乳酸脱氢酶及其辅酶I的作用

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1、乳酸脱氢酶及其辅酶I 的作用乳酸脱氢酶由酶蛋白和辅酶I组成，两者单独 存在时，无催化活性，必须共同存在组成全 酶才起作用。乳酸脱氢酶在各种组织细胞广 泛存在，它可逆地催化乳酸脱氢形成丙酮酸 或丙酮酸接受氢生成乳酸。在代谢过程中， 有重要意义，反应中由辅酶I（NAD）起传递 氢作用。乳酸脱氢酶属于不需氧脱氢酶，不 能直接将氢交给氧，反应中生成的还原型辅 酶I，可与其它酶蛋白结合，将氢传给其它的 递氢体，通过呼吸链被彻底氧化。 试验原理： 本实验以乳酸为底物。用新鲜的动物肌肉的 粗制提取液，分别制成酶蛋白部分（用白陶土 吸附除去辅酶I）和辅酶部分（加热破坏酶蛋 白），观察两者单独作用及共同作用。实

2、验中 为了便于观察，用甲烯兰（即美兰）做为受氢 体。已知甲烯兰能从还原型黄酶接受氢而由蓝 色变成无色（甲烯白）。所以本实验中根据溶 液兰色的消退判断乳酸脱氢反应的发生。操作步骤：1、分别制备酶蛋白提取液及辅酸I提取液 （1）除去辅酶I的酶蛋白提取液：取新鲜动物肌 肉组织3g，剪碎放研钵中加玻璃砂约 0.5g， 白陶土 0.5g，加 PH7.4 0.1M磷酸缓冲液8ml ，研细成粥状。移入离心管中，以2000rpm离 心5分钟，倾于另一试管中备用。 （2）辅酶I提取液：取蒸馏水10ml于中试管中， 加热煮沸。取新鲜的肌肉组织3g，剪碎，放入 沸水中，继续煮沸10分钟，为防止水分过多蒸 发可加盖。

3、稍冷后倾入乳钵中研细，移入离心 管中2500rpm离心5分钟，取上清液备用。 2、取试管4只，标清管号，按下表加样：12345%乳酸钠提取液（ml）酶蛋白提取液（ml）辅酶提取液（ml）蒸馏水（ml）0.5%KCN液（滴）0.04%甲烯兰液（滴）0.5 0.5/0.5 10100.5/0.50.510100.50.50.5/1010/0.50.50.510103、充分混匀，向各管徐徐加入液体 石腊5滴（避免与空气接触），静置 试管架上或放37C水浴1530， 随时观察并记录各管退色情况，分 析结果。注：1、乳酸脱氧生成的丙酮酸与KCN结合，不发 生其逆反应。2、本实验中生成的甲烯白易被空气氧化又成 为甲烯兰，所以在加入液体石腊后观察褪 色时不宜振荡。3、观察退色的管，振荡片刻会出现什么变 化？再放置一段时间有什么变化？解释这 些现象。