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1、草业科学专业毕业论文草业科学专业毕业论文 精品论文精品论文 苜蓿干旱诱导相关基因的克苜蓿干旱诱导相关基因的克隆和功能分析隆和功能分析关键词：苜蓿关键词：苜蓿 抗旱性抗旱性 DDRT-PCRDDRT-PCR 杂交技术杂交技术 基因克隆基因克隆摘要：本试验以公农三号根蘖型苜蓿为试验材料。经过温室条件下盆栽试验和 人为干旱条件的施加，用 mRNA 差异显示技术分析干旱胁迫下苜蓿基因表达与正 常供给水分的苜蓿基因表达的差异片断。通过斑点杂交技术筛选得到的基因片 断，得到差异片断后对其进行序列测定和分析等研究，得到以下结果： 1、 由于苜蓿具有扦插易成活的特性，在温室条件并且水分温度控制适当的情况下，
2、无性扦插苜蓿的成活率可以达到 90。故利用盆栽和无性繁殖得到同一株系的 植株，采用不同的处理和梯度来进行胁迫，并用分子生物学的方法进行分析， 是对苜蓿进行基因表达研究一项可行的方案。这种方案比较对同一植株在逆境 施加前后分别取样来进行分析比较，尤其是当胁迫处理需要较长时间的时候或 者试验对象生命周期比较短的情况下，可以有效地降低由于生育阶段改变而造 成的假阳性。 2、苜蓿在进行一段时间的干旱胁迫后，会出现基因的差异表 达。在对苜蓿进行半个月的萎蔫-复原胁迫。诱导苜蓿基因中的抗旱基因表达。 通过 RNA 的提取和 mRNA 差异显示技术筛选一共得到苜蓿的差异表达片断 32 条。 干旱胁迫诱导了公
3、农三号根蘖型苜蓿抗逆机制的表达。 3、建立苜蓿基因差 异表达研究体系。理论上，通过简并的 3 条锚定引物和 8 条随机引物，即能够 覆盖所有的 mRNA，扩增出所有的 mRNA 片断，本试验利用 3 条锚定引物和 10 条 随机引物组合，通过 DDRT-PCR 方法研究正常和干旱胁迫下苜蓿的基因差异表达。 并通过 Reverse Northern 杂交技术有效地筛选和排除 DDRT-PCR 技术得到的真、 假阳性片断。 4、通过 DDRT-PCR 技术和 Reverse Northern 技术结合，筛选 得到三条苜蓿受干旱胁迫后差异表达的基因片断。经过克隆和基因序列测定， 互联网基因数据库比对
4、。其中，一个与基因库中拟南芥水通道蛋白(water channel)控制基因同源性达到 99，为干旱诱导表达的重要基因。另外两个基 因片断与其它基因的同源性都比较低，可能为干旱诱导表达的新基因，有待进 一步研究。正文内容正文内容本试验以公农三号根蘖型苜蓿为试验材料。经过温室条件下盆栽试验和人 为干旱条件的施加，用 mRNA 差异显示技术分析干旱胁迫下苜蓿基因表达与正常 供给水分的苜蓿基因表达的差异片断。通过斑点杂交技术筛选得到的基因片断， 得到差异片断后对其进行序列测定和分析等研究，得到以下结果： 1、由于 苜蓿具有扦插易成活的特性，在温室条件并且水分温度控制适当的情况下，无 性扦插苜蓿的成活
5、率可以达到 90。故利用盆栽和无性繁殖得到同一株系的植 株，采用不同的处理和梯度来进行胁迫，并用分子生物学的方法进行分析，是 对苜蓿进行基因表达研究一项可行的方案。这种方案比较对同一植株在逆境施 加前后分别取样来进行分析比较，尤其是当胁迫处理需要较长时间的时候或者 试验对象生命周期比较短的情况下，可以有效地降低由于生育阶段改变而造成 的假阳性。 2、苜蓿在进行一段时间的干旱胁迫后，会出现基因的差异表达。 在对苜蓿进行半个月的萎蔫-复原胁迫。诱导苜蓿基因中的抗旱基因表达。通过 RNA 的提取和 mRNA 差异显示技术筛选一共得到苜蓿的差异表达片断 32 条。干 旱胁迫诱导了公农三号根蘖型苜蓿抗逆
6、机制的表达。 3、建立苜蓿基因差异 表达研究体系。理论上，通过简并的 3 条锚定引物和 8 条随机引物，即能够覆 盖所有的 mRNA，扩增出所有的 mRNA 片断，本试验利用 3 条锚定引物和 10 条随 机引物组合，通过 DDRT-PCR 方法研究正常和干旱胁迫下苜蓿的基因差异表达。 并通过 Reverse Northern 杂交技术有效地筛选和排除 DDRT-PCR 技术得到的真、 假阳性片断。 4、通过 DDRT-PCR 技术和 Reverse Northern 技术结合，筛选 得到三条苜蓿受干旱胁迫后差异表达的基因片断。经过克隆和基因序列测定， 互联网基因数据库比对。其中，一个与基因库
7、中拟南芥水通道蛋白(water channel)控制基因同源性达到 99，为干旱诱导表达的重要基因。另外两个基 因片断与其它基因的同源性都比较低，可能为干旱诱导表达的新基因，有待进 一步研究。 本试验以公农三号根蘖型苜蓿为试验材料。经过温室条件下盆栽试验和人为干 旱条件的施加，用 mRNA 差异显示技术分析干旱胁迫下苜蓿基因表达与正常供给 水分的苜蓿基因表达的差异片断。通过斑点杂交技术筛选得到的基因片断，得 到差异片断后对其进行序列测定和分析等研究，得到以下结果： 1、由于苜 蓿具有扦插易成活的特性，在温室条件并且水分温度控制适当的情况下，无性 扦插苜蓿的成活率可以达到 90。故利用盆栽和无性
8、繁殖得到同一株系的植株， 采用不同的处理和梯度来进行胁迫，并用分子生物学的方法进行分析，是对苜 蓿进行基因表达研究一项可行的方案。这种方案比较对同一植株在逆境施加前 后分别取样来进行分析比较，尤其是当胁迫处理需要较长时间的时候或者试验 对象生命周期比较短的情况下，可以有效地降低由于生育阶段改变而造成的假 阳性。 2、苜蓿在进行一段时间的干旱胁迫后，会出现基因的差异表达。在 对苜蓿进行半个月的萎蔫-复原胁迫。诱导苜蓿基因中的抗旱基因表达。通过 RNA 的提取和 mRNA 差异显示技术筛选一共得到苜蓿的差异表达片断 32 条。干 旱胁迫诱导了公农三号根蘖型苜蓿抗逆机制的表达。 3、建立苜蓿基因差异
9、 表达研究体系。理论上，通过简并的 3 条锚定引物和 8 条随机引物，即能够覆 盖所有的 mRNA，扩增出所有的 mRNA 片断，本试验利用 3 条锚定引物和 10 条随 机引物组合，通过 DDRT-PCR 方法研究正常和干旱胁迫下苜蓿的基因差异表达。 并通过 Reverse Northern 杂交技术有效地筛选和排除 DDRT-PCR 技术得到的真、假阳性片断。 4、通过 DDRT-PCR 技术和 Reverse Northern 技术结合，筛选 得到三条苜蓿受干旱胁迫后差异表达的基因片断。经过克隆和基因序列测定， 互联网基因数据库比对。其中，一个与基因库中拟南芥水通道蛋白(water ch
10、annel)控制基因同源性达到 99，为干旱诱导表达的重要基因。另外两个基 因片断与其它基因的同源性都比较低，可能为干旱诱导表达的新基因，有待进 一步研究。 本试验以公农三号根蘖型苜蓿为试验材料。经过温室条件下盆栽试验和人为干 旱条件的施加，用 mRNA 差异显示技术分析干旱胁迫下苜蓿基因表达与正常供给 水分的苜蓿基因表达的差异片断。通过斑点杂交技术筛选得到的基因片断，得 到差异片断后对其进行序列测定和分析等研究，得到以下结果： 1、由于苜 蓿具有扦插易成活的特性，在温室条件并且水分温度控制适当的情况下，无性 扦插苜蓿的成活率可以达到 90。故利用盆栽和无性繁殖得到同一株系的植株， 采用不同的
11、处理和梯度来进行胁迫，并用分子生物学的方法进行分析，是对苜 蓿进行基因表达研究一项可行的方案。这种方案比较对同一植株在逆境施加前 后分别取样来进行分析比较，尤其是当胁迫处理需要较长时间的时候或者试验 对象生命周期比较短的情况下，可以有效地降低由于生育阶段改变而造成的假 阳性。 2、苜蓿在进行一段时间的干旱胁迫后，会出现基因的差异表达。在 对苜蓿进行半个月的萎蔫-复原胁迫。诱导苜蓿基因中的抗旱基因表达。通过 RNA 的提取和 mRNA 差异显示技术筛选一共得到苜蓿的差异表达片断 32 条。干 旱胁迫诱导了公农三号根蘖型苜蓿抗逆机制的表达。 3、建立苜蓿基因差异 表达研究体系。理论上，通过简并的
12、3 条锚定引物和 8 条随机引物，即能够覆 盖所有的 mRNA，扩增出所有的 mRNA 片断，本试验利用 3 条锚定引物和 10 条随 机引物组合，通过 DDRT-PCR 方法研究正常和干旱胁迫下苜蓿的基因差异表达。 并通过 Reverse Northern 杂交技术有效地筛选和排除 DDRT-PCR 技术得到的真、 假阳性片断。 4、通过 DDRT-PCR 技术和 Reverse Northern 技术结合，筛选 得到三条苜蓿受干旱胁迫后差异表达的基因片断。经过克隆和基因序列测定， 互联网基因数据库比对。其中，一个与基因库中拟南芥水通道蛋白(water channel)控制基因同源性达到 9
13、9，为干旱诱导表达的重要基因。另外两个基 因片断与其它基因的同源性都比较低，可能为干旱诱导表达的新基因，有待进 一步研究。 本试验以公农三号根蘖型苜蓿为试验材料。经过温室条件下盆栽试验和人为干 旱条件的施加，用 mRNA 差异显示技术分析干旱胁迫下苜蓿基因表达与正常供给 水分的苜蓿基因表达的差异片断。通过斑点杂交技术筛选得到的基因片断，得 到差异片断后对其进行序列测定和分析等研究，得到以下结果： 1、由于苜 蓿具有扦插易成活的特性，在温室条件并且水分温度控制适当的情况下，无性 扦插苜蓿的成活率可以达到 90。故利用盆栽和无性繁殖得到同一株系的植株， 采用不同的处理和梯度来进行胁迫，并用分子生物
14、学的方法进行分析，是对苜 蓿进行基因表达研究一项可行的方案。这种方案比较对同一植株在逆境施加前 后分别取样来进行分析比较，尤其是当胁迫处理需要较长时间的时候或者试验 对象生命周期比较短的情况下，可以有效地降低由于生育阶段改变而造成的假 阳性。 2、苜蓿在进行一段时间的干旱胁迫后，会出现基因的差异表达。在 对苜蓿进行半个月的萎蔫-复原胁迫。诱导苜蓿基因中的抗旱基因表达。通过 RNA 的提取和 mRNA 差异显示技术筛选一共得到苜蓿的差异表达片断 32 条。干 旱胁迫诱导了公农三号根蘖型苜蓿抗逆机制的表达。 3、建立苜蓿基因差异表达研究体系。理论上，通过简并的 3 条锚定引物和 8 条随机引物，即
15、能够覆 盖所有的 mRNA，扩增出所有的 mRNA 片断，本试验利用 3 条锚定引物和 10 条随 机引物组合，通过 DDRT-PCR 方法研究正常和干旱胁迫下苜蓿的基因差异表达。 并通过 Reverse Northern 杂交技术有效地筛选和排除 DDRT-PCR 技术得到的真、 假阳性片断。 4、通过 DDRT-PCR 技术和 Reverse Northern 技术结合，筛选 得到三条苜蓿受干旱胁迫后差异表达的基因片断。经过克隆和基因序列测定， 互联网基因数据库比对。其中，一个与基因库中拟南芥水通道蛋白(water channel)控制基因同源性达到 99，为干旱诱导表达的重要基因。另外两
16、个基 因片断与其它基因的同源性都比较低，可能为干旱诱导表达的新基因，有待进 一步研究。 本试验以公农三号根蘖型苜蓿为试验材料。经过温室条件下盆栽试验和人为干 旱条件的施加，用 mRNA 差异显示技术分析干旱胁迫下苜蓿基因表达与正常供给 水分的苜蓿基因表达的差异片断。通过斑点杂交技术筛选得到的基因片断，得 到差异片断后对其进行序列测定和分析等研究，得到以下结果： 1、由于苜 蓿具有扦插易成活的特性，在温室条件并且水分温度控制适当的情况下，无性 扦插苜蓿的成活率可以达到 90。故利用盆栽和无性繁殖得到同一株系的植株， 采用不同的处理和梯度来进行胁迫，并用分子生物学的方法进行分析，是对苜 蓿进行基因表达研究一项可行的方案。这种方案比较对同一植株在逆境施加前 后分别取样来进行分析比较，尤其是当胁迫处理需要较长时间的时候或者试验 对象生命周期比较短的情况下，可以有效地降低由于生育阶段改变而造成的假 阳性。 2、苜蓿在进行一段时间的干旱胁迫后，会出
