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1、1黄翅大白蚁菌圃对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的保护作用【摘要】 目的观察黄翅大白蚁菌圃(MFG)对四氯化碳(CCl4) 所致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法腹腔注射四氯化碳制备小鼠急性肝损伤模型,应用黄翅大白蚁后菌圃检测血清谷丙转氨酶(ALT) 、谷草转氨酶(AST)活性;同时测定肝组织中丙二醛 (MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD) 的活性。在光学显微镜下观察肝脏病理组织学变化。结果与四氯化碳模型组比较, 黄翅大白蚁菌圃经过大孔树脂富集后产物可使血清 ALT,AST 活性明显降低(P0.01)；同时黄翅大白蚁菌圃可使肝组织中 MDA 的含量明显下降(P0.01), SOD 活力明显增强(P0
2、.01)。形态学观察, 黄翅大白蚁菌圃能明显改善肝组织的病理学改变。结论黄翅大白蚁菌圃对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤具有保护作用。 【关键词】 黄翅大白蚁菌圃; 急性肝损伤; 四氯化碳Abstract：ObjectiveTo study the protective effects of Macrotermes barneyi Ligh Fungus garden (MFG) on acute hepatic injury induced by carbon tetrachloride (CCl4) in mice. MethodsFifty Kunming mice were randomly
3、 divided into 6 groups. The MFG groups were treated with three fractions of 2macroporous absorption resin beneficiation of MFG at a dose of 50 g kg-1 d-1 for 7 days i.g. to mice .At the same time, the normal control group and the model control group were given equivalent amount of 0.9% sodium chlori
4、de solution by the same route. And mice in the positive control group were intragastrically administered with 200 mg kg-1 d-1 biphenyl dimethyl dicarboxylate(BDD). After the last administration, all groups except the normal control were intraperitoneally injected with 0.2% CCl4 solution to induce ac
5、ute hepatic injury. Thereafter, the contents of ALT,AST in the serum, MDA and the activity of SOD in the liver were measured and the hepatic histological changes were observed by optical microscope.ResultsCompared with the model group, the contents of ALT, AST in the serum was obviously decreased (P
6、0.01) , the content of MDA in the liver was also lowered (P0.01), and the activity of SOD in the liver was markedly improved (P0.01) after preventive treatment with one fraction of macroporous absorption resin beneficiation of MFG. MFG ameliorated the hepatic pathological changes. ConclusionMFG have
7、 protective effects against acute hepatic injury induced by CCl4 in mice.3Key words：Macrotermes barneyi Ligh Fungus garden; Acute hepatic injury; Carbon tetrachloride近年来, 有关白蚁菌圃的研究日益受到重视。在国家自然科学基金会的资助下,本实验室先后对黑翅土白蚁和菌圃的化学成分及生物活性进行了研究,证明，白蚁含有丰富的氨基酸、多肽类、酚类、有机酸类、甾体、三萜和挥发油或油脂类1 ，具有免疫、抗炎、镇痛及抗衰老等主要药理作用2 。白
8、蚁菌圃是一种纯生物物质 ,且资源丰富，现代医学发现白蚁菌圃具有保肝作用，为此我们观察了黄翅大白蚁菌圃（Macrotermes barneyi Ligh Fungus garden，MFG）大孔树脂富集物对四氯化碳(CCl4)所致小鼠急性肝损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制。1 材料与仪器1.1 动物清洁级健康昆明种小鼠,雌雄各半, 体质量(202)g (江西中医学院动物实验中心, 动物合格证号 :JZDW No：2008-0113) 。室温调节在(242)，自由摄食与饮水。1.2 药品与试剂 MFG 采自江西安福，由安福白蚁防治所周投奎工程师鉴定。MFG 粗粉用 95%乙醇提取 3 次，减
9、压浓缩，采用大孔树脂进行富集，得 30%、60%和 95% 3 个梯度的乙醇溶液4洗脱物，浓缩，4保存备用 ;联苯双酯滴丸 (biphenyl dimethyl dicarboxylate,BDD, 1.5 mg250 丸,浙江医药股份有限公司新昌制药厂, 批号 :070803)；CCl4( 分析纯，天津市博迪化工有限公司),用时以精制橄榄油配制成 0.2%液备用；谷丙转氨酶(ALT) 、谷草转氨酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)测定试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。1.3 仪器紫外可见分光光度计(TU-1800S,北京普析通用仪器有限公司);高速低温离心机 (EVOL
10、UTION,美国 KENDRO 公司); 恒温水浴锅(上海益恒实验仪器有限公司) 。2 方法2.1 分组及给药昆明种小鼠 84 只,雌雄各半,将小鼠随机分成6 组, 每组 14 只。分别为正常对照组，CCl4 模型组，阳性药对照组(BDD 组, 200 mgkg-1)，MFG30%乙醇洗脱部分 (MFG1，180gkg-1)、MFG60% 乙醇洗脱部分 (MFG2，120gkg-1)、MFG95%乙醇洗脱部分(MFG3 ，50gkg-1)3 个剂量组, ig 给药。实验开始时，MFG1、MFG2、MFG3 3 个剂量组和阳性药对照组给药 7d，1 次/d，同时模型组和正常对照组分别 ig 给予
11、同体积生理盐水。于第 7 天给药 2h 后, 每鼠 ip 10 ml kg-1 的 0.2% CCl4 橄榄油溶液,正常对照组给等量的橄榄油。造模 16 h 后,摘眼球取血(取血5前 12 h 禁食,不禁水), 分离血清待测。采血后，快速断头处死,取肝脏称重, 取肝右叶组织约 0.5 g，在冰冷的生理盐水中漂洗,滤纸拭干,用0.9%生理盐水制成 10%肝组织匀浆，离心，取上清待测。同时取左叶肝脏，10%甲醛固定作病理切片。2.2 测定指标 ALT 和 AST,按试剂盒要求进行测定;肝组织匀浆，SOD 和 MDA,按试剂盒要求进行测定；取肝左叶同一部位组织,采用冰冻切片,HE 染色, 光镜下观察
12、肝组织的病理学变化。2.3 统计学处理所有数据输入计算机用 SPSS 10.0 统计软件进行统计,计算结果以s 表示，组间采用 t 检验。3 结果3.1 血清生化指标检测结果表明，腹腔注射 CCl4 可引起小鼠急性肝损伤，表现在血清中 ALT 和 AST 活性明显升高。MFG2和 MFG3 组可使其升高的 ALT 和 AST 活性显著降低(P0.05 和P0.01)，提示 MFG 对 CCl4 引起的小鼠急性肝损伤有很好的保护作用见表 1。表 1 MFG 对急性肝损伤小鼠血清 ALT 和 AST 的影响（略）3.2 肝组织匀浆生化指标检测从实验结果可见,模型组小鼠肝6组织中 MDA 含量明显升
13、高(P0.01)且 SOD 活性显著下降(P0.01),提示肝脏出现脂质过氧化。而 MFG3 和 MFG2 可显著抑制肝组织中 MDA 的升高及 SOD 活性的降低(P0.01 和P0.05),提示 MFG 有较强的抗氧化及清除氧自由基的作用见表2。表 2 MFG 对急性肝损伤小鼠肝组织 SOD 和 MDA 的影响（略）3.3 肝脏组织病理观察正常对照组小鼠肝脏外观呈红褐色，质地软而富有弹性；在光镜下可以观察到肝小叶结构完整，细胞排列整齐，大小均匀，分界清楚。模型组小鼠肝脏体积增大，质脆,边缘模糊;镜下见肝小叶结构破坏，肝细胞普遍浊肿，出现以中央静脉为中心的局灶性肝细胞变性、坏死和炎细胞浸润。
14、BDD 组和 MFG3组肝脏略有水肿,质地柔软；镜下见肝小叶结构基本完整，细胞排列较整齐,只有少量的炎细胞浸润, 较模型组有明显改善。MFG2 组较模型组也有所改善,但是不如 MFG3 组效果好。MFG1 组与模型组相比无明显变化。见图 1。4 讨论CCl4 是经典的化学性肝损伤动物模型制备毒剂, 被广泛用于肝坏死或肝损伤的在体和离体研究。CCl4 进入肝细胞后, 经肝微粒体细胞色素 P450 激活，生成自由基(CCl3 等)，引起肝微粒体、溶酶体、细胞膜等生物膜脂质过氧化反应3 。也有研究认为，CCl37还可抑制细胞膜上的钙泵,致使细胞内钙离子增多而使细胞死亡4 。当肝细胞膜因脂质过氧化反应
15、而功能受损、结构破坏时，细胞内的ALT，AST 等会释放入血，所以检测血清中 ALT，AST 的活性可以判断肝脏损伤的程度和药物治疗肝损伤的效果。MDA 是脂质过氧化的最终产物,其含量与脂质过氧化反应呈正比；而作为抗氧化酶系统主要物质之一的 SOD 含量的高低反映了机体清除氧自由基的能力。经大孔树脂处理后的白蚁菌圃提取物富含熊果酸等三萜类化合物5 。这些三萜类化合物能够使四氯化碳所致的急性肝损伤的大鼠血清 ALT 显著降低，可以使肝损伤动物肝糖原明显增加,同时证明，经药物治疗动物的甘油三酯含量明显减少，血清中 脂肪蛋白含量增加，有明显降脂作用；肝脏组织学研究表明，经这类化合物治疗的动物，肝细胞
16、变性、坏死均能明显改善，大部分都能够恢复正常6 。本实验结果证明，经大孔树脂富集物能显著对 CCl4 引起的急性肝损伤起到保护作用，且 95%乙醇富集物作用效果较 60%乙醇富集物作用效果显著，富集物能够显著降低血清中 ALT 和 AST 的水平, 明显减轻肝细胞的变性坏死和炎性浸润等病理改变,同时还明显降低肝组织 MDA 的含量, 并且有效提高了 SOD 的活力提高肝细胞抗氧化能力。其作用机理可能与 MFG 对抗 CCl4 引起的膜脂质过氧化,稳定肝细胞的胞膜系统，促进肝细胞的再生和修复有关7 ，仍有待进一步研究。【参考文献】81薛德钧，李云秋，徐彭,等. 黑翅土白蚁化学成分初步研究J. 江西中医学院学报，2003，15（1）：43.2曹娟，孙涛，张敏, 等.白蚁菌圃的抗炎作用研究 J.中药材,2006,29(10):1011.3杨龙飞, 金家兴 ,高文秀,等. 清肝浸膏对小鼠实验性肝损伤模型的保
