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1、碱性磷酸酶提取Alkaline phosphatase （AKP）(有机溶剂沉淀法)原理：乙醇、丙酮、正丁醇等有机溶剂可以通过降低介质的介电常数及对酶蛋白的脱水作用而降低酶的溶解度。含有ALP的滤液在终浓度33%的丙酮或终浓度30%的乙醇中是溶解的，而在终浓度50%的丙酮或终浓度60%的乙醇中则不溶解，通过离心，可使AKP得到部分纯化。操作步骤：2克兔肝于 研钵中剪碎加0.01M醋酸镁- 0.01M醋酸钠6ml研磨2-3分钟转移入刻度 离心管于离心管中加 2ml正丁醇， 用玻棒充分搅 拌2分钟左右室温静置20分钟用滤纸过滤滤液 (V)弃渣滤液 (V) 加入等体积冷丙酮， 立即混匀后离心（ 20
2、00转/分）5分钟上清液沉淀AKP在终浓度33% 的丙酮或终浓度30% 的乙醇中溶解AKP在终浓度50% 的丙酮或终浓度60% 的乙醇中不溶解加入0.5M醋酸镁4ml, 用玻棒充分搅拌, 记录体积(V1)向溶液中缓慢加入 95%冷乙醇X1ml (X1=0.46V1)?,使乙 醇终浓度达30%向溶液中缓慢加入 95%冷乙醇X1ml (X1=0.46V1)使乙 醇终浓度达30% 混匀后离心（ 2000转/分） 5 分钟上清液(V2)沉淀加入冷95%乙醇 X2ml(X2=0.857V2)?,使 乙醇最终浓度达60%AKP在终浓度33% 的丙酮或终浓度30% 的乙醇中溶解AKP在终浓度50% 的丙酮或终浓度60% 的乙醇中则不溶解混匀后离心（ 2000转/分） 5 分钟上清液沉淀加0.5M醋酸镁 3ml充分溶解取0.1ml +pH8.8Tris缓冲 液1.0 ml(C液）C液以班为单位储存 于-20 冰箱保存。离心机的使用 1.平衡2. 对称3. 加盖，缓慢加速4. 等离心机完全停 止，方可开盖取出 试管
