睡眠剥夺对小鼠免疫的影响

《睡眠剥夺对小鼠免疫的影响》由会员分享，可在线阅读，更多相关《睡眠剥夺对小鼠免疫的影响（19页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。

1、睡眠剥夺对小鼠 免疫能力的影响组员：杜晨阳、辛凯悦、 李毅、朱灵凤、舒文静主讲人：辛凯悦 指导老师：朱艳媚研究对象免疫功能测定研究目的讨论统计 正文 参考文献实验预期动物模型的建立睡眠剥夺对小鼠 免疫能力的影响睡眠是一种生理现象，睡眠 充足与否与人体健康有着密 切联系。长期睡眠剥夺可引 起人或动物产生不良情绪反 应、免疫功能下降等等。随 着生活节奏的加快，越来越 多的儿童与成年面临睡眠不 足的危害，这已足够引起人 们的注意。本小组通过一种 慢性不完全剥夺小鼠睡眠实 验来观察睡眠不足对小鼠免 疫功能的影响。研 究 目 的实验对象v一组：健康雄性小鼠20只，体重222g,随机 分成a组、b组，即正

2、常对照组和慢性不完全 睡眠剥夺组。v二组：健康雄性小鼠20只，体重222g,随机 分成c组、d组，即正常对照组和慢性不完全 睡眠剥夺组。v三组：健康雄性小鼠20只，体重222g,随机 分成e组、f组，即正常对照组和慢性不完全 睡眠剥夺组。动物模型的建立v采用轻触法一、二组对小鼠不完全剥夺睡眠 ，每天剥夺睡眠时间从上午六点到下午五点 结束。其中a组、c组是实验组，b组、d组是 对照组。具体方法为：当实验组小鼠出现睡 眠状姿势时，即用毛笔轻触小鼠使其保持清 醒状态，当小鼠处于清醒状态时则不对其进 行任何刺激，在睡眠剥夺过程中，正常对照 组始终可以自由睡眠。一个周睡眠剥夺后， 进行免疫功能的测定。免

3、疫功能的测定v器材：滤纸，粗剪刀，婴儿称v对象：第一组实验小鼠1.实验准备实验步骤v实验步骤：v（1）用颈椎脱臼法处死 第一组小鼠并立即称取 体液v（2）解剖摘取小鼠的胸 腺和脾脏，用滤纸吸干 残血后，称重（mg）v（3）所得重量分别除以 小鼠体重(g)，再乘以 100，即分别得到胸腺 指数和脾脏指数。v胸腺指数=（胸腺重量/ 小鼠体重）10 脾脏指数=（脾脏重量/ 小鼠体重）10组别动物数量 (n)胸腺指数 (%)脾脏指数 (%)正常对照组 （b组）10只睡眠剥夺组 (a组)10只2.外周血T淋巴细胞亚群检测v（1）两组小鼠分别自眼底静脉丛取血，肝素抗凝。 吸取抗凝全血100L，加入预先调制

4、好的FITC- CD3PE-CD4PE-Cy5-CD8 3种荧光标记抗体混合液 12L，并设置荧光同型对照。室温避光反应20min, 然后加入红细胞溶解液，每份标本加1ml，混匀，室 温避光10min,见细胞悬液呈亮红色时，说明红细胞 被裂解，再加入含20mL/LFCS的生理盐水，以400g离 心洗涤细胞2次，洗涤后的细胞最终回复到500Lv（2）将两组液体移入流式专用管，上流式细胞仪检 测3.红血球凝集实验v红血球凝集指红细胞凝集的现象 。由病毒、细胞凝集素和抗体而 引起的红细胞凝集。在病毒而引 起的凝集中，如果存在抗病毒的 抗体时，则由病毒引起的凝集作 用将被抑制，所以可用于抗病毒 抗体的

5、检出。实验准备v器材：96孔“U”形或“V”形微量反应板，50 uL 定量移液器，滴头，微型振荡器。v药品：特定病毒抗原，0.5%小鼠红细胞v对象：第二组实验小鼠v用特定病毒抗 原对两组小鼠 进行免疫，一 定的时间后抽 取小鼠血液制 成血清滴在反 应板上，用特 定病毒进行滴 加，观察血液 凝剂情况并记 录v对已经免疫的A 组小鼠进行不同 程度的睡眠剥夺 ，B组不做睡眠 剥夺，然后对实 验小鼠进行上述 血凝操作，观察 血凝情况对照组实验组96孔微量反应板的清洗将浸泡有75%乙醇的棉签放入微量反应板 的每个孔内旋转，用自来水冲洗反应板5次， 再用蒸馏水冲洗3次以上，置37温箱中干燥 。0.5%红细

6、胞制备方法v 先用灭菌注射器吸取3.8% 枸橼酸钠溶液 (其量为所需血量的1/5)，从小鼠静脉或心脏 采血至需要血量，置灭菌离心管内，加灭菌 生理盐水为抗凝血的2倍，以2000r/min离心 10min，弃上清液，再加生理盐水悬浮血球， 同上法离心沉淀，如此将红细胞洗涤三次， 最后根据所需用量，用灭菌生理盐水配成 0.5%小鼠红细胞悬液。 统计学方法v所有数据均用均数 标准差表示，各组均数 间的差异显著性用t检验判断。P0.05表示差异不 具有显著性。 参考文献v1洪军,马文龙.睡眠剥夺的对策J.第一军医大学学 报,2001,21(2):152154 2何志恒,印大中.睡眠研究的科学前沿J.生

7、命科学 研究,2002,6(4):184187 3李洋,谢扬丽,胡志安.感染和免疫反应对睡眠的影 响J.生理科学进展,2007,38(2):187190 4赵忠新.临床睡眠障碍学M.上海：第二军医大学 出版社,2003:2545 5丁琳,胡晓波.睡眠剥夺对机体的影响期刊论文.微 量元素与健康研究,2010(6)v睡眠剥夺是指由于某种原因导致的睡眠数量被迫减 少，它对机体的影响是十分明显的。它可以造成机 体疲劳、作业能力降低、免疫力下降、警觉水平降 低，并引起情绪改变、精神不振、粗心、注意力不 集中、食欲下降、记忆力下降、工作效率低等不良 反应。v不完全睡眠剥夺可导致免疫功能的下降. 机体内过

8、量的自由基可对机体产生伤害,其重要原因是产生脂 质过氧化物,造成对细胞结构和功能的破坏,从而导 致衰老和各种疾病,机体内超氧化物歧化酶(SOD) 的 功能是清除体内的氧自由基,从而对机体起到保护作 用 ,增强免疫力. 有研究表明,长期睡眠较差的人的 血清过氧化脂质明显偏高,红细胞SOD 活性明显偏低 ,从而导致机体免疫力下降.。本实验的预期结果是 慢性不完全睡眠剥夺会对小鼠的免疫器官产生伤害, 其机制可能与上述因素有关。实验预期v1.胸腺指数和脾脏指数的测定经过一段时间的慢性不完全睡眠剥夺会对 机体免疫功能产生伤害，胸腺和脾脏均会受 到损害，表现为胸腺指数和脾脏指数分别下 降。v2. 外周血T淋巴细胞亚群检测睡眠剥夺以后的小鼠体内的T细胞总数将减 少。实验组CD4 +T小宝数量没有明显变化， 而CD8 +T细胞数量均有下降，即杀伤性T细胞 数量减少，导致CD4/CD8明显增大。 v3.红血球凝集实验在反应板上可以直观地观察到：对照组红细 胞不凝集，在反应板的微孔中红细胞沉底呈 点状，经过免疫的小鼠体内产生较多的抗体 ，可以与加入的流感病毒反应而抑制鸡血红 细胞的凝集作用；实验组的红细胞凝集，在 反应板的微孔中平铺呈网状，即经过睡眠剥 夺的小鼠免疫能力会下降，产生的流感病毒 抗体减少，流感病毒与鸡血红细胞产生凝集 作用要强于对照组。谢 谢 ！