《生物学拟南芥抗寒基因cbf1的克隆、表达载体的构建及鸡冠花离体再生体系的建立》由会员分享，可在线阅读，更多相关《生物学拟南芥抗寒基因cbf1的克隆、表达载体的构建及鸡冠花离体再生体系的建立（38页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、生物学生物学 细胞生物学专业毕业论文细胞生物学专业毕业论文 精品论文精品论文 拟南芥抗寒基因拟南芥抗寒基因CBF1CBF1 的克隆、表达载体的构建及鸡冠花离体再生体系的建立的克隆、表达载体的构建及鸡冠花离体再生体系的建立关键词：拟南芥关键词：拟南芥 CBF1CBF1 基因基因 抗旱基因抗旱基因 表达载体构建表达载体构建 鸡冠花鸡冠花 再生体系再生体系摘要：冷驯化是一个由数百个基因协同调控的复杂的生物过程。在这个由众多 基因构成的调控网络中，少数关键性调控基因控制着大量基因的表达。C- repeatbindingfactor(CBF)基因是冷诱导转录级联反应的调节子，该基因的过 表达植株表现出抗
2、寒性的增强。本实验以拟南芥野生型 ArabidopsisthalianaC24 为材料，从 C24 基因组中克隆 CBF1(C- repeatbindingfactor1)全序列，连接到表达载体 pCAMBIA1300 中，成功构建了 CBF1 的真核表达载体。此外，同时建立鸡冠花组织培养再生体系，用于后期 CBF1 的遗传转化和抗冻性转基因植株的获得。主要内容如下： 1 拟南芥 CBF1 基因的克隆与鉴定：根据 NCBI 数据库中的拟南芥 CBF1 基因序列，设计含 有限制性内切酶 XbaI 和 SacI 酶切位点的上、下游特异引物，通过 PCR 获得 CBF1 基因 767bp 全序列。将
3、获得的 CBF1 基因连接到 pMD18-T 载体中，用热激 法转化大肠杆菌感受态细胞 DH5，构建克隆载体 pMD18T-CBF1。通过蓝白斑筛 选、菌落 PCR 以及双酶切鉴定，测序，挑取正确的克隆进行下一步操作。 2CBF1 基因真核表达载体的构建：将 pMD18T-CBF1 和表达载体 pCAMBIA1300 均 用 XbaI 和 SacI 双酶切后回收目的基因 CBF1 和载体 pCAMBIA1300，T4 连接酶连 接过夜，热激转化大肠杆菌感受态 DH5，酶切鉴定获得阳性克隆。将重组质 粒 pCAMBIA1300-CBF1 热激转化农杆菌 GV3101，鉴定后的阳性菌株用于花卉植
4、物的遗传转化。 3 鸡冠花再生体系的建立：以鸡冠花顶芽为外植体，通过愈 伤组织和不定芽的诱导建立了再生体系。分化培养基为：MS+2.0/L6- BA+0.5/LNAA+0.5/LIAA，愈伤组织的诱导率为 86.7，不定芽的诱导率为 71.7。1/2MS 培养基生根诱导，生根率为 92。为下一步 CBF1 基因的遗传转 化奠定了实验基础。 我们成功克隆了 CBF1 基因并构建出 CBF1 真核表达载体， 建立了鸡冠花再生体系，为下一步转化鸡冠花等花卉植物、提高其抗冻性奠定 了坚实基础。正文内容正文内容冷驯化是一个由数百个基因协同调控的复杂的生物过程。在这个由众多基 因构成的调控网络中，少数关键
5、性调控基因控制着大量基因的表达。C- repeatbindingfactor(CBF)基因是冷诱导转录级联反应的调节子，该基因的过 表达植株表现出抗寒性的增强。本实验以拟南芥野生型 ArabidopsisthalianaC24 为材料，从 C24 基因组中克隆 CBF1(C- repeatbindingfactor1)全序列，连接到表达载体 pCAMBIA1300 中，成功构建了 CBF1 的真核表达载体。此外，同时建立鸡冠花组织培养再生体系，用于后期 CBF1 的遗传转化和抗冻性转基因植株的获得。主要内容如下： 1 拟南芥 CBF1 基因的克隆与鉴定：根据 NCBI 数据库中的拟南芥 CBF
6、1 基因序列，设计含 有限制性内切酶 XbaI 和 SacI 酶切位点的上、下游特异引物，通过 PCR 获得 CBF1 基因 767bp 全序列。将获得的 CBF1 基因连接到 pMD18-T 载体中，用热激 法转化大肠杆菌感受态细胞 DH5，构建克隆载体 pMD18T-CBF1。通过蓝白斑筛 选、菌落 PCR 以及双酶切鉴定，测序，挑取正确的克隆进行下一步操作。 2CBF1 基因真核表达载体的构建：将 pMD18T-CBF1 和表达载体 pCAMBIA1300 均 用 XbaI 和 SacI 双酶切后回收目的基因 CBF1 和载体 pCAMBIA1300，T4 连接酶连 接过夜，热激转化大肠
7、杆菌感受态 DH5，酶切鉴定获得阳性克隆。将重组质 粒 pCAMBIA1300-CBF1 热激转化农杆菌 GV3101，鉴定后的阳性菌株用于花卉植 物的遗传转化。 3 鸡冠花再生体系的建立：以鸡冠花顶芽为外植体，通过愈 伤组织和不定芽的诱导建立了再生体系。分化培养基为：MS+2.0/L6- BA+0.5/LNAA+0.5/LIAA，愈伤组织的诱导率为 86.7，不定芽的诱导率为 71.7。1/2MS 培养基生根诱导，生根率为 92。为下一步 CBF1 基因的遗传转 化奠定了实验基础。 我们成功克隆了 CBF1 基因并构建出 CBF1 真核表达载体， 建立了鸡冠花再生体系，为下一步转化鸡冠花等花
8、卉植物、提高其抗冻性奠定 了坚实基础。 冷驯化是一个由数百个基因协同调控的复杂的生物过程。在这个由众多基因构 成的调控网络中，少数关键性调控基因控制着大量基因的表达。C- repeatbindingfactor(CBF)基因是冷诱导转录级联反应的调节子，该基因的过 表达植株表现出抗寒性的增强。本实验以拟南芥野生型 ArabidopsisthalianaC24 为材料，从 C24 基因组中克隆 CBF1(C- repeatbindingfactor1)全序列，连接到表达载体 pCAMBIA1300 中，成功构建了 CBF1 的真核表达载体。此外，同时建立鸡冠花组织培养再生体系，用于后期 CBF1
9、 的遗传转化和抗冻性转基因植株的获得。主要内容如下： 1 拟南芥 CBF1 基因的克隆与鉴定：根据 NCBI 数据库中的拟南芥 CBF1 基因序列，设计含 有限制性内切酶 XbaI 和 SacI 酶切位点的上、下游特异引物，通过 PCR 获得 CBF1 基因 767bp 全序列。将获得的 CBF1 基因连接到 pMD18-T 载体中，用热激 法转化大肠杆菌感受态细胞 DH5，构建克隆载体 pMD18T-CBF1。通过蓝白斑筛 选、菌落 PCR 以及双酶切鉴定，测序，挑取正确的克隆进行下一步操作。 2CBF1 基因真核表达载体的构建：将 pMD18T-CBF1 和表达载体 pCAMBIA1300
10、 均 用 XbaI 和 SacI 双酶切后回收目的基因 CBF1 和载体 pCAMBIA1300，T4 连接酶连 接过夜，热激转化大肠杆菌感受态 DH5，酶切鉴定获得阳性克隆。将重组质 粒 pCAMBIA1300-CBF1 热激转化农杆菌 GV3101，鉴定后的阳性菌株用于花卉植 物的遗传转化。 3 鸡冠花再生体系的建立：以鸡冠花顶芽为外植体，通过愈伤组织和不定芽的诱导建立了再生体系。分化培养基为：MS+2.0/L6- BA+0.5/LNAA+0.5/LIAA，愈伤组织的诱导率为 86.7，不定芽的诱导率为 71.7。1/2MS 培养基生根诱导，生根率为 92。为下一步 CBF1 基因的遗传转
11、 化奠定了实验基础。 我们成功克隆了 CBF1 基因并构建出 CBF1 真核表达载体， 建立了鸡冠花再生体系，为下一步转化鸡冠花等花卉植物、提高其抗冻性奠定 了坚实基础。 冷驯化是一个由数百个基因协同调控的复杂的生物过程。在这个由众多基因构 成的调控网络中，少数关键性调控基因控制着大量基因的表达。C- repeatbindingfactor(CBF)基因是冷诱导转录级联反应的调节子，该基因的过 表达植株表现出抗寒性的增强。本实验以拟南芥野生型 ArabidopsisthalianaC24 为材料，从 C24 基因组中克隆 CBF1(C- repeatbindingfactor1)全序列，连接到
12、表达载体 pCAMBIA1300 中，成功构建了 CBF1 的真核表达载体。此外，同时建立鸡冠花组织培养再生体系，用于后期 CBF1 的遗传转化和抗冻性转基因植株的获得。主要内容如下： 1 拟南芥 CBF1 基因的克隆与鉴定：根据 NCBI 数据库中的拟南芥 CBF1 基因序列，设计含 有限制性内切酶 XbaI 和 SacI 酶切位点的上、下游特异引物，通过 PCR 获得 CBF1 基因 767bp 全序列。将获得的 CBF1 基因连接到 pMD18-T 载体中，用热激 法转化大肠杆菌感受态细胞 DH5，构建克隆载体 pMD18T-CBF1。通过蓝白斑筛 选、菌落 PCR 以及双酶切鉴定，测序
13、，挑取正确的克隆进行下一步操作。 2CBF1 基因真核表达载体的构建：将 pMD18T-CBF1 和表达载体 pCAMBIA1300 均 用 XbaI 和 SacI 双酶切后回收目的基因 CBF1 和载体 pCAMBIA1300，T4 连接酶连 接过夜，热激转化大肠杆菌感受态 DH5，酶切鉴定获得阳性克隆。将重组质 粒 pCAMBIA1300-CBF1 热激转化农杆菌 GV3101，鉴定后的阳性菌株用于花卉植 物的遗传转化。 3 鸡冠花再生体系的建立：以鸡冠花顶芽为外植体，通过愈 伤组织和不定芽的诱导建立了再生体系。分化培养基为：MS+2.0/L6- BA+0.5/LNAA+0.5/LIAA，
14、愈伤组织的诱导率为 86.7，不定芽的诱导率为 71.7。1/2MS 培养基生根诱导，生根率为 92。为下一步 CBF1 基因的遗传转 化奠定了实验基础。 我们成功克隆了 CBF1 基因并构建出 CBF1 真核表达载体， 建立了鸡冠花再生体系，为下一步转化鸡冠花等花卉植物、提高其抗冻性奠定 了坚实基础。 冷驯化是一个由数百个基因协同调控的复杂的生物过程。在这个由众多基因构 成的调控网络中，少数关键性调控基因控制着大量基因的表达。C- repeatbindingfactor(CBF)基因是冷诱导转录级联反应的调节子，该基因的过 表达植株表现出抗寒性的增强。本实验以拟南芥野生型 Arabidops
15、isthalianaC24 为材料，从 C24 基因组中克隆 CBF1(C- repeatbindingfactor1)全序列，连接到表达载体 pCAMBIA1300 中，成功构建了 CBF1 的真核表达载体。此外，同时建立鸡冠花组织培养再生体系，用于后期 CBF1 的遗传转化和抗冻性转基因植株的获得。主要内容如下： 1 拟南芥 CBF1 基因的克隆与鉴定：根据 NCBI 数据库中的拟南芥 CBF1 基因序列，设计含 有限制性内切酶 XbaI 和 SacI 酶切位点的上、下游特异引物，通过 PCR 获得 CBF1 基因 767bp 全序列。将获得的 CBF1 基因连接到 pMD18-T 载体中
16、，用热激 法转化大肠杆菌感受态细胞 DH5，构建克隆载体 pMD18T-CBF1。通过蓝白斑筛 选、菌落 PCR 以及双酶切鉴定，测序，挑取正确的克隆进行下一步操作。 2CBF1 基因真核表达载体的构建：将 pMD18T-CBF1 和表达载体 pCAMBIA1300 均用 XbaI 和 SacI 双酶切后回收目的基因 CBF1 和载体 pCAMBIA1300，T4 连接酶连 接过夜，热激转化大肠杆菌感受态 DH5，酶切鉴定获得阳性克隆。将重组质 粒 pCAMBIA1300-CBF1 热激转化农杆菌 GV3101，鉴定后的阳性菌株用于花卉植 物的遗传转化。 3 鸡冠花再生体系的建立：以鸡冠花顶芽为外植体，通过愈 伤组织和不定芽的诱导建立了再生体系。分化培养基为：MS+2.0/L6- BA+0.5/LNAA+0.5/LIAA，愈伤组织的诱导率为 86.7，不定芽的诱导率为 71.7。1/2MS
