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1、 B B B B A AC C C C F FD DE E复习1：原核细胞的基因结构复习：真核细胞的基因结构B B B B A AC C F FD DE E 原核细胞的基因结构IMNIMN 非编码区非编码区非编码区非编码区编码区编码区编码区上游编码区上游 编码区下游编码区下游 与与RNARNA聚合酶结合位点聚合酶结合位点启动子启动子终止子终止子编码区编码区 非编码区非编码区编码蛋白质编码蛋白质 , ,连续不间断连续不间断 不编码蛋白质，有调控作用不编码蛋白质，有调控作用真核细胞的基因结构编码区编码区非编码区非编码区外显子：能编码蛋白质的序列外显子：能编码蛋白质的序列 内含子：不能编码蛋白质的序
2、列内含子：不能编码蛋白质的序列 不编码蛋白质，有调控作用不编码蛋白质，有调控作用编码区编码区非编码区非编码区非编码区非编码区启动子启动子终止子终止子编码区上游编码区上游 编码区下游编码区下游 外显子外显子 内含子内含子 与与RNARNA聚合酶聚合酶 结合位点结合位点IMNIMN一 目的基因的获取第二节 第二节 基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序IMNIMN ( (一一) )目的基因：目的基因：编码蛋白质的结构基因；编码蛋白质的结构基因；( (二二) )获取目的基因的常用方法获取目的基因的常用方法 从自然界已有的物种中分离从自然界已有的物种中分离 用人工的方法合成用人工的方法合成1 1
3、. . 从基因文库中获取目的基因从基因文库中获取目的基因 (1)(1)基因文库的概念基因文库的概念将含有某种生物将含有某种生物不同基因不同基因的许多的许多DNADNA片段片段, ,导入导入 受体菌的群体中储存受体菌的群体中储存, ,各个受体菌分别含有这种各个受体菌分别含有这种 生物的不同的基因生物的不同的基因, ,称为基因文库。称为基因文库。(2)(2)基因文库的类型基因文库的类型 基因组文库和部分基因文库基因组文库和部分基因文库(3)(3)基因文库的构建基因文库的构建析析1 1 反转录法反转录法 mRNAmRNAcDNAcDNA ( (互补互补DNA)DNA)双链双链DNADNA反转录酶反转
4、录酶DNADNA聚合酶聚合酶析析2 2 如何从基因文库如何从基因文库 中得到所需要的基因中得到所需要的基因依据目的基因的有关信息依据目的基因的有关信息IMNIMN(1) (1) PCRPCR聚合酶链式反应聚合酶链式反应是一项生物是一项生物体外复制体外复制特定特定DNADNA片段的片段的核酸合成核酸合成 技术技术。通过此技术，可在。通过此技术，可在短时间短时间内获取内获取大量大量的的 目的基因。目的基因。2 2. . 利用利用PCRPCR技术扩增目的基因技术扩增目的基因模板模板DNADNA；合成引物；合成引物； 四种脱氧核苷酸；四种脱氧核苷酸；DNADNA聚合酶等。聚合酶等。(2)(2)原理：原
5、理： DNADNA双链复制双链复制 (3)(3)前提前提： 一段已知目的基因的核苷酸序列一段已知目的基因的核苷酸序列 (4)(4)条件条件：(5) (5) 过程：过程：变性、退火、延伸三步曲变性、退火、延伸三步曲(6)(6)结果结果：以指数形式扩增以指数形式扩增变性变性退火退火延伸延伸3 3. . 通过通过DNADNA合成仪用化学的方法直接人工合成合成仪用化学的方法直接人工合成若基因_，核苷酸序列_ 。较小已知1 1. .作用作用 使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给 子代子代 同时使目的基因能表达和发挥作用同时使目的基因能表达和发挥作用二 基因表达载体
6、的构建核心IMNIMN目的基因目的基因2 2. .组成组成启动子启动子 终止子终止子 标记基因标记基因三 将目的基因导入受体细胞（一一）转化：）转化： 目的基因进入目的基因进入_内，并且在内，并且在 受体细胞内维持受体细胞内维持_和和_的过程的过程受体细胞受体细胞 稳定稳定表达表达 （二二）方法：）方法： 1.1.将目的基因导入微生物细胞将目的基因导入微生物细胞3 3）常用法：）常用法：2 2）常用菌：）常用菌：1 1）微生物作受体细胞原因：）微生物作受体细胞原因： 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少4 4）过程：）过程：CaCa2+2+处理处理 大肠杆菌大肠
7、杆菌感受态感受态 细胞细胞表达载体表达载体 与感受态与感受态 细胞混合细胞混合感受态细胞感受态细胞 吸收吸收DNADNA大肠杆菌大肠杆菌CaCa2+2+处理处理2.2.将目的基因导入植物细胞将目的基因导入植物细胞 1 1）农杆菌转化法）农杆菌转化法 特点特点: : 过程：过程：能感染能感染双子叶植物双子叶植物和和祼子植物祼子植物, ,对单子叶植物无对单子叶植物无 感染能力感染能力TiTi质粒的质粒的TDNATDNA可转移至受体细胞并整合到其染色体上可转移至受体细胞并整合到其染色体上提纯含目的基提纯含目的基 因表达载体因表达载体取受精卵取受精卵显微注射显微注射培养成早期胚胎培养成早期胚胎发育成新
8、性状动物发育成新性状动物3.3.将目的基因导入动物细胞将目的基因导入动物细胞显微注射技术显微注射技术 1 1）细胞类型：）细胞类型： 2 2）操作程序）操作程序: :移植到子宫或输卵管移植到子宫或输卵管导入过程完成后，全部受体细胞都能摄入重组导入过程完成后，全部受体细胞都能摄入重组 DNADNA分子吗？分子吗？四 目的基因的检测与鉴定检查是否成功真正能摄入重组真正能摄入重组DNADNA分子的受体细胞很少。分子的受体细胞很少。 目的基因进入受体细胞后，是否都能稳定维持目的基因进入受体细胞后，是否都能稳定维持 和表达？和表达？ 不一定不一定受精卵受精卵1 1. .检测检测 1 1）检测转基因生物染
9、色体的）检测转基因生物染色体的DNADNA上是否插入了上是否插入了 目的基因目的基因 方法方法 基因探针：基因探针：1515N N1515N N1 14 4N N1 14 4N N探针探针转基因生转基因生 物的物的DNADNA变性变性变性变性DNADNA分子杂交技术分子杂交技术 放射性同位素等标记的放射性同位素等标记的DNADNA分子分子2 2）检测目的基因是否转录出了）检测目的基因是否转录出了mRNAmRNA 方法方法分子杂交技术分子杂交技术1515N N1515N N1 14 4N N1 14 4N N探针探针转基因生物转基因生物 的的mRNAmRNA变性变性3 3）检测目的基因是否翻译成
10、蛋白质）检测目的基因是否翻译成蛋白质 方法方法抗原抗原- -抗体杂交抗体杂交2 2. .鉴定鉴定个体生物学水平的鉴定个体生物学水平的鉴定 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等(2) 动植物细胞 除去内含子石器时代石器时代SF http:/www.shiqi.so/gongluecw.html SF http:/www.shiqi.so/gongluecw.html 石器时代石器时代SFSF容凌娢一副视死如归的样子，容凌娢一副视死如归的样子，“士可杀，不可辱！要杀要刮随你便，总比在这里干活还被人欺负要好。士可杀，不可辱！要杀要刮随你便，总比在这里干活还被人欺负要好。”“”
11、“干嘛这么激动，我没有生气啊。干嘛这么激动，我没有生气啊。 ”“”“没有生气还把我搞到这里来刷碗没有生气还把我搞到这里来刷碗”慕容凌娢的肚子不争气的叫了起来慕容凌娢的肚子不争气的叫了起来(古风一言古风一言) )点朱砂，笔书华，戎马难忘镜中花。第点朱砂，笔书华，戎马难忘镜中花。第026026章章 风风 俗习惯不同而已俗习惯不同而已“咕噜噜咕噜噜”“”“还没吃东西吗？还没吃东西吗？”“”“这不是废话嘛！这不是废话嘛！”慕容凌娢没好气的说。慕容凌娢没好气的说。“给，专门给你留的。给，专门给你留的。”百蝶从袖子中拿出了百蝶从袖子中拿出了 一个小布袋，递给了慕容凌娢，一个小布袋，递给了慕容凌娢，“应该还
12、是热着的。应该还是热着的。”慕容凌娢打开袋子，里面是两个还冒着淡淡热气的馒头。慕容凌娢打开袋子，里面是两个还冒着淡淡热气的馒头。“就只有这个吗？就只有这个吗？”慕容凌娢慕容凌娢 看百蝶的眼神完全变了，她已经被百蝶的食物看百蝶的眼神完全变了，她已经被百蝶的食物“驯化驯化”了。了。“人不要太贪得无厌了，你还想要什么？人不要太贪得无厌了，你还想要什么？”“”“有木有老干妈？辣条也行啊。有木有老干妈？辣条也行啊。”慕容慕容 凌娢狼吞虎咽地吃着馒头，还在死皮赖脸的讨价还价。凌娢狼吞虎咽地吃着馒头，还在死皮赖脸的讨价还价。“干吃馒头很不好吃啊。干吃馒头很不好吃啊。”“”“那你怎么还吃？那你怎么还吃？”“”
13、“因为饿。因为饿。”“”“你慢慢吃吧，我先回去你慢慢吃吧，我先回去 了。了。”百蝶看了看放在慕容凌娢身旁的盘子，百蝶看了看放在慕容凌娢身旁的盘子，“那些被打碎的盘子我就不在追究了，至于其它的盘子和碗那些被打碎的盘子我就不在追究了，至于其它的盘子和碗今晚必须刷完。今晚必须刷完。”“”“嗯嗯纳尼纳尼 ？”慕容凌娢赶忙将嘴里的馒头咽了下去，差点没有噎出眼泪来。慕容凌娢赶忙将嘴里的馒头咽了下去，差点没有噎出眼泪来。“百蝶姐姐你百蝶姐姐你这真的不是我打碎的这真的不是我打碎的”百蝶丝毫不理会慕容凌娢的解百蝶丝毫不理会慕容凌娢的解 释，头也不回的走了，独自留慕容凌娢在风中凌乱。释，头也不回的走了，独自留慕容
14、凌娢在风中凌乱。“笨蛋，白痴，心机笨蛋，白痴，心机girl”girl”慕容凌娢不停地小声嘀咕，慕容凌娢不停地小声嘀咕，“居然还分楼主，层主，不就居然还分楼主，层主，不就 是变向的中二病吗是变向的中二病吗如果你是楼主，我还是吧主呢！如果你是楼主，我还是吧主呢！”说归说，慕容凌娢还是得老老实实的刷碗。说归说，慕容凌娢还是得老老实实的刷碗。(第二天第二天)“)“天哪，那个小女孩居然真天哪，那个小女孩居然真 的把碗给刷完了。的把碗给刷完了。”“”“估计是在这里待了一晚上吧。估计是在这里待了一晚上吧。”“”“真是太不可思议了！真是太不可思议了！”“”“”慕容凌娢依在墙边已经睡着了，根本就没有听见这些慕容
15、凌娢依在墙边已经睡着了，根本就没有听见这些 人的议论。人的议论。“白绫，白绫，醒醒啊！白绫，白绫，醒醒啊！”若曦走过去晃了晃慕容凌娢。若曦走过去晃了晃慕容凌娢。“唔唔让我再睡一会让我再睡一会”慕容凌娢小声哼唧，以为自己还在家里，想慕容凌娢小声哼唧，以为自己还在家里，想 要再赖会儿床。要再赖会儿床。“白绫，赶快起来吧！白绫，赶快起来吧！”若曦也没有什么办法，只好推了慕容凌娢一下。慕容凌娢刚想要再次入睡，结果身子一歪，倒了下来若曦也没有什么办法，只好推了慕容凌娢一下。慕容凌娢刚想要再次入睡，结果身子一歪，倒了下来 。“啊！啊！”慕容凌娢被突然惊醒了，慕容凌娢被突然惊醒了，“是谁推我的！是谁推我的！”“”“白绫，对不起呀。白绫，对不起呀。”若曦抱歉的说道，若曦抱歉的说道，“我看你怎么叫也叫不醒，所以就推了你一下我看你怎么叫也叫不醒，所以就推了你一下 。没摔疼吧？。没摔疼吧？”“”“没没没事。没事。”慕容凌娢不好意思的笑了笑，慕容凌娢不好意思的笑了笑，“我还以为今天是星期天呢我还以为今天是星期天呢”“”“星期天？什么意思？星期天？什么意思？”“”“这个这个这个是这个是 我们那里计
