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1、锌和维生素E对糖尿病大鼠内皮细 胞保护作用的研究苏晨皓 崔玉山 于博 马建伟原理糖尿病血管并发症是糖尿病患者的主要死因。 目前认为内皮细胞功能紊乱是糖尿病血管并发 症的基础。 前列腺环素(PGI2)和血栓素A2 (TXA2)和内皮素 (ET)是血管内皮细胞分泌的血管活性物质，参 与内皮功能调节。糖尿病时，高血糖引起的氧 化应激参与血管内皮功能紊乱。锌和维生素E是 抗氧化剂并具有细胞保护作用。本实验旨在探 讨两者对糖尿病大鼠氧化应激和血浆PGI2, TXA2 和ET的影响。主要试剂与仪器链脲佐菌素(STZ) :美国Sigma公司产品; ZnSO47H2O:北京双环化学试剂厂，分析纯; 干酪素:北
2、京双旋微生物培养基制品厂，生化试剂; I125 -胰岛素放射免疫试剂盒、I125 -内皮素放射免疫试剂盒 、 I125 -6 -酮-前列腺素F 1放射免疫试剂盒、 I125 -血栓素B2放射免疫试剂盒:北京东雅生物技术研究所; 血清丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(T - AOC)试剂盒:南京建 成 生物制品研究所产品； SBA- 40C生物传感分析仪，山东省科学院生物研究所; SN一682放射免疫计数仪，上海。动物模型建立及分组雄性SD大鼠50只，体重140-150 g。动物适应性喂养一周，按体重随 机 分为正常对照组(10只)和实验组(40只)，各组大鼠禁食12h后，实验组 大 鼠以60 m
3、g/kgbw)的剂量一次性腹腔注射STZ溶液(用0.1 mol/L, pH = 4.4的枸橼酸盐缓冲液在冰浴下配制成11 mg/ml的STZ溶液)，正常对 照 组大鼠(NC)注射等体积的枸橼酸盐缓冲液。观察动物饮水、进食及尿 量 变化等情况。一周后，采尾血测血糖，以血糖浓度16.6mmol/ L，饮 水 量40 ml/d，尿糖强阳性(+)的大鼠作为糖尿病大鼠。选 取 糖尿病大鼠36只按血糖值参考体重分为4组:糖尿病对照组(DM)，糖尿 病 补锌组(DM十Zn)，糖尿病补VE组(DM + VE)，糖尿病补Zn和VE组(DM +Zn+ VE)。动物模型建立及分组各组动物均喂饲人工合成饲料，合成饲料
4、控制锌浓度为20 mg/kg。正常对照组和DM组给予去离子水;补Zn组给予Zn 浓 度为20 mg/L的含ZnSO47H2O去离子水;补VE组每天以50 mg/kg VE灌胃;Zn和VE联合补充组在给予Zn浓度为20 mg/L 的含ZnSO47H2O去离子水的同时以50 mg/kg VE灌胃。实 验 期间，密切观察动物进食和饮水量变化，每周称两次体重 ,6 周末时，戊巴比妥麻醉，股动脉取血，测定有关指标。方法测定指标：全血血糖测定，血清丙二醛(MDA)、超氧化 物歧化酶 (SOD)以及总抗氧化能力(T-AOC)测定，血清 胰岛素、血浆血栓素B2 (TXB2 ) , 6 -酮-前列腺素F 1 （
5、6- k-PGF1 )和内皮素(ET)测定。 质量控制：实验用鼠笼、食盒及配饲料用具均用 1%EDTANa2 (乙二胺四乙酸钠)溶液浸泡，配制饲料时 戴口罩和一次性手套，防止锌污染。每天清洁实验室， 保持室温2025，湿度40%60%。注：1%EDTANa2用于消除实验用具和饲养环境中混入 锌元素的影响。 统计分析：采用分析软件进行多组间比较的方差分析。总结受试对象：糖尿病大鼠 处理因素：锌和维生素E实验中应保持处理因素恒定不变，并 尽量排除混杂因素的干扰作用。 实验效应：可通过全血血糖、 MDA、 SOD、 T-AOC、血清胰岛素、 TXB2 、 6-k- PGF1 和ET等指标来体现。 分 组：在对36只糖尿病大鼠进行分组时可采用随机区组设计的方法，按血糖值参考体重将其分为4组。
