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1、艾滋病检测实验室的艾滋病检测实验室的 质量控制与评价质量控制与评价孙伟东孙伟东 北京市疾病预防控制中心北京市疾病预防控制中心 北京市艾滋病确证中心北京市艾滋病确证中心北京市艾滋病确证中心北京市疾病预防控制中心一、质量控制一、质量控制n n质量控制是指为确保检测工作正常进行而在质量控制是指为确保检测工作正常进行而在 每一次实验过程中必须采取的各种措施。每一次实验过程中必须采取的各种措施。n涉及每一次试验中，保证实验正常进行必须包括的 各种措施。n是对检测过程的监控，尽可能减少实验过程中产生 的各种误差。n具体内容是将质控品（内部对照和外部对照）和检 测标本一起实验操作，从而了解分析过程的质量情
2、况。n质控的最终结果可以了解本次实验是否有效、试验 条件是否正常、试验结果是否可靠。北京市艾滋病确证中心北京市疾病预防控制中心n n采集标本前病人的准备采集标本前病人的准备n n正确的标本采集方法正确的标本采集方法n n准确及时的运送标本准确及时的运送标本n n实验前正确地处理和保存标本实验前正确地处理和保存标本实验前质量控制实验前质量控制北京市艾滋病确证中心北京市疾病预防控制中心实验中质量控制实验中质量控制n n质控品的准备质控品的准备n n试剂盒的评价试剂盒的评价n n开展质控图质控（或开展质控图质控（或“ “即刻法即刻法” ”质控）质控）北京市艾滋病确证中心北京市疾病预防控制中心实验后质
3、量控制实验后质量控制n n实验后准确填写检验结果实验后准确填写检验结果n n及时发出报告及时发出报告n n正确地解释检验结果的临床意义正确地解释检验结果的临床意义北京市艾滋病确证中心北京市疾病预防控制中心质控品质控品n n内部对照质控血清内部对照质控血清 内部对照质控血清是指每个试剂盒内厂方提供内部对照质控血清是指每个试剂盒内厂方提供 的一套阴性和阳性对照的一套阴性和阳性对照n n外部对照质控血清外部对照质控血清 外部对照质控血清是各实验室为了监控每次检外部对照质控血清是各实验室为了监控每次检 测的重复性和稳定性以及检验试剂盒批间差异测的重复性和稳定性以及检验试剂盒批间差异 而设置的一套阴性和
4、阳性对照血清。设立外部而设置的一套阴性和阳性对照血清。设立外部 对照还可以提示标本处于弱阳性和临界值状态对照还可以提示标本处于弱阳性和临界值状态 时的检验操作情况时的检验操作情况北京市艾滋病确证中心北京市疾病预防控制中心外部对照质控血清的组成外部对照质控血清的组成理想的外部对照应该包括强阳性对照、理想的外部对照应该包括强阳性对照、 弱阳性对照、临界值对照和阴性对照。在弱阳性对照、临界值对照和阴性对照。在 每次实验时可只使用一个单一浓度水平的每次实验时可只使用一个单一浓度水平的 质控品即弱阳性对照。这个弱阳性对照的质控品即弱阳性对照。这个弱阳性对照的 值以设定在该试剂盒值以设定在该试剂盒Cut-
5、offCut-off值的值的2 23 3倍为倍为 宜。宜。北京市艾滋病确证中心北京市疾病预防控制中心外部对照质控血清的来源外部对照质控血清的来源n n购买购买n n自备自备n n混合试剂盒内部对照血清。混合试剂盒内部对照血清。n n稀释稀释HIVHIV抗体强阳性血清。抗体强阳性血清。北京市艾滋病确证中心北京市疾病预防控制中心n每一次试验必须使用外部对照质控血清n建立质控图，即检验性能数据与计算出的“ 控制线”进行比较的图n上面标有一中心横线及其上、下各一或两条平 行的质控线，并有按时间顺序填入的各质控血 清测定的数值，以便监控实验操作的一致性和 结果的准确性。同时可以了解各批试剂盒之间 的误差
6、（批间差异）。外部对照的使用北京市艾滋病确证中心北京市疾病预防控制中心n n算术平均值（算术平均值（ ）：采用至少）：采用至少2020次（天）所测得次（天）所测得 的外部对照质控血清的外部对照质控血清S/COS/CO值结果计算出平均值值结果计算出平均值n n标准差（标准差（s s）：是描述样本与均数之间离散程度）：是描述样本与均数之间离散程度 的一个指标，是与对照质控血清的一个指标，是与对照质控血清S/COS/CO值均值有关值均值有关 的预期范围。一组的预期范围。一组S/COS/CO值标准差以值标准差以s s表示表示n n变异系数（变异系数（cvcv）：是反映各次）：是反映各次S/CO S/C
7、O 值相对均值值相对均值 的离散程度的一个指标，可以用于衡量被检标本的离散程度的一个指标，可以用于衡量被检标本 检测的重复性或精密度。检测的重复性或精密度。建立质控图的参数建立质控图的参数北京市艾滋病确证中心北京市疾病预防控制中心计算公式计算公式北京市艾滋病确证中心北京市疾病预防控制中心质控图的建立质控图的建立次数S/CO值值次数S/CO值值 11.71111.3521.81122.0031.90131.5241.81141.7152.10151.8161.43161.5271.62172.1082.14182.0091.43191.43101.90201.52北京市艾滋病确证中心北京市疾病预
8、防控制中心以每个质控对照的OD值 /CUT OFF比值（S/CO ）为纵座标（Y轴），每一次实验为横座标（X轴） 建立质控图。 采用至少20次（天）所测的外部对照质控血清 S/CO 值结果计算出平均值（ ）； 计算20次S/CO值的标准差（s）； 计算出 1s， 2s ， 3s范围； 标出每次实验外部对照值，每次实验质控的结 果依次点入该质控图框架图中。质控图的建立北京市艾滋病确证中心北京市疾病预防控制中心质控图制作实例质控图制作实例1 1、计算均值、计算均值=1.74=1.742 2、计算标准差、计算标准差=0.25=0.253 3、按标准差计算范围如下：、按标准差计算范围如下： 1S1S=
9、1.74+/-=1.74+/-（1 100.25.25）= =（1.49-1.991.49-1.99）2S2S=1.74+/-=1.74+/-（2 200.25.25）= =（1.24-2.241.24-2.24）3S3S=1.74+/-=1.74+/-（3 300.25.25）= =（0.99-2.490.99-2.49）北京市艾滋病确证中心北京市疾病预防控制中心质控图质控图北京市艾滋病确证中心北京市疾病预防控制中心质控图质控图北京市艾滋病确证中心北京市疾病预防控制中心外部对照S/CO值超出2s，系统处于告警状态，应予注意 ，是否可以继续检测需要进一步观察； 失控：外部对照S/CO值超出3s
10、，系统处于失控状态，本 次实验结果不能被接受，需查找原因，重新检测；位移：如果几个连续质控对照值（3-5次）都落在均值的 一侧称之为位移，通常表示存在大的变化（失控）。引起位 移的原因有使用新批号的试剂盒、使用新试剂、实验员的更 换、孵育温度的改变、仪器故障等。趋势：当几个连续质控对照值（5-7个）几乎按一个方向 分布时称之为趋势，通常由参数的缓慢改变引起，如试剂失 效和移液器逐渐不准确等。发生位移和趋势的最常见的原因 是试剂（如酶标记物）或对照的失效。质控图的判定和分析北京市艾滋病确证中心北京市疾病预防控制中心北京市艾滋病确证中心北京市疾病预防控制中心建立质控图的目的是发现出现的问题，所以在
11、每次 实验时应该观察外部对照值是否在允许范围之内； 为减少试剂盒更换造成的变化，最好长期稳定地使 用一种质量好的试剂盒，更换不同厂家的试剂盒及改用 新批号试剂盒应重新制作质控图； 每月定期召开质控分析会，讨论本月质控情况； 质控结果失控时，应填写报告单交质量负责人，分 析原因并决定是否发出检测报告； 使用新批次的外部对照质控血清时，必须重新绘制 质控图。变异系数小于20%，表示处于稳定状态。质控图分析要点北京市艾滋病确证中心北京市疾病预防控制中心在20%）时，提示加样量不一 致。校准加样器及每次更换吸头加样可 以减少cv值使对照值更趋一致。变异系数（cv）北京市艾滋病确证中心北京市疾病预防控制
12、中心 过去认为OD值在CUT OFF值10%15% 范围内的样本定为灰色带反应。对这类标 本最好复检，或用其他方法再检测，通过 灰区的判断有助于发现早期感染者 目前的EIA试剂已有较高的灵敏度，EIA 检测应该只有两种结果：阳性或阴性灰区问题北京市艾滋病确证中心北京市疾病预防控制中心即刻法质控即刻法质控n n在对同一批外部质控血清连续测定在对同一批外部质控血清连续测定3 3次后，次后， 即可对第三次检验结果进行质控即可对第三次检验结果进行质控n n计算方法：计算方法：n n1 1、将质控血清的测定值从小到大排列：、将质控血清的测定值从小到大排列：X X1 1, , X X2 2 , , X X
13、3 3 XnXn（X X1 1为最小值，为最小值， Xn Xn 为最大值）；为最大值）；n n2 2、计算、计算 和和 s s ；n n3 3、计算、计算SISI上限值上限值和和SISI下限值下限值北京市艾滋病确证中心北京市疾病预防控制中心4 4、将、将SISI上限上限和和SISI下限下限与表中数字比较与表中数字比较n n当当SISI上限上限和和SISI下限下限 n n3s3s值时值时 表示表示 该值该值 已在已在3s3s范范围围之外，之外， 属属“ “失控失控” ” n n数数值处值处 于于“ “告警告警” ” 和和“ “失控失控” ”状状态应态应 舍去，重舍去，重 新新测测定定该质该质 控
14、血清和病人控血清和病人样样品。舍去的只品。舍去的只 是失控的数是失控的数值值，其它，其它值值仍可仍可继续继续 使用使用即刻法质控即刻法质控北京市艾滋病确证中心北京市疾病预防控制中心 必须使用经卫生部批准或注册，中国药品生物制品检 定所批批检定合格、有效期内且保存条件符合要求的国 产或进口HIV1+2混合型抗体初筛试剂盒 按照SOP中规定的要求进行操作，对影响检验的物理 因素，如孵育时间、反应温度、洗涤程序和次数等，均 应按试剂盒说明书的要求操作，以保证质量控制 实验前必须检查待检标本的质量，如标本不符合要求 必须重新采集标本。冰冻的标本应全部融化，摇匀后检 测 每次检验，内部对照和外部对照的结
15、果必须在允许的 范围内，否则应视为无效质量控制的基本要求北京市艾滋病确证中心北京市疾病预防控制中心二、质量评价二、质量评价质量评价是一种手段，用于判定实验室测质量评价是一种手段，用于判定实验室测 定结果的质量。通常使用有关权威机构提供的定结果的质量。通常使用有关权威机构提供的 一套质控品一套质控品( (质量控制参比血清质量控制参比血清) )从外部来评价从外部来评价 实验室的工作，即对数个实验室的检测结果进实验室的工作，即对数个实验室的检测结果进 行统计分析和评价。这种评价方式常称为室间行统计分析和评价。这种评价方式常称为室间 质量评价（质量评价（EQAEQA）。质量评价用于评价质量保）。质量评
16、价用于评价质量保 证体系的效果，其目的在于帮助发现其质控与证体系的效果，其目的在于帮助发现其质控与 质保系统有无问题。各实验室可根据上一级提质保系统有无问题。各实验室可根据上一级提 供的质评检验报告的结果，检查其质量控制状供的质评检验报告的结果，检查其质量控制状 况。况。北京市艾滋病确证中心北京市疾病预防控制中心必要性必要性n n是监督检验质量、得到质量保证的重要途径之一是监督检验质量、得到质量保证的重要途径之一n n是一种有系统、有组织的外部约束和横向参比措是一种有系统、有组织的外部约束和横向参比措 施。不仅有助于提高各参评实验室的检测质量，施。不仅有助于提高各参评实验室的检测质量， 增加实验室间检验结果的可比性，还可通过试剂增加实验室间检验结果的可比性，还可通过试剂 评价、方法比较和技术交流等方式，促进实验方评价、方法比较和技术交流等方式，促进实验方 法的进步和检验试剂的优化，这些工作都直接或法的进步和检验试剂的
