结核病实验室质量保证手册

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1、中国结核病防治规划痰涂片镜检实验室质量保证点此跳到实验室生物安全目 录l前言l术语注释l第一章 绪论l第一节 目的和任务l第二节 实验室网络及职能l第二章 痰涂片检查l第一节 痰涂片检查的意义l第二节 分枝杆菌的形态和结构l第三节 检查对象l第四节 痰标本的采集、保存和运输l第五节 涂片抗酸染色检查方法l第六节 涂片抗酸染色检查材料管理目 录l第三章 痰涂片实验室质量保证l第一节 室内质量控制l第二节 室间质量评估术语注释l质量保证（Quality Assurance QA ） 是能持续提高实验室服务效率 和可信度的体系，包括室内质量控制、室间质量评估和质量提高。 l质量控制（Quality

2、Control QC ） 也称室内质量控制。包括结核 病痰涂片制作、镜检及实验室质量控制的所有方法，如仪器和染色 液的检查等。 l室间质量评估（ External Quality assessment EQA ）是根据与其它 网络实验室（中间级实验室和中心实验室）比较批量测试和盲法复 检结果，评价基层实验室能力的过程。EQA包括实验室现场评价、 操作质量评估和现场对涂片的复读。EQA是国际肺病和防痨联合会（IUATLD）描述的熟练度检测的扩大。 l质量提高（ Quality Improvement QI ） 是通过分析痰涂片镜检诊 断服务的各个组成部分，寻找能永久性清除障碍的成功过程。资料 收

3、集、分析、创意思路都是这一过程的重要部分。它涵盖了连续监 测、明确缺陷及后续改正措施，如必要时重新培训以杜绝问题再次 发生。QI常依赖于有效的现场评估。 术语注释l现场评价(On-site evaluation) 国家或地区结核病规划下 的地区督导员，常规对下级实验室的督导检查和高水平 实验室督导员的年度督导检查。 l批量测试（Panel Testing） 把已染色和/或未染色涂片 从中心或国家参比实验室送到外围或中间级实验室，以 检查读片和报告的过程。批量测试和世界卫生组织定义 的熟练度检测是等同的。 l盲法复检（Blinded-Rechecking）把涂片从某个实验室 送到另一个实验室（外

4、围、中间级或中心实验室）再次 读片。指南推荐采用盲法复检，确保控制方事先不知道 外围实验室的检查结果。其它文件中，这也被称做复读 。 l涂片阳性率（Slide positive rate SPR ） 在一定时间内一 个实验室所有受检涂片（诊断或监测涂片）中阳性涂片 的比例。 术语注释l高假阳性（High False Positive HFP）：阴性片 被错误地判读为24阳性。 l高假阴性（High False Negative HFN）：2 4阳性涂片被错误地判读为阴性。 l量化误差（Quantification Error QE）：同一张 阳性涂片受检方和控制方阳性判断级别的差异 。 l低假

5、阳性（Low False Positive LFP）：阴性涂片 被错误地判断为低阳性（1以下）。 l低假阴性（Low False Negative LFN）：低阳性 （1以下）涂片被错误地判断为阴性。 第一章 绪论为了进一步加强结核病控制工作，实 现全国结核病防治规划目标，加强直接面 视下短程化疗的技术策略和结核病细菌学 实验室质量控制，提高肺结核病人的发现 率。通过实验室细菌学诊断传染性肺结核 是实施DOTS策略的一个关键，而且对结 核病控制项目的成功起着重要的影响作用 。 第一章 绪论因此，在执行国家结核病防治规划中必须具备有效的 结核病实验室网络，一个可信的实验室必须符合成本-效 益原则

6、，并能提供准确的实验结果，为此只有通过质量 保证 (Quality Assurance，QA) 才能实现。结核病实验 室检查质量保证的一个重要组成部分就是室间质量评估 (External Quality Assurance，EQA) ，即由上一级参比 实验室经过一系列的规范性活动来监督，不断完善实验 室的质量保证程序，其质量保证有赖于国家结核病控制 规划对各级实验室检查工作的支持、培训和监督，并逐 步完善与国际接轨的质量保证管理系统。第一节 目的和任务在结核病控制工作中痰结核菌检查对于发现传染源、确定诊断和化疗方案、考核疗效、评价防治效果具有重要意义。结核病细菌学检查是国家结核病控制规划(NT

7、P) 的重要组成部分，在现代结核病控制工作中起着不可缺少的重要作用。第二节 实验室网络及职能实验室质量保证依赖于完善的实验室网 络（见图1）及职能。在国家参比实验室 的管理和监督之下，以省级参比室为中心 实验室，采用自上而下质量保证体系与同 级实验室室间质控相结合的方式，建立我 国实验室质量控制网络。网络中的各级实 验室应有效地发挥各自的职能。我国参比实验室网络SNRL：跨国参比实验室 NRL：国家参比实验室 PRL：省级参比实验室 PLL：地市级参比实验室 CLL：县级参比实验室SNRLNRLPRLPLLCLL第二节 实验室网络及职能国 家参比室省级参比室地（市） 实 验 室地（市） 实 验

8、 室县（市） 实 验 室县（市） 实 验 室县（市） 实 验 室县（市） 实 验 室第二节 实验室网络及职能国家参比实验室l制定我国各级结核病实验室痰涂片质量保证指南 与实施细则。l收集、整理、统计、分析国家室间质量控制的数 据。l组织培训国家级质控督导员。l计划、实施对下级实验室的定期督导检查。l指导、协调、评估各省（直辖市、自治区）参比 实验室室间质量评估工作。l开展我国结核病实验室室间质量评估方法的实施 性研究。 第二节 实验室网络及职能省级参比室 l根据国家参比室和省结核病控制规划的需要，制定本省 痰涂片室间质量评估实施计划。 l收集、整理、统计、分析省内室间质量评估信息、数据 ，按要

9、求定期上报国家参比实验室。 l省级参比实验室负责省内质量保证的技术支持与培训； 组织、协调、评估本省各市、县实验室室间质量评估工 作。 l负责地（市）级和部分县级结核病实验室的现场评价 (on-site evaluation) 、批量测试（Panel Testing）、随机 抽样和委托第一复检者盲法复检。 l承担地（市）级结核病实验室盲法复检的第二复检者复 检工作。 l指导、监督地（市）级实验室实施县级实验室室间质量 评估工作。 第二节 实验室网络及职能地（市）级结核病实验室 l根据国家参比室和省参比室的要求，制定本地区痰涂片 室间质量评估实施计划。 l收集、整理、统计、分析本地区内室间质量评

10、估信息数 据，定期上报省参比实验室。 l负责辖区内结核病实验室质量保证的技术支持与培训； 组织、协调、评估各县实验室的室间质量评估工作。 l做好本实验室痰涂片镜检和室内质控工作，接受省参比 室定期室间质量评估督导。 l承担同级间实验室（地、市）第一复检者盲法复检工作 。 l负责实施县级结核病实验室的现场评价、批量测试、盲 法复检和第二复检者的复检工作。 第二节 实验室网络及职能县级结核病实验室 l做好本实验室痰涂片镜检和室内质控工作，接受上一级参比室定期室间质量评估督导。l承担同级间实验室（县级）第一复检者盲法复检工作。 第三章 痰涂片实验室质量保证按照世界卫生组织(World Health

11、Organization)和国家结核病防治规划(National tuberculosis programme)的要求，在我国已全面 推行DOTS策略或DOTS策略得到良好贯彻执行 的地区，为了持续提高结核病实验室痰涂片检 查的工作效率和可靠性，必须建立我国结核病 实验室质量保证系统网络。在实验室内部质量 控制的基础上，应用实验室间质量检查和评估 的方法，进行实验室检查系统的评价，并通过 采取一系列措施改进和不断提高实验室业务总 体水平。第一节 室内质量控制室内质量控制(Quality Control，QC)指 实验室内部的操作规程、设备和耗材、痰 标本收集、染色剂制备、涂片制备和染色 、显微

12、镜维护、显微镜镜检、结果登记和 报告、以及痰片保存等整个过程的内部检 查和监测。 第一节 室内质量控制 一、痰标本收集 （一）容器：采用WHO推荐的国际通用螺旋盖痰瓶，或 可密封塑料盒、蜡纸盒收集痰标本（参考规格：直径4 厘米，高度2厘米）。痰容器应标明病人姓名、日期、 编号（初诊病人门诊序号或随访病人登记号）和容器序 号1、2、3（1当日即时痰，2夜间痰，3次日晨痰 ）。 （二）痰标本性质：干酪痰、血痰、粘液痰为合格标本； 唾液或口水为不合格标本，除照常进行涂片检查外，应 要求患者重新送检。 （三）初诊病人应收集3份痰标本（当日即时痰、夜间痰 和次日晨痰），治疗中或复诊随访病人按期每次收集2

13、 份痰标本（当日即时痰、当日或次日晨痰）。 （四）对当日不能进行涂片检查的痰标本，须置于4冰 箱保存，注意防止痰液干涸或污染。 第一节 室内质量控制二、抗酸染色液制备（一）有染色液制备配方和配制纪录。（二）染色液试剂瓶须标明染色液名称、浓度和制备时间。（三）染色液置于棕色瓶内存放，避光保存。 第一节 室内质量控制三、载玻片 （一）新载玻片应经95%乙醇脱脂，检查无划痕 后 方可使用。 （二）一张载玻片只能涂抹1份痰标本。 （三）载玻片只允许一次性使用，严禁清洗后重 复使用。 （四）载玻片正面左侧1/3处标注实验室序号(如使 用的载玻片一端无磨砂面，必须使用玻璃刻刀 注明编号；如使用的载玻片一端

14、有磨砂面，可 使用2B铅笔在磨砂面上直接书写)。 （五）载玻片正面右侧2/3中央处均匀涂抹成面积 为1020 mm的卵圆形痰膜。 第一节 室内质量控制四、染色 （一）肉眼观察染色后的痰膜应呈均匀亮蓝 色，无红色斑块。（二）将染色后的玻片放置在报纸上，如果 透过痰膜不能分辨报纸上的文字，则表明 该玻片涂抹过厚。（三）染色后的痰膜脱落部分应小于整个涂 抹面积的10%。 第一节 室内质量控制五、镜检要求 （一）为防止抗酸杆菌的交叉污染，严禁油镜头 直接接触涂片上的痰膜。 （二）仔细观察300视野。 （三）每个工作日，一名镜检人员的涂片阅读量 不应超过25张。 （四）连续阅读1012张涂片后，应休息2

15、0分钟 左右。 （五）采用自查和互查方式，至少抽查复检当日 10%涂片，并填写室内质控登记表（表2）。 表2 室内质量控制每日涂片抽查复检登记表 单位名称： 200 年1月日期镜检镜检 涂片数初检检者 签签 名抽查查复检检 涂片数痰涂片 符合数复检检者 签签 名合计计阴性阳性合计计第一节 室内质量控制六、登记报告（一）登记前应对检验单、标本盒、涂片上 的标注进行反复核对。（二）检查后的每一张涂片结果，应按规定 准确记录在“结核病细菌学实验室登记本 ”上。（三）镜检结果报告应及时发出，以便尽早 为临床提供诊断依据。 第一节 室内质量控制七、痰涂片保存 （一）镜检后的涂片应及时用浸满二甲苯 （分析

16、纯）的擦镜纸揭取数次，彻底祛除 涂片上的镜油。 （二）涂片脱去镜油后，必须再次核对实验 室登记本与每张涂片实验序号。 （三）涂片上严禁标记镜检的阴、阳性结果 。 （四）全部涂片按实验室登记本序号连续排 列，存放于玻片盒内。第一节 室内质量控制七、痰涂片保存（五）涂片保存与实验室登记本记录应保持一致 。初诊病人第一张涂片存入涂片盒后需预留出 两个空位置，以备第二张、第三张涂片检查后 放入；随访病人第一张涂片存入涂片盒后需预 留出1个空位置，以备第二张涂片检查后放入。 （六）按规定数量保存的用于室间质量评估的涂 片，未经上级质控单位准许不能自行销毁。 （七）装满涂片的玻片盒，需用标签注明涂片实 验序号区间和日期区间，以便日后盲法复检或 现场评价时抽样。 第二节 室间质量评估室间质量评估是根据与其它网络实验 室（中间级实验室和中心实验室）比较批 量测试和盲法