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1、1黄瓜香在急性炎症动物模型中抗炎效应的研究作者：李春艳，钟飞，李先辉，吕江明，贾薇【摘要 】 目的研究黄瓜香提取物的抗炎效应。方法采用 4 种急性炎症模型,包括角叉菜胶及蛋清诱导大鼠足趾肿胀、二甲苯致小鼠耳片肿胀、1%冰醋酸致小鼠腹腔渗出模型,观察黄瓜香提取物的抗炎作用。结果黄瓜香提取物组对二甲苯致小鼠耳片肿胀，对角叉菜胶和蛋清引起的大鼠足跖肿胀，对急性炎症导致的皮肤和腹腔毛细血管通透性均有不同程度抑制作用,其中黄瓜香提取物中、高剂量两个剂量组与模型组相比有显著性差异(P0.05 或 P0.01)。结论黄瓜香提取物具有较强的抗炎效应。 【关键词】 黄瓜香; 抗炎作用黄瓜香学名蔓茎堇菜，属堇菜科
2、，堇菜属(Viola diffusa Ging，VDG)多年生草本植物。性味酸寒无毒，具有清热解毒、散淤消肿、去腐生肌、清肺止咳、生肌接骨之效。民间使用历史悠久，主治肝炎、痈肿疮毒、风热咳嗽、眼睑炎，牙龈炎、烫伤、毒蛇咬伤等。已有文献报道黄瓜香具有多种药理活性1，但与黄瓜香“清热解毒，散淤消肿”功效密切相关的抗炎作用未见系统研究的报道。本文采用实验性急性炎症动物模型,观察黄瓜香抗炎效果,为其临床应2用提供理论提供依据。1 材料与仪器1.1 动物清洁级昆明种小鼠, 18 22g，各半,合格证号:001847; 清洁级 SD 大鼠, 180250 g，各半，合格证号：001847,由湖南长沙开福区
3、东创实验动物服务部提供，许可证号：20060001。1.2 药品及试剂黄瓜香水提物由吉首大学药理实验室提供,传统方法水提、浓缩,临用时用蒸馏水稀释成所需浓度(实验所用剂量均以生药计);吲哚美辛，山西临汾奇林药业有限公司生产,批号20070601。二甲苯,江苏徐州试剂二厂生产, 批号 050720; 角叉菜胶, 青岛海洋所提供, 用前 1 天以无菌生理盐水配制成 10 gL-1,放置4冰箱过夜备用;甲醇、甲酰胺、冰醋酸、氢氧化钾为分析纯。1.3 仪器 uv-3100 紫外分光光度计(上海美普达仪器有限公司),sp- 723 可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司),FA/JA 型电子天平(上海精密
4、科学仪器有限公司), 精度 0.02mm 的游标卡尺(上海量具刃具厂)，SHH.W21.420 型电热恒温水箱(天津市泰斯特仪器有限公司), 离心机 (科技有限公司)。32 方法2.1 黄瓜香对二甲苯诱导小鼠耳肿胀模型的影响2，3昆明种小鼠 50 只, 各半, 随机分为 5 组:模型组(生理盐水)、VDG ( 2，4 ，8 gkg-1)组、阳性药组( 吲哚美辛,125 mgkg-1)，每组动物按 0.1 ml/10g 连续灌胃给药 5 d, 模型组给予相同体积的生理盐水。末次给药 30 min 后,于小鼠右耳前后两面均匀涂抹二甲苯 0.02 ml/只, 左耳作对照, 45 min 后脱颈处死小
5、鼠, 沿耳廓基线剪下两耳, 用直径为 9 mm 的打孔器沿左右耳片同一部位打下圆耳片, 电子天平称重,计算肿胀度和抑制率。肿胀度以每鼠左右耳片重量之差来表示，抑制率(% ) =(模型组肿胀度- 给药组肿胀度) / 模型组肿胀度100 %。2.2 黄瓜香对小鼠毛细血管通透性的影响2 接上实验，于涂抹二甲苯后，立即尾静脉注射 0.5%伊文思兰溶液 0.1 ml/10g，同时腹腔注射 1%冰醋酸 10 mlkg-1 ,45 min 后脱颈椎处死动物,用 5 ml 生理盐水冲洗腹腔, 吸管收集腹腔液,离心取上清液于 590 nm 处可见分光光度计测定吸光度 A 值 。按公式计算小鼠腹腔毛细血管通透性抑
6、制率。腹腔毛细血管通透性抑制率( %) = (模型对照组腹腔液 A590 - 给药组腹腔液 A590 )/模型对照组腹腔液 A590 100 %;待“2.1”项实验中耳片称毕 ,将致炎右耳片浸入 1 ml 甲酰胺中, 38水浴 48 h 将染料渗出,离心取上清液于 620 nm 处可见分光光度计测吸光度 A 值。按公式计算小鼠皮肤毛细血管通透性抑制率。4皮肤毛细血管通透性抑制率( %) = (模型对照组液 A620 - 给药组液 A620 )/模型对照组液 A620 100 %。2.3 黄瓜香对角叉菜胶诱导的大鼠足跖肿胀模型的影响2，3 大鼠 50 只,各半,随机分为 5 组: 模型组(生理盐
7、水 )、VDG ( 0.4，0.8，1.6 gkg-1)组、阳性药组(吲哚美辛,25 mgkg-1)，每组动物按 2 ml/100g 连续灌胃给药 5 d, 模型组给予相同体积的生理盐水。实验当天先用游标卡尺(精度 0.02 mm)测所有大鼠右后肢足跖厚度作为造模前的正常值, 末次给药 1 h 后, 于每鼠右足趾皮下注射 1%角叉菜胶 0.1 ml 致炎, 以造成急性足跖肿胀模型。分别测定注射角叉菜胶后 30 min，1 h，2 h，3 h， 4 h，5 h 大鼠致炎右后足跖的厚度,以肿胀度作为检测指标。肿胀度(mm)= 致炎后足跖厚度-致炎前足跖厚度。2.4 黄瓜香对蛋清诱导的大鼠足跖肿胀模
8、型的影响2，3实验分组、给药、足跖厚度测定、肿胀度计算同“2.3”项方法，每鼠右足趾皮下注射鸡蛋清 0.1ml 致炎,以造成急性足跖肿胀模型。2.5 数据统计分析 计量资料用s 表示,多组间差异用 F 检验进行统计分析，进一步用 One-Way ANOVA 检验进行两组间比较, 使用 SPSS 12.0 软件进行统计分析。3 结果53.1 黄瓜香对二甲苯诱导小鼠耳肿胀模型的影响以耳片肿胀程度、肿胀抑制率进行评价。结果见表 1。二甲苯能明显诱导小鼠耳肿胀。致炎前连续灌胃给药 5 d,VDG ( 2，4，8gkg-1)组对二甲苯致小鼠耳片急性炎症有不同程度抑制作用,其中 VDG ( 4，8gkg-
9、1)两个剂量组与模型组相比差异有显著性(P0.05) 。表 1 VDG 对二甲苯诱导小鼠耳肿胀的影响与模型组比较，P 0.05, P 0.01;n=103.2 黄瓜香对小鼠毛细血管通透性的影响以伊文思兰染料渗出情况，来判断黄瓜香对小鼠毛细血管通透性的影响。结果见表2。VDG ( 2，4，8 gkg-1)组对急性炎症导致的皮肤和腹腔毛细血管通透性均有不同程度抑制作用,其中 VDG ( 4，8 gkg-1)两个剂量组与模型组相比有显著性差异(P0.05)。表 2 VDG 对小鼠毛细血管通透性的影响与模型组比较，P0.05;n=103.3 黄瓜香对角叉菜胶和鸡蛋清诱导的大鼠足跖肿胀模型的影响以足跖肿
10、胀程度进行评价。角叉菜胶和鸡蛋清能明显诱导大鼠足跖肿胀，3 h 达峰值。黄瓜香对角叉菜胶和蛋清引起的大鼠足跖6肿胀的影响随时间的变化关系见图 12 。 VDG (0.4，0.8，1.6 gkg-1)组对角叉菜胶和蛋清引起的大鼠足跖肿胀均有不同程度抑制作用, 其中 VDG (0.8，1.6 gkg-1)两个剂量组与模型组相比有显著性差异(P0.01)。4 讨论二甲苯致小鼠耳肿胀和角叉菜胶诱导大鼠足肿胀模型是急性非特异性炎症模型,结果表明黄瓜香提取物对急性非特异性炎症有显著抑制作用, 并呈剂量依赖效应, 提示黄瓜香提取物对急性、早期炎症具有很好的抗炎作用。通过对毛细血管通透性影响的实验，表明黄瓜香
11、提取物可以降低毛细血管的通透性，减少急性、早期炎症的渗出。大鼠蛋清诱导大鼠足肿胀模型是一种免疫性炎症模型,为筛选抗炎与免疫药物的模型之一。实验表明黄瓜香提取物对免疫性炎症也有明显抑制作用。而我们先前研究发现，黄瓜香提取物具有明显的增强免疫的作用4。因此，黄瓜香提取物是否具有双向的免疫调节作用及具体的抗炎机制有待于深入的研究。综上所述, 黄瓜香提取物具有明显的抗炎活性,这为其进一步研究提供了重要的药理学依据。致谢：黄瓜香全草采自湖南湘西，由吉首大学医学院民族医药研究室杨德胜教授提供鉴定!7【参考文献】1 李先辉, 李春艳 ,吕江明，等. 黄瓜香水提物体外抗氧化活性实验J.吉首大学学报 (自然科学版),2006,27(5):95.2 丁长海, 徐叔云, 熊祖应.解热、抗炎药物实验法A.徐叔云,卞如濂,陈修 .药理实验方法学，第 3 版M.北京:人民卫生出版社, 2002: 904.3 马越鸣,闫晶超,王天明，等. 泻心汤在急性炎症动物模型上的抗炎效应J.中国药理学通报 ,2006,22(11):1393.4 李春艳，李先辉，吕江明，等.黄瓜香对小鼠免疫功能调节的实验研究J.时珍国医国药 ,2008, 19(1)：40.
