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1、1高效液相色谱法测定利胆胶囊中黄芩苷的含量作者：赵翠云 贾元印 李文超 刘虹 颜鑫【摘要 】 目的研究利胆胶囊中黄芩苷的含量测定方法，制定定量质控标准。方法采用 HPLC 法，对该制剂的主要药物进行含量测定。结果通过方法学的系统考察和 3 批样品的含量测定，建立了该品中黄芩苷的含量测定方法，测得 3 批样品中黄芩苷的含量分别为9.18，9.71，9.40 mg/粒，其黄芩苷的线性范围为 19.7 98.5 g/ml，回归方程：Y=61 824X+75 898 ，r=0.999。平均回收率为 100.3%，RSD 为 1.90%。结论所建立的方法具有专属性强、重复性好、无明显干扰等优点，是测定利
2、胆胶囊中黄芩苷含量的较理想方法。 【关键词】 利胆胶囊； 高效液相色谱； 黄芩苷Determination of Baicalin in Lidan Capsule by HPLCAbstract：ObjectiveTo study the method for determination of baicalin in Lidan Capsule and establish the pharmaceutical quality standard.MethodsThe main 2component of the pharmacy is detected by HPLC.ResultsThe c
3、ontents of baicalin in three batches of sample were 9.18 mg/capsule,9.17 mg/capsule and 9.40 mg/capsule, respectively.The regression equation was Y=61824X+75898,r=0.999.The average recovery was 100.3%,RSD was 1.90%.ConclusionThe method is specific,reproducible and noninterfered.It is a better method
4、 for determination of baicalin in Lidan Capsule .Key words：Lidan Capsule； HPLC； Baicalin利胆胶囊是正在研制的中药新药，本品主要由黄芩、胆酸、猪去氧胆酸等多味中药组成。黄芩为本方剂的君药，其所含黄芩苷是其主要有效成分1 ，为制定本药物的定量质控标准，参考相关文献25中的黄芩苷的含量测定方法，对利胆胶囊中黄芩苷进行了含量测定方法的研究，通过方法学的系统考察和 3 批样品的含量测定，建立本品中黄芩苷的高效液相色谱测定方法。1 仪器与试药美国 Waters 600 高效液相色谱仪（600 Pump,996 Phot
5、odiode Array Detector）; 色谱柱为日本岛津 shim-pack 3CLC-ODS,6.0 mm150 mm;超纯水;色谱纯甲醇，其它试剂均为分析纯; 黄芩苷对照品购于中国药品生物制品检定所。2 方法与结果2.1 样品溶液的制备2.1.1 供试品溶液的制备取本品适量，研细，称取 0.2 g，精密称定，加 70%乙醇 40 ml,回流提取 3 h，放冷，滤过，滤液置100 ml 量瓶中，用少量 70%乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加 70%乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。2.1.2 对照品溶液的制备取 60减压干燥 4 h 的黄芩苷对照品适量置 100 ml
6、量瓶中，精密称定为 19.70 mg，加甲醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液；精密量取 3 ml 置 10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液，其浓度为 59.10 g/ml。2.1.3 缺黄芩空白溶液的制备按处方比例准确称取除黄芩以外的三颗针药材，模拟本品的制备工艺和供试品溶液的制备方法，制成缺黄芩空白溶液。42.2 色谱条件与系适用性实验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.4%磷酸水溶液（5545 ）为流动相；流速 1.0 ml/min；柱温度 30；检测波长 280 nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于 2 000。2.3 含量测定2.3.1 最大吸收波长的
7、选择分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各 10 l，进样，在 200370 nm 范围内检测，描绘吸收图。结果表明两者均在 280 nm 处有最大吸收峰，故检测波长确定为280 nm，与中国药典2005 年版部中黄芩苷 HPLC 测定波长一致。2.3.2 空白干扰实验分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液与缺空白溶液各 10 l，进样，在 280 nm 处检测，结果表明对照品溶液和供试品溶液在该波长处均有最大吸收峰，而缺黄芩空白溶液在该波长处则未见明显色谱峰出现，表明在该 HPLC 测定条件下，黄芩苷的测定无明显干扰。见图 1 3。图 1 黄芩苷色谱（略）2.3.3 线性关系及标准曲线精密量取上述
8、对照品储备溶液1，2 ，3 ， 4，5 ml 于 10 ml 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，其浓5度分别为 19.7，39.4，59.1，78.8，98.5 g/ml，精密吸取以上样品各 10 l，注入高效液相色谱仪，测得峰面积积分值。以峰面积积分值为纵坐标，进样量（g/ ml）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=61 824X+75 898，r=0.999,进样量在 19.798.5 g/ml 范围内线性关系良好。结果见表 1。图 2 供试品色谱（略）图 3 缺黄芩空白色谱（略）2.3.4 精密度实验精密吸取同份供试品溶液和对照品溶液各10 l，分别连续进样 5 次，测定峰面积积分值。结果
9、供试品 5 次测定的s=3 288 24713 837.39，RSD 为 0.42%，对照品 5 次测定的s=308 88820 200.83，RSD 为 0.66%。2.4 稳定性实验精密吸取同份供试品溶液和对照品溶液各 10 l，每隔 2 h 分别进样测定 1 次，共测定 5 次，其峰面积积分值在测定时间 8 h 内基本不变，供试品 5 次测定的 s =3 317 74826 737.84，RSD 为 0.81%，对照品 5 次测定的 s=3 038 88820 200.83，RSD 为 0.66%，表明稳定性良好。表 1 对照品测定结果 （略）62.5 重复性实验取同一批（2005041
10、0）样品 6 份，按含量测定项下，依法测定各份样品中黄芩苷的含量，结果 6 次测定的平均含量为 31.78 mg/g，其 RSD 为 2.4%，表明重复性良好。2.6 回收率实验取同批样品 5 份，加入 3.06 mg 黄芩苷（配成浓度为 1.02 mg/ml 的溶液，准确加入 3.0 ml） ，按以上方法制备各供试品溶液并测定样品中的含量，计算回收率。结果见表 2。表 2 添加法回收率实验结果 （略）2.7 样品的测定分别精密吸取对照品溶液与 3 批供试品溶液各 10 l ，注入液相色谱仪，测定，并计算各批样品中黄芩苷的含量。结果见表 3。表 3 3 批利胆胶囊中黄芩苷的含量测定结果 （略）
11、3 讨论通过方法学的系统考察和样品的含量测定，建立了本制剂中黄芩苷的 HPLC 含量测定方法，测得 3 批样品中黄芩苷的含量分别为 9.18，9.71，9.40 mg/粒，样品回收率为 100.3%，最大变异系7数为 1.90%。本标准中建立的黄芩苷 HPLC 的含量测定方法，具有专属性强、重现性好、无明显干扰等优点，是控制本品内在质量的理想方法。【参考文献】1 国家药典委员会 .中国药典，部S.北京：化学工业出版社，2005：248.2 王宝琴. 中成药质量标准与标准物质研究M.北京：中国医药科技出版社，1994：226，260，276.3 傅桂兰.HPLC 法测定黄芩及复方制剂中黄芩苷的含量J. 中国中药杂志，1994，19(12)：731.4 郭 平，李章万，蒋学华，等 .HPLC 测定 12 种中药制剂中黄芩苷含量J.药物分析杂志，1995，15(5)：13.5 成永武，薛杉春，冯中平，等.高效液相色谱法测定喉痹冲剂中黄芩苷的含量J.中成药，1994，16(9)：51.
