试剂管周围上下均垫有软性物质， 以免破碎，容器外表有HIV检测专用字样。如果路程较远或者气候炎 热时，盛有样本的容器应至于4以下转运 样本的转送和发放生物危险级n实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于主要通过呼吸途径使人传染上严重的甚至是致死疾
