《液相色谱的柱和系统故障检修》由会员分享，可在线阅读，更多相关《液相色谱的柱和系统故障检修（31页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、*1六、色谱柱和色谱系统的故障检修l每个HPLC使用者应该知道什么 *2HPLC 的组成l泵l进样器/自动进样器l色谱柱l检测器l数据系统/积分仪表l所有这些部件可能出现故障而需要检修。*3HPLC 的组成*4色谱柱问题的类型l l A. 压力l B. 峰形l C. 保留时间*5A压力问题 l色谱柱观测 潜在的问题 l压力高 堵塞滤头l 色谱柱污染l 堵塞填料*6查出原因 纠正压力l有无柱子时检查压力 去柱后去柱前去预柱.许多压力问题是由于系统或保护柱的阻塞l如果柱压高:l冲洗柱子:排除柱污染和填料堵塞l 包括：高分子量被吸附化合物l 样品或缓冲液中的沉淀物l反冲柱子清洁阻塞的滤头l更换滤头*
2、7Column Cleaning 柱子清洗l用比你的流动相更强的溶剂冲洗l为了增加强度选择反相溶剂对于分析柱每种溶剂至少用25 ml 冲洗l没有缓冲盐的流动相l100% Methanol 甲醇l100% Acetonitrile 乙腈l75% Acetonitrile :25% Isopropanol 75 %乙腈 ：25异丙醇l100% Isopropanol 异丙醇l100% Methylene Chloride 二氯甲烷l100% Hexane 已烷l当用已烷蔌二氯甲烷柱子时,必须先用异丙醇冲洗,然后再用你的反相流 动相*8柱子清洗l为了增加强度选用正相溶剂l或： 每种溶剂至少用50 m
3、l l 50% 甲醇 : 50% 氯仿l 乙酸乙酯*9怎样更换滤头l柱进口滤头l戴手套l不要让底座干燥l不要使柱身受热,否则填料会喷出l不要旋得太紧l旋好尾端螺母l旋好尾端螺头*10压力问题的预防l柱保护保护柱/预柱l在线过滤器l样品预处理l适当的柱冲洗l过滤缓冲流动相*11压力问题的预防:在线装置lMobile Phase Pre-Column Injector Filter GuardlFrom Pump 预柱 进样器 滤头 Columnl从泵来的流动相 保护柱 l Analyticall ColumnlFilter and Guard Column Act on Sample 分析柱l
4、滤头和保护柱作用于样品l Pre-Column Acts on Mobile Phasel 预柱作用于流动相 To Detectorl 到检测器*12压力问题的预防:样品制备l溶剂/化学环境l微粒/凝聚物的除去Filter samples 过滤样品Centrifugation 离心分离固相萃取薄层板生物膜*13B峰形问题l Split peaks 裂峰l Peak tailing 峰拖尾l Broad peaks 宽峰lPoor efficiency 低柱效l许多峰形问题是结合在一起的-例如:l展宽和拖尾或拖尾和保留时间增加*14裂峰l可能的原因:Column contamination 柱污
5、染Partially plugged frit 部分阻塞滤片Column void 柱头塌陷Injection solvent effects 溶剂效应*15裂峰 柱污染lColumn: StableBond SB-C8, 4.6 250mm, 5mlMobile Phase:60%25mM Na2HPO4,pH3.0 : 40%MeOHlFlow Rate: 1.0 mL/min Temperature: 35ClDetection: UV 254 nmlSample: 1. Pseudoephedrine 2. APAP 3. Unknown l4. ChlorpheniraminelIn
6、jection 1 峰3 峰形较好lInjection 30 峰3 裂峰lInjection 1 After Column Wash with 100% CANl经100%乙腈冲洗后 峰3 峰形极好*16裂峰 溶剂化效应lColumn: StableBond SB-C8, 4.6 250mm, 5mlMobile Phase: 82%H2O : 18%ACNlInjection Volume: 30 L lSample: l1. Caffeine 咖啡因 2. Salicylamide 水杨酰胺lA. Injection Solvent B. Injection Solventl 100% A
7、cetonitrile Mobile Phasel 峰形宽拖尾 峰形尖锐对称l样品溶剂尽可能与流动相匹配 *17裂峰原因的确定l复杂样品的基质或分析许多样品 - 柱污染或部分阻塞滤片 l流动相 pH=7- 由于硅胶溶解使柱塌陷(除非使用专门的柱子 ) -预柱与柱的塌陷l样品的量大-裂峰和宽峰,由样品量来决定 *18峰拖尾、变宽和柱效降低可能的原因l l柱“次级效应”（硅醇基效应）l柱塌陷l柱污染l柱老化l柱负荷超载l柱外效应*19峰拖尾柱“次级效应”（扫尾剂）lColumn: Alkyl-C8, 4.6 150mm, 5mlMobile Phase:85%25mM Na2HPO4,pH7.0
8、: 15%ACNlFlow Rate: 1.0 mL/min Temperature: 35ClSample: 1. Phenylpropanolamine 苯丙醇胺去甲麻黄碱 l2. Ephedrine 麻黄碱 3. Amphetamine 安非他明苯丙胺l4. Methamphetamine 脱氧麻黄碱 5. Phenteramine 苯三胺lNo TEA 无三乙胺 10 mM TEA 10 mM 三乙胺lUSP TF(5%) 美国药典拖尾因子 USP TF(5%) 美国药典拖尾因子l1. 1.29 1. 1.19l2. 1.91 2. 1.18 l3. 1.63 3. 1.20l4. 2
9、.35 4. 1.26l5. 1.57 5. 1.14l用流动相减尾剂(三乙胺)在pH 7 消除峰拖尾*20峰拖尾柱“次级效应”（PH值）lColumn: Alkyl-C8, 4.6 150mm, 5mlMobile Phase:85%25mM Na2HPO4,pH7.0 : 15%ACNlFlow Rate: 1.0 mL/min Temperature: 35ClSample: 1. Phenylpropanolamine 苯丙醇胺去甲麻黄碱 l2. Ephedrine 麻黄碱 3. Amphetamine 安非他明苯丙胺l4. Methamphetamine 脱氧麻黄碱 5. Phent
10、eramine 苯三胺l pH 3.0 pH 7.0 lUSP TF(5%) 美国药典拖尾因子 USP TF(5%) 美国药典拖尾因子l4.脱氧麻黄碱 1.33 4.脱氧麻黄碱 2.35l降低流动相的pH ,减小与硅醇基作用引起的峰拖尾*21峰拖尾 柱污染lColumn: StableBond SB-C8, 4.6 250mm, 5mlMobile Phase: 20% H2O : 80% MeOH Flow Rate: 1.0 mL/min Temperature: R.T. Detection: UV 254 nmlSample: 1. Uracil 尿嘧啶 2. Phenol 苯酚 l
11、3. 4-Chloronitrobenzene 4-氯硝基苯 4. Toluene 甲苯lPlates TF Plates TF Plates TFl理论板数 拖尾因子 理论板数 拖尾因子 理论板数 拖尾因子l1. 7629 2.08 1. 7906 1.43 1. 7448 1.06l2. 12043 1.64 2. 12443 1.21 2. 12237 1.21l3. 13727 1.69 3. 17999 1.19 3. 15366 1.11l4. 13355 1.32 4. 17098 1.25 4. 19067 1.17lQC test forward direction QC test reverse direction QC test after cleaning
