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1、 1.掌握蛋白质的基本构成单体：氨基酸的结构特点，从各氨基酸的结构特点上理解氨基酸的分类。2.掌握氨基酸的理化性质，重点掌握两性电离与等电点含义。3 氨基酸的化学性质及其应用目的与要求蛋白质的元素组成蛋白质是有机化合物，离不开C、H、O三种元素，还含有 N、P、S、金属元素等。 含量% ： 5055 67 2023 1517 0.33 微量或无 元素组成 ： C H O N S 其它蛋白质中N是特征元素，且含量恒定，为16%左右 ，即16克 氮/100克蛋白质，故可以用定氮法测量蛋白质含量，即：每 100克蛋白质含氮16克，100/16=6.25克蛋白质含氮1克。所以 ，每克样品含氮量6.25
2、100=100克样品蛋白质含量（克%） 。有些蛋白质含有其他微量元素：P、Fe、Cu、Mn、Zn、Co、 Mo、I 等。 一 蛋白质的水解1.酸水解 条件：510倍的20%的盐酸煮沸回流1624小时， 或加压于120水解2小时。 优点：可蒸发除去盐酸，水解彻底，终产物为L -氨基酸，产物单一，无消旋现象。 缺点：色氨酸破坏，并产生一种黑色的物质：腐 黑质，水解液呈黑色。2. 碱水解 条件：4mol/L Ba(OH)2或6mol/L NaOH煮沸6小时。 优点：水解彻底，色氨酸不被破坏，水解液清亮。 缺点：产生消旋产物，破坏的氨基酸多，一般很少使用。3. 蛋白酶水解 条件：蛋白酶如胰蛋白酶、糜蛋
3、白酶，常温3740， pH值58 。 优点：氨基酸不被破坏，不发生消旋现象。 缺点：水解不完全，中间产物多。蛋白质酸碱水解常用于蛋白质的组成分析，而酶水解 用于制备蛋白质水解产物。二、蛋白质分子的基本组成单位氨基酸（一）氨基酸的结构通式： 1、构成蛋白质的氨 基酸均为L-氨基酸 。 2、除R为H（甘氨酸 ）外，其余氨基酸均具 有旋光性。 3、各种氨基酸的区 别在于侧基R基上。从氨基酸的结构通式 可以看出：（二）氨基酸的构型： 构成蛋白质的氨基酸除甘氨酸外，均含有-碳原子，在空间各原子有两种排列方式：L-构型与D-构型，它们的关系就像左右手的关系，互为镜像关系，下图以丙氨酸为例： （三）氨基酸的
4、结构与分类1、按氨基酸分子中羧基与氨基的数目分： （1）酸性氨基酸：一氨基二羧基氨基酸，有：天冬氨酸 、谷氨酸、 （2）碱性氨基酸：二氨基一羧基氨基酸 ，有：赖氨酸、 精氨酸、组氨酸 （3）中性氨基酸：一氨基一羧基氨基酸，有：甘氨酸、 丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸 、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、脯氨酸、天冬酰胺、谷氨酰 胺、丝氨酸、苏氨酸。2、按侧基R基的结构特点分： （1）脂肪族氨基酸 （2）芳香族氨基酸：苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸 （3）杂环氨基酸：脯氨酸、组氨酸3、按侧基R基与水的关系分： （1）非极性氨基酸：有丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨 酸、甲硫氨酸、半胱氨酸、
5、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、 脯氨酸。 （2）极性不带电氨基酸：甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、 丝氨酸、苏氨酸。 （3）极性带电氨基酸：天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨 酸、组氨酸。4、按氨基酸是否能在人体内合成分： （1）必需氨基酸：指人体内不能合成的氨基酸，必须从食物中摄取，有八种：赖氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸。（2）非必需氨基酸：指人体内可以合成的氨基酸。有十种。（3）半必需氨基酸：指人体内可以合成但合成量不能满足人体需要（特别是婴幼儿时期）的氨基酸，有两种：组氨酸、精氨酸。 二十种氨基酸的名称和结构如图所示:注：二十种氨基酸的结构特点 支链氨基酸：缬氨
6、酸、亮氨酸，异亮氨酸 含羟基的氨基酸：丝氨酸、苏氨酸 含硫的氨基酸：半胱氨酸（含巯基）、甲硫氨酸（含硫甲基） 含苯环的氨基酸：苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸 含胍基的氨基酸：精氨酸 含咪唑基的氨基酸：组氨酸 亚氨基酸：脯氨酸 含酰胺的氨基酸：天冬酰胺、谷氨酰胺 含吲哚基的氨基酸：色氨酸 含-氨基的氨基酸：赖氨酸（四）蛋白质中不常见的氨基酸羟-脯氨酸、羟-赖氨酸、-羧基谷氨酸、6-氮-甲基赖氨酸（五）非蛋白氨基酸 鸟氨酸、胍氨酸、高半胱氨酸、高丝氨酸、-丙氨酸 、-氨基丁酸等三.氨基酸的理化性质（一）物理性质1.形态：均为白色结晶或粉末，不同氨基酸的晶型结构 不同。2.溶解性：一般都溶于水，不溶或微溶
7、于醇，不溶于丙 酮，在稀酸和稀碱中溶解性好。3.熔点：氨基酸的熔点一般都比较高，一般都大于200 ，超过熔点以上氨基酸分解产生胺和二氧化碳。 4旋光性：除甘氨酸外的氨基酸均有旋光性。5.光吸收：氨基酸在可见光范围内无光吸收，在近紫外 区含苯环氨基酸有光的吸收。（二）化学性质1.氨基酸的两性电离及等电点： 氨基酸既含有氨基，可接受H+，又含有羧基，可电离出 H+，所以氨基酸具有酸碱两性性质。通常情况下，氨基酸 以两性离子的形式存在，如下图所示： 从上图可知：氨基酸在酸性环境中，主要以阳离子的形式存在，在碱性环境中，主要以阴离子的形式存在。在某一 pH环境下，以两性离子（兼性离子）的形式存在。该p
8、H称为 该氨基酸的等电点。所以氨基酸的等电点可以定义为：氨基 酸所带正负电荷相等时的溶液pH。 氨基酸的水溶液既可被酸滴定，又可被碱滴定，应该具有两性电离的性质，现以甘氨酸为例来说明氨基酸两性电离的特点。 左图是甘氨酸的电离酸 碱滴定曲线，从左向右是 用NaOH滴定的曲线，溶液 的pH由小到大逐渐升高； 从右向左是用盐酸滴定的 曲线，溶液的pH由大到小 逐渐降低。曲线中从左向 右第一个拐点是氨基酸羧 基解离50%的状态，第二 个拐点是氨基酸的等电点 ，第三个拐点是氨基酸氨 基解离50%的状态。 通过氨基酸的滴定曲线，可用下列 Henderson- Hasselbalch 方程求出各解离基团的解
9、离常数（pK） ： 根据pK可求出氨基酸的等电点，可由其等电点左右两个pK，值的算术平均值求出。中性氨基酸： pI=(pK1 + pK2)/2pK1为-羧基的解离常数,pK2为-氨基的解离常数。氨基酸等电点的计算二十种氨基酸的pK，及等电点： 2.由-氨基参加的反应： (1) 与亚硝酸反应：放出氮气，氮气的一半来自氨基 氮，一半来自亚硝酸，在通常情况下测定生成的氮气 的体积量可计算氨基酸的量，此反应可用于测定蛋白 质的水解程度。(2) 与甲醛的反应：用过量的中性甲醛与氨基酸反应，可游离 出氢离子，然后用NaOH滴定，从消耗的碱量可以计算出氨基酸 的含量。此法称为间接滴定法。(3) 与2,4-二
10、硝基氟苯（2,4-DNFB）的反应（Sanger反应） ：在碱性条件下生成黄色的二硝基苯-氨基酸衍生物。(4) 与苯异硫氰酸酯（PITC）反应（Edman反应）： 生成苯乙内酰硫脲-氨基酸。vv(5) (5) 与丹磺酰氯（与丹磺酰氯（DNS-ClDNS-Cl）的反应：碱性环境生成荧光物）的反应：碱性环境生成荧光物 质质DNS-DNS-氨基酸。氨基酸。（3）、(4)、(5)反应用于蛋白质的N-末端的测定。3.-羧基参加的反应：(1)与碱反应成盐 (2)与醇反应成酯(3)与酰化试剂反应成酰氯4.-氨基与-羧基共同参加的反应与茚三酮的反应：除脯氨酸与羟脯氨酸外，可与其它氨基酸生 成蓝紫色化合物。脯氨
11、酸与羟脯氨酸为黄色化合物。 (1) Millon反应：检测Tyr或含Tyr的蛋白质的反应。Millon试剂：汞的硝酸盐与亚硝酸盐溶液。产物：红色的化合物。(2) Folin反应：检测Tyr或含Tyr的蛋白质的反应。Folin试剂：磷钼酸、磷钨酸混合溶液。产物：蓝色的钼蓝、钨蓝。(3) 坂口反应：检测Arg或含Arg的蛋白质的反应。坂口试剂：萘酚的碱性次溴酸钠溶液。产物：砖红色的沉淀。5.侧链反应（颜色反应）：(4) Pauly反应：检测His、Tyr及含His、Tyr蛋白质的反应。试剂：对氨基苯磺酸盐酸溶液、亚硝酸钠、碳酸钠混合溶液产物：橘红色的化合物。(5) 乙醛酸的反应：检测Trp或含Tr
12、p蛋白质的反应。当Trp与乙醛酸和浓硫酸在试管中叠加时，产生分层现象， 界面出现紫色环。(6) Cys的反应：Cys或含Cys蛋白质与亚硝基亚铁氰酸钠在稀 氨的溶液中，产生一种红色的化合物。四.氨基酸的分离测定（一）层析法层析法是利用被分离样品混合物中各组分的化学性质的差异，使各组分以不同程度分布 在两个相中，这两个相一个为固定相，另一个 为流动相。当流动相流进固定相时，由于各组 分在两相中的分配情况不同或电荷分布不同或 离子亲和力不同等，而以不同的速度前进，从 而达到分离的目的。 常见的层析法有：滤纸层析、薄层层析、离子交换层析、亲和层析高效液相色谱高效气相色谱热导检测器氢火焰离子化检测器稍息
