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1、生态安全专业毕业论文生态安全专业毕业论文 精品论文精品论文 家蚕载脂蛋白家蚕载脂蛋白Apolipophorin-Apolipophorin-识别功能的初步研究识别功能的初步研究关键词：家蚕关键词：家蚕 模式识别蛋白模式识别蛋白 原核表达原核表达 识别功能识别功能 抗菌活性抗菌活性摘要：昆虫 Apolipophorin-(ApoLp-)属载脂蛋白家庭成员，近期有研究表 明该蛋白为多功能蛋白，在昆虫免疫信号识别中也发挥病原识别的功能。本研 究以家蚕(Bombyx mori) P50 来源的 ApoLp-为研究对象，将 apoLp-和 gfp 基因融合后在大肠杆菌 BL21(DE3)中进行表达，用亲
2、和层析纯化 ApoLp-GFP 融合蛋白，对 ApoLp-GFP 融合蛋白进行功能研究，为 ApoLp-在昆虫免疫 系统的信号识别转导中的研究提供了新的证据。 已报道家蚕 P50 ApoLp- 的 mRNA 序列(Genbank 登录号：U59244)长 623bp，ORF 编码 186 个氨基酸(aa)， 软件分析和文献报道有两种不同长度的信号肽，从 N 端开始分别为 17 个氨基酸 和 22 个氨基酸进行 C-末端 GFP 融合表达，结果发现去除不同信号肽的原核表 达都很好。SDS-PAGE 和 western bloting 验证，ApoLp-GFP 获得正确的表达， 为了验证 ApoL
3、p-蛋白的病原模式识别功能，将亲和层析纯化的 GFP 融合蛋白 分别与构巢曲霉(Aspergillus nidulans)、金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)、球孢白僵菌(Beauveria bassiana)、大肠杆菌(Escherichia coli)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)等微生物细胞进行结合试验，用荧光显微镜观察发现 ApoLp-蛋 白与构巢曲霉、金龟子绿僵菌、球孢白僵菌孢子结合明显，但不结合大肠杆菌、 枯草芽孢杆菌和酿酒酵母细胞。为了证明 ApoLp-蛋白的识别在昆虫免
4、疫系统 中的关键作用，将 ApoLp-蛋白与金龟子绿僵菌结合，注射到家蚕体内，做抑 菌试验，结果发现结合了 ApoLp-蛋白的金龟子绿僵菌孢子注射家蚕，诱导后 的血淋巴有明显的抑菌效果，说明 ApoLp-蛋白在昆虫免疫信号识别及免疫防 御过程中发挥着重要的作用。正文内容正文内容昆虫 Apolipophorin-(ApoLp-)属载脂蛋白家庭成员，近期有研究表明 该蛋白为多功能蛋白，在昆虫免疫信号识别中也发挥病原识别的功能。本研究 以家蚕(Bombyx mori) P50 来源的 ApoLp-为研究对象，将 apoLp-和 gfp 基 因融合后在大肠杆菌 BL21(DE3)中进行表达，用亲和层析
5、纯化 ApoLp-GFP 融 合蛋白，对 ApoLp-GFP 融合蛋白进行功能研究，为 ApoLp-在昆虫免疫系 统的信号识别转导中的研究提供了新的证据。 已报道家蚕 P50 ApoLp-的 mRNA 序列(Genbank 登录号：U59244)长 623bp，ORF 编码 186 个氨基酸(aa)，软 件分析和文献报道有两种不同长度的信号肽，从 N 端开始分别为 17 个氨基酸和 22 个氨基酸进行 C-末端 GFP 融合表达，结果发现去除不同信号肽的原核表达都 很好。SDS-PAGE 和 western bloting 验证，ApoLp-GFP 获得正确的表达，为 了验证 ApoLp-蛋白
6、的病原模式识别功能，将亲和层析纯化的 GFP 融合蛋白分 别与构巢曲霉(Aspergillus nidulans)、金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)、球孢白僵菌(Beauveria bassiana)、大肠杆菌(Escherichia coli)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)等微生物细胞进行结合试验，用荧光显微镜观察发现 ApoLp-蛋 白与构巢曲霉、金龟子绿僵菌、球孢白僵菌孢子结合明显，但不结合大肠杆菌、 枯草芽孢杆菌和酿酒酵母细胞。为了证明 ApoLp-蛋白的识别在昆虫免疫系统
7、中的关键作用，将 ApoLp-蛋白与金龟子绿僵菌结合，注射到家蚕体内，做抑 菌试验，结果发现结合了 ApoLp-蛋白的金龟子绿僵菌孢子注射家蚕，诱导后 的血淋巴有明显的抑菌效果，说明 ApoLp-蛋白在昆虫免疫信号识别及免疫防 御过程中发挥着重要的作用。 昆虫 Apolipophorin-(ApoLp-)属载脂蛋白家庭成员，近期有研究表明该蛋 白为多功能蛋白，在昆虫免疫信号识别中也发挥病原识别的功能。本研究以家 蚕(Bombyx mori) P50 来源的 ApoLp-为研究对象，将 apoLp-和 gfp 基因融 合后在大肠杆菌 BL21(DE3)中进行表达，用亲和层析纯化 ApoLp-GF
8、P 融合蛋 白，对 ApoLp-GFP 融合蛋白进行功能研究，为 ApoLp-在昆虫免疫系统的 信号识别转导中的研究提供了新的证据。 已报道家蚕 P50 ApoLp-的 mRNA 序列(Genbank 登录号：U59244)长 623bp，ORF 编码 186 个氨基酸(aa)，软件分 析和文献报道有两种不同长度的信号肽，从 N 端开始分别为 17 个氨基酸和 22 个氨基酸进行 C-末端 GFP 融合表达，结果发现去除不同信号肽的原核表达都很 好。SDS-PAGE 和 western bloting 验证，ApoLp-GFP 获得正确的表达，为了 验证 ApoLp-蛋白的病原模式识别功能，将
9、亲和层析纯化的 GFP 融合蛋白分别 与构巢曲霉(Aspergillus nidulans)、金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)、 球孢白僵菌(Beauveria bassiana)、大肠杆菌(Escherichia coli)、枯草芽孢 杆菌(Bacillus subtilis)和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)等微生物细 胞进行结合试验，用荧光显微镜观察发现 ApoLp-蛋白与构巢曲霉、金龟子绿 僵菌、球孢白僵菌孢子结合明显，但不结合大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和酿酒酵 母细胞。为了证明 ApoLp-蛋白的识别在昆虫免疫系统中的关键作用，将
10、ApoLp-蛋白与金龟子绿僵菌结合，注射到家蚕体内，做抑菌试验，结果发现 结合了 ApoLp-蛋白的金龟子绿僵菌孢子注射家蚕，诱导后的血淋巴有明显的 抑菌效果，说明 ApoLp-蛋白在昆虫免疫信号识别及免疫防御过程中发挥着重 要的作用。昆虫 Apolipophorin-(ApoLp-)属载脂蛋白家庭成员，近期有研究表明该蛋 白为多功能蛋白，在昆虫免疫信号识别中也发挥病原识别的功能。本研究以家 蚕(Bombyx mori) P50 来源的 ApoLp-为研究对象，将 apoLp-和 gfp 基因融 合后在大肠杆菌 BL21(DE3)中进行表达，用亲和层析纯化 ApoLp-GFP 融合蛋 白，对
11、ApoLp-GFP 融合蛋白进行功能研究，为 ApoLp-在昆虫免疫系统的 信号识别转导中的研究提供了新的证据。 已报道家蚕 P50 ApoLp-的 mRNA 序列(Genbank 登录号：U59244)长 623bp，ORF 编码 186 个氨基酸(aa)，软件分 析和文献报道有两种不同长度的信号肽，从 N 端开始分别为 17 个氨基酸和 22 个氨基酸进行 C-末端 GFP 融合表达，结果发现去除不同信号肽的原核表达都很 好。SDS-PAGE 和 western bloting 验证，ApoLp-GFP 获得正确的表达，为了 验证 ApoLp-蛋白的病原模式识别功能，将亲和层析纯化的 GF
12、P 融合蛋白分别 与构巢曲霉(Aspergillus nidulans)、金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)、 球孢白僵菌(Beauveria bassiana)、大肠杆菌(Escherichia coli)、枯草芽孢 杆菌(Bacillus subtilis)和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)等微生物细 胞进行结合试验，用荧光显微镜观察发现 ApoLp-蛋白与构巢曲霉、金龟子绿 僵菌、球孢白僵菌孢子结合明显，但不结合大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和酿酒酵 母细胞。为了证明 ApoLp-蛋白的识别在昆虫免疫系统中的关键作用，将 ApoLp-蛋白与金
13、龟子绿僵菌结合，注射到家蚕体内，做抑菌试验，结果发现 结合了 ApoLp-蛋白的金龟子绿僵菌孢子注射家蚕，诱导后的血淋巴有明显的 抑菌效果，说明 ApoLp-蛋白在昆虫免疫信号识别及免疫防御过程中发挥着重 要的作用。 昆虫 Apolipophorin-(ApoLp-)属载脂蛋白家庭成员，近期有研究表明该蛋 白为多功能蛋白，在昆虫免疫信号识别中也发挥病原识别的功能。本研究以家 蚕(Bombyx mori) P50 来源的 ApoLp-为研究对象，将 apoLp-和 gfp 基因融 合后在大肠杆菌 BL21(DE3)中进行表达，用亲和层析纯化 ApoLp-GFP 融合蛋 白，对 ApoLp-GFP
14、 融合蛋白进行功能研究，为 ApoLp-在昆虫免疫系统的 信号识别转导中的研究提供了新的证据。 已报道家蚕 P50 ApoLp-的 mRNA 序列(Genbank 登录号：U59244)长 623bp，ORF 编码 186 个氨基酸(aa)，软件分 析和文献报道有两种不同长度的信号肽，从 N 端开始分别为 17 个氨基酸和 22 个氨基酸进行 C-末端 GFP 融合表达，结果发现去除不同信号肽的原核表达都很 好。SDS-PAGE 和 western bloting 验证，ApoLp-GFP 获得正确的表达，为了 验证 ApoLp-蛋白的病原模式识别功能，将亲和层析纯化的 GFP 融合蛋白分别
15、与构巢曲霉(Aspergillus nidulans)、金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)、 球孢白僵菌(Beauveria bassiana)、大肠杆菌(Escherichia coli)、枯草芽孢 杆菌(Bacillus subtilis)和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)等微生物细 胞进行结合试验，用荧光显微镜观察发现 ApoLp-蛋白与构巢曲霉、金龟子绿 僵菌、球孢白僵菌孢子结合明显，但不结合大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和酿酒酵 母细胞。为了证明 ApoLp-蛋白的识别在昆虫免疫系统中的关键作用，将 ApoLp-蛋白与金龟子绿僵菌结合，注
16、射到家蚕体内，做抑菌试验，结果发现 结合了 ApoLp-蛋白的金龟子绿僵菌孢子注射家蚕，诱导后的血淋巴有明显的 抑菌效果，说明 ApoLp-蛋白在昆虫免疫信号识别及免疫防御过程中发挥着重 要的作用。 昆虫 Apolipophorin-(ApoLp-)属载脂蛋白家庭成员，近期有研究表明该蛋 白为多功能蛋白，在昆虫免疫信号识别中也发挥病原识别的功能。本研究以家蚕(Bombyx mori) P50 来源的 ApoLp-为研究对象，将 apoLp-和 gfp 基因融 合后在大肠杆菌 BL21(DE3)中进行表达，用亲和层析纯化 ApoLp-GFP 融合蛋 白，对 ApoLp-GFP 融合蛋白进行功能研究，为 ApoLp-在昆虫免疫系统的 信号识别转导中的研究提供了新的证据。 已报道家蚕 P50 ApoLp-的 mRNA 序列(
