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1、1高效液相色谱法测定五味子浸膏中五味子醇甲与五味子乙素的含量作者：宣东平，窦志华，尤蝠仪，曹卫菊，李伟红，吴陈军【摘要 】 目的 建立五味子浸膏中五味子醇甲和五味子乙素含量测定方法。方法高效液相色谱法，采用 Lichrosphere C18 柱（4.6 mm250 mm，5m） ；流动相为水（A ） 甲醇（B）梯度洗脱（015 min， 6070%B ；1525 min，70%80 % B；25 35 min，8075 % B；3545 min，75 % B） 。流速 1.0 mlmin-1，柱温 30，检测波长 254 nm。结果五味子醇甲和五味子乙素分别在 0.182 41.641 6 g
2、（r=1.000 3）和 0.189 61.706 4 g（r=0.999 9）范围内线性关系良好，平均加样回收率分别为 98.02%和 98.42%。结论该法简便、准确、专属性强，可用于五味子浸膏的质量控制。 【关键词】 五味子浸膏； 五味子醇甲； 五味子乙素； 高效液相色谱Abstract:Objective To establish a method for the determination of schisandrin and schisandrin B in extract from fruits of Schisandra chinensis. MethodsAn HPLC me
3、thod 2was set up with Lichrosphere C18（4.6 mm250 mm，5 m）column. The Mobile phase was H2O(A) and MeOH(B). Gradient elution was with 60-70% B from 015 min, 70%-80% B from 1525 min, 80%-75% B from 2535 min, and 75% B from 35 45 min. The flow rate was 1.0 mlmin-1, the column temperature was 30 and detec
4、tion wavelength was 254 nm. ResultsThe linear ranges of schizandrin and schisandrin B were within 0.182 41.641 6 g（r=1.000 3）and 0.189 61.706 4 g（r=0 .999 9）, the average recoveries were 98.02 % % and 98.42 % respectively. ConclusionThis method is easy, sensitive, specific and accurate for the deter
5、mination of schisandrin and schisandrin B in extract from fruits of Schisandra chinensis.Key words:Extract from fruits of Schisandra chinensis; Schisandrin; Schisandrin B; HPLC五味子浸膏为北五味子 Schisandra chinensis (Turcz.) Baill.果实粉碎后的乙醇提取物，五仁醇胶囊、复方益肝灵片、肝喜乐胶囊等多种护肝降酶中成药均以此作为中间体投料。江苏省南通市第三人民医院以五味子浸膏为主要成分研制了
6、复方五仁醇胶囊，用于急慢性肝炎的治疗，取得了良好效果1 。对于五味子浸膏，除五仁3醇胶囊规定了其总木脂素含量（比色法测定）外，其余没有含量测定要求，甚至连相对密度都没有规定。为保证制剂成品质量，有必要制订切实可行的五味子浸膏质量控制标准。文献研究表明2 ，五味子醇甲、五味子乙素为重要的护肝降酶有效成分。本实验建立了反相高效液相色谱法同时测定五味子浸膏中间体中五味子醇甲和五味子乙素含量的方法。1 仪器与试药Agilent 1100 Series 高效液相色谱仪（美国惠普公司） ，包括四元梯度泵，自动进样器，VWD 检测器，ChemSation 工作站；LIBROR AEL-40SM 电子分析天平
7、（日本 SHIMADZU 公司） ；KQ-500DE 型医用数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司） ；甲醇为色谱纯(江苏汉邦科技有限公司) ，水为纯净水（杭州娃哈哈集团有限公司） ；五味子醇甲（批号 1171-040208） 、五味子乙素（批号 1173-040110）对照品购自江西南昌中药固体制剂制造技术国家工程研究中心；五味子浸膏本院制剂室提供。2 方法与结果2.1 色谱条件及系统适用性试验4色谱柱 Lichrosphere C18 柱（4.6 mm250 mm，5 m） 。流动相：水（A） 甲醇（B）梯度洗脱（015 min，60%70%B ；1525 min，70%80% B；25
8、35 min，8075 % B； 3545 min，75% B） 。流速 1.0 mlmin-1，柱温 30，检测波长 254 nm。在选定条件下，五味子醇甲、五味子乙素峰和样品中其他组分色谱峰可达基线分离，且与其他相邻色谱峰分离度大于 1.5，按五味子醇甲峰计算，理论板数在 5 000 以上。色谱图见图 1。2.2 供试品溶液的制备精密称取五味子浸膏 0.25 g，置 50 ml 量瓶中，加甲醇适量，超声处理 30 min，甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤，即得。2.3 线性关系考察精密称取五味子醇甲、五味子乙素对照品 4.56 mg，4.74 mg ，置 50 ml 量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻
9、度，分别精密吸取2，6 ，10 ，14 ，18 l 进样，测定其峰面积值，以峰面积对进样量（g）求得直线回归方程。五味子醇甲：Y=2 093.09X26.04 ，r=1.000 3，线性范围为 0.182 41.641 6 g；五味子乙素：Y =1 756.91X30.93，r=0.999 9，线性范围为 0.189 61.706 4 g。52.4 精密度实验精密吸取对照品溶液 10 l，重复进样 5 次，测定五味子醇甲、五味子乙素峰面积积分值，其 RSD 分别为 0.97%，0.81%。2.5 重复性实验取同一批号样品，按供试品溶液的制备方法平行制备 5 份，进样，测定五味子醇甲、五味子乙素
10、峰面积积分值并计算含量，其RSD 分别为 1.86%， 1.60%。2.6 稳定性实验精密吸取同一份供试品溶液 10 l，分别于0，2 ，4 ， 6，8 ，10，12 h 进样，测定五味子醇甲、五味子乙素峰面积积分值，其 RSD 分别为 1.11%，1.08%。结果表明供试品溶液在 12 h 内基本稳定。2.7 加样回收率实验 精密称取五味子醇甲、五味子乙素含量分别为 14.75 mgg-1，9.32 mgg-1 的五味子浸膏 25 mg 5 份，分别精密添加上述对照品溶液 4 ml，置 10ml 量瓶中，按“2.3” 方法制成 10 ml 供试品溶液，进样 10 l 进行测定，计算回收率。结
11、果见6表 12。表 1 加样回收率实验结果（略）2.8 样品含量测定取 3 个批号的样品，制备供试品溶液，注入液相色谱仪，测定五味子醇甲，五味子乙素峰面积，按外标法计算。结果见表 2。表 2 样品含量测定结果（略）3 讨论上述 3 批样品的五味子醇甲，五味子乙素平均含量分别为14.74，9.24 mgg-1，考虑到生产中的损耗及本次测定发现个批次之间的不平衡等问题，为保证产品质量，建议五味子浸膏中间体含五味子醇甲、五味子乙素应分别不得少于 14.00，8.50 mgg-1。本实验方法简便，准确，专属性强，可用于五味子浸膏的质量控制。【参考文献】1窦志华，施忠，李伟红，等复方五仁醇胶囊的研制J. 时珍国医国药，2005，16（10）：953，956.72王胜春，胡咏武，王俊琴，等五灵胶囊药效作用的有效成分J.第四军医大学学报，2004，25（17 ）：1587.
