RhD(-)血型的研究进展

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1、RhD(-)血型的研究进展合肥市红十字会中心血站 吕蓉2008-5RH血型的研究历史n19世纪40年代发现了人类红细胞RH血型n19世纪60年代,发现了RH血型不合的有 效治疗方法n19世纪80年代,成功分离了RH蛋白n19世纪90年代,认识了RH基因结构n20世纪90年代,清楚了RHD和RHCE的氨 基酸序列RH血型系统的发现n1940年,发现多数人红细胞上有一种血型抗原 物质,与恒河猴（Rhesus monkey)红细胞的抗原 物质是相同的.n1940年还发现,三例ABO血型相同，同种输血 后却发生了严重的输血反应.n同一年，一名O型孕妇产后大出血，输入O型 丈夫的血液后发生了溶血性输血反

2、应，这是人 类由于妊娠产生的同种免疫作用的第一例报告n这就表明除ABO血型系统外,还存在另外的血 型系统.RH血型系统的命名n“Rh”是根据恒河猴英语单词的前两位字母而由 来n我们现在通常把红细胞上含有D抗原的称为 RH阳性，而不含有D抗原的称为RH阴性nRH系统还有C、c 、E 、e 四种抗原，也有用1 、2、3、4、5来表示，D+红细胞有用RH1表 示，而D-细胞用RH-1来表示，相应的等位基 因用R1和R-1来表示RH血型的意义n临床意义很大!nRH阴性的个体在亚洲汉族人当中很稀有,比率 为0.3%左右,在欧美等白种人中,比例较高为 15%左右.nRH血型不合的输血,有可能产生危及生命的

3、溶 血性输血反应,母子RH血型不合的妊娠有可能 发生新生儿溶血病,严重者可导致新生儿死亡, 或是使胎儿死于子宫内.nRH血型的检查和ABO血型同等重要,已被列为 血型的常规检查之一.RH血型是如何遗传的?nRH(-)基因是隐性基因.n当RH阳性的父母都带有RH阴性基因,且 同时遗传给后代时,其后代即表现为RH 阴性.n当双亲中有一人是RH(-)时,其子女为RH( -)的机会增大.RHD(-)有何意义?n正常RH阴性者，血浆中不含抗-D抗体，所以 当RH阴性的人第一次输入RHD阳性血液时， 不会发生凝集反应，但此时RH阴性者却会由 于各种免疫而产生抗D抗体，当再次输入RHD 阳性的血液时，就发生

4、严重的输血反应甚至造 成死亡.nRH阴性的妇女怀有RH阳性的胎儿,胎儿的红细 胞就会刺激母体产生抗-D抗体,当再次怀有 RHD阳性的胎儿时,就会导致新生儿溶血性贫 血而死亡.RHD(-)者如何自我保护?nRH阴性者在任何情况下都不能输入RH阳性的 血液，必须输注相同的RH阴性血，以免由于 RH不合而发生输血反应。80%的RH阴性病人 在输入200MLD阳性红细胞后,在2-5个月后,血 浆中可检测到抗体.nRH阴性的妇女应注意婚后避免流产，保证第 一胎正常分娩，以防发生RH新生儿溶血病。 有资料统计14.3%的多次妊娠的D阴性孕妇产 生抗-D抗体，导致新生儿溶血病。血站为RHD(-)者做哪些工作

5、?n常年在数以万计的供血人群中筛选RHD( -)的供者n对有流产史的RH阴性的妇女，在妊娠初 期做一些关于RH血型系统的产前免疫检 查。n一旦发生RH新生儿溶血病，在新生儿刚 生下来就要立即用RH阴性的同型血液进 行换血治疗，挽救新生儿的生命。表型与D抗原nRh阳性和Rh阴性n弱D和部分D（弱D表现型）nD放散型（Del、DEL）弱D型(Weak D)n血清学表现为盐水介质阴性,IAT检测为 阳性.nD抗原数量的减少,但抗原表位数目基本 不变.抗原的质量不变n碱基突变形成，改变的氨基酸位于细胞 膜层的中间或细胞膜层内部分D(Partial D)n红细胞缺少某些（部份）的抗原表位n与正常抗原相比

6、，抗原的质量发生了变化.( 正常红细胞上抗原包含个表位）n形成原因：基因单或多核苷酸碱基取代、 杂交基因。 n所改变的氨基酸位于抗原分子的细胞膜外 部分.部分的危险在哪？n许多部分的红细胞与抗直接反应 ，但有些需要用才能鉴定，细胞 的反应强度不一样，取决于试剂的制造 商n部分的个体是可以产生抗，因此 必须接收的血液，在日常工作中许 多部分都被定为，往往在产生抗 体以后才被发现DEL型(D 放散型)n盐水介质阴性,IAT检测阴性,但吸收放散 试验阳性.n红细胞上D抗原数目比弱还要少,红细 胞上D抗原的质量也有变化的n某些型红细胞抗原缺失某些表 位，可以产生抗抗体.n第九外显子碱基突变形成.典型的

7、抗原密度比较抗原型别红细胞上抗原数 正常阳性个体10.000 - 30.000 部分型个体 Weak D 型个体 DEL 型个体RHD基因进化nRHAGnRHcenRHce和RHce复制体nRHCE基因和RHD基因RHD基因的进化nRHD基因的祖先基因是Rh 相关糖蛋白基因(RHAG 基因),该蛋白 有一条N多糖链.RHAG和RHD、RHCE有38%的同源性，在红细 胞上具有相同的拓扑结构，由位于6号染色体上的单个基因编码 。RHAG不具有多态性，所以它不携带血型抗原，但是它对RHD 和RHCE定向到膜上有重要作用。没有RHAG，RHCE和RHD都 不能表达到红细胞膜上.在红系的分化中先表达R

8、HAG,然后表达 RHCE,再表达RHD.nRHAG基因首先复制形成Rhce基因, 第二次复制发生在同一染色 体短臂,形成“Rhce 复制体”,随后Rhce基因 和其复制体沿不同的 途径进化,最终形成现今人类的RHD基因,而RHce 基因经过突变 或与RHD基因发生交换形成常见的Rhce RHcE RHCe RHCE基 因.RhD基因结构nRH基因结构目前已确定:位于染色体1p34.3-36.1,主要由RHD和 RHCE两个基因组成.这两个基因的 3, 端相对,相隔约有 3万bp.在 它们之间为小膜蛋白1基因(SMP1),即SMP1基因.n在RHD基因两侧各有一段约9000bp 的侧翼序列片段

9、,称为RH盒 子(Rhesus box )序列,5端为上游R盒子(Upstream),长9142bp ,3端 为下游R盒子(Downstream Rhesus box),长为9145bp ,上下游盒子方 向相同,与RHD基因一致.nRHD和RHCE基因各由10个外显子组成,二者有43个碱基有差异, 其中第1、2 、8外显子序列基本一致，所以绝大多数RHD基因测 定中，引物选择扩增RHD基因的3-7以及9-10外显子。n通常只有D抗原阳性个体拥有一或二条RHD基因，而D阴性个体 则缺失RHD基因，RHD阴性个体的RHD基因缺失发生在上下游 盒子之间，并形式一个融合（Hybrid Rhesus b

10、ox)。RHD基因locusRH 和基因结构图1p36.11RHD等位基因的形成n基因缺失：RHD基因完全缺失形成RHD(-)单 倍体；n基因交换：由于RHD基因和RHCE基因在RH 座位上方向相反，二个同源基因之间发生交 换的机率增大，通常RHCE基因为供者基因 ，RHD为受者基因；n碱基变异：包括突变、缺失、mRNA拼接位 点变异等。 近几年的研究发现n D基因结构存在种族差异,RhD(-)白种人中 ,D基因是完全缺失的.n在黑人中,RHD（-）个体，D基因却完整存 在，66%的D基因在第3内含子和第4外显 子之间有37bp的插入片断，导致了抗原的 不表达。n黄种人中RhD(-)个体表现出

11、明显的多态性.黄种人D基因的多态性nD基因完全缺失(10个外显子全部缺失)导 致了D抗原的不表达.nD基因的部分缺失,(有两边缺失和中间缺 失)导致D抗原的不表达.nD基因完整存在,(碱基突变),导致D抗原 不表达.RHD基因阳性、D抗原阴性等位基因基因交换形成的融合等位基因RHD基因阳性、D抗原阴性等位基因碱基变异形成的等位基因Del等位基因 all DEL alleles are associated with CeK409K又叫1227A,指第九外显子最后一个 基因GA突变，也是第九外显子与第九 内含子拼接位点的碱基突变，虽然 位置氨基酸末改变，但是剪接点突变 导致产生了不正常的抗原弱D

12、等位基因（种）部分D等位基因中国人RhD分子背景中国人RhD分子背景nD阳性个体的RHD基因与在其它民族中报道的正 常RHD基因序列相同；n真实D阴性中国人中以RHD-CE(2-9)-D2等位基 因为主，比率为10.5%；n同时还存在比率不低的个体因碱基变异导致 RHD基因ORF错位，导致正常D抗原不能表达。n在真实D阴性中国人中RHD基因总阳性率为 15.8%中国人RhD分子背景n中国人Del个体主要携带RHD 1227A等位基因 (K409K)。该等位基因是Genbank收录的第一个 Del等位基因 (GenBank记录AF390110)，但也是中 国人中唯一发现的Del等位基因，而在欧洲

13、人中 除RHD1227A等位基因外，还观察到另外几种Del 等位基因n弱D表型个体目前发现主要是弱D15型、还发现 了2例RHD 1227A等位基因携带者；n部分D表型观察到DVa(Hus)和DVI III型。 中国人RHD等位基因RHD基因分型技术的应用n血清学定型结果难以判定,为了防止某些 弱D被误定为RH-,用分子生物学检测作为 辅助手段；nD抗原弱阳性个体的弱D型或部分D型别的 鉴定；n通过羊水预测胎儿的D表型；n慢性多次输血患者、大量输血患者、同种 免疫或自身免疫溶血性贫血患者、以及红 细胞直接抗球蛋白实验阳性患者的D抗原 表型的检测和纠正；n对于中国人，鉴定Del表型 中国人RHD

14、的未来研究方向 n真实D阴性个体RHD基因序列研究，进一 步了解产生中国人D抗原阴性的特性分子 机制，发现更多的RHD等位基因 ：nD抗原弱表现型个体的分子背景研究，用 以了解中国人弱D和部分D表型的常见型及 频率。目前在中国人中观察到的弱D型是 弱型和二种部分D型，而国际上报 道的弱D型确有很多种，而不同分子机制 形成的其它部分D表型也很多中国人RHD的未来研究方向n有关Del研究，Del在中国人中比率非常高 ，综合近几年的文献，在经IAT确认的D 阴性群体中平均为28.1%。尽管目前国 家没有要求DEL型血液不能供应给临床, 但是从理论上来讲,DEL型是有可能刺激 机体产生抗体的。n稀有血型的分子生物学研究和调查。 感谢各位专家和同 行！